شركة كياجين، 231124، مجموعة استنساخ تفاعل البوليميراز المتسلسل من كياجين (40)

لـ 40 تفاعلًا: 2x مزيج الربط الرئيسي (200 ميكرولتر)، ناقل الاستنساخ pDrive (2.0 ميكروغرام)، ماء مقطر (1.7 مل)

سمات

- 40 دقيقة فقط من منتج تفاعل البوليميراز المتسلسل إلى الخلايا المزروعة
- مزيج الربط الرئيسي الجاهز للاستخدام
- تهجين UA عالي التخصص من أجل استنساخ فعال
- خلايا مؤهلة مزودة بمجموعة QIAGEN PCR Cloning plus Kit
- الزرع الفوري للخلايا المؤهلة المحولة

تفاصيل المنتج

توفر مجموعات استنساخ تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) من QIAGEN تفاعلات ربط جاهزة للاستخدام، تحتوي على نواقل استنساخ خطية تحمل نهايات U بارزة عند كل طرف 3'، مما يسمح بربط منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل التي تحتوي على نهايات A بارزة عند الطرف 3' واستنساخها مباشرةً بكفاءة وسرعة عاليتين. كما توفر مجموعة QIAGEN PCR Cloning Plus خلايا E. coli مؤهلة ووسط SOC لتحويل فعال.

أداء

مجموعة استنساخ الحمض النووي بتقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل من شركة كياجين: مجموعة استنساخ الحمض النووي بوساطة إنزيم توبويزوميراز
40 دقيقة: ≥70 دقيقة

تجمع مجموعة QIAGEN PCR Cloning Kit بين أحدث تقنيات الربط ومجموعة فريدة من الميزات الموفرة للوقت، مما يتيح استنساخًا سريعًا وسهلًا وفعالًا للغاية لمنتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) المُنتجة باستخدام إنزيم Taq وغيره من بوليميرازات الحمض النووي غير المُصححة. وقد تفوقت مجموعة QIAGEN PCR Cloning Kit على مجموعات أخرى تم اختبارها من موردين آخرين، مما يضمن نتائج ناجحة. يُعد الاستنساخ في ناقل الاستنساخ pDrive أسرع بكثير مقارنةً بنواقل الاستنساخ القائمة على إنزيم TA (انظر الشكل "استنساخ عالي التخصص مع وقت ربط أقصر يبلغ 30 دقيقة" والجدول "الوقت من منتج تفاعل البوليميراز المتسلسل إلى الخلايا المزروعة لطرق الاستنساخ المختلفة").

الوقت اللازم من إنتاج ناتج تفاعل البوليميراز المتسلسل إلى زراعة الخلايا لطرق الاستنساخ المختلفة

يتم تزويد مجموعة QIAGEN PCR Cloning plus Kit بخلايا QIAGEN EZ Competent Cells، والتي لا تتطلب فترة الحضانة الطويلة هذه لتحقيق تحويل عالي الكفاءة (>10 8 وحدة تشكيل مستعمرة (CFU) لكل ميكروغرام من الحمض النووي؛ انظر الشكل "التحويل بدون فترة حضانة للاستعادة").

مبدأ

المكون: مجموعة استنساخ تفاعل البوليميراز المتسلسل من QIAGEN
متجه استنساخ محرك الأقراص pDrive: +
مزيج الربط الرئيسي: +
الماء المقطر: +
خلايا QIAGEN EZ المؤهلة: –
متوسط ​​SOC: –

يوفر ناقل الاستنساخ pDrive (انظر الشكل "ناقل الاستنساخ pDrive") استنساخًا عالي الكفاءة لمنتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) من خلال تهجين UA. يُزوَّد الناقل بشكل خطي مع نتوء U في كل طرف 3'، والذي يتهجن بانتقائية عالية مع نتوء A لمنتجات PCR الناتجة عن Taq وبوليميرازات الحمض النووي الأخرى غير المصححة. يتميز ناقل الاستنساخ pDrive (انظر الشكل "ناقل الاستنساخ pDrive") بعدد من الميزات المفيدة المصممة لتسهيل تحليل منتجات PCR المستنسخة. تشمل هذه الميزات عددًا كبيرًا من مواقع التعرف الفريدة لإنزيمات التقييد، ومواقع بادئات التسلسل العالمية، ومحفزات النسخ في المختبر. بالإضافة إلى ذلك، يسمح الناقل بالاختيار باستخدام الأمبيسيلين والكاناميسين، فضلًا عن فحص المستعمرات المؤتلفة باستخدام تقنية اللون الأزرق/الأبيض.

تُستنسخ نواتج تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) بكفاءة عالية في ناقل الاستنساخ pDrive في وقت أقل من الوقت اللازم لناقلات الاستنساخ القائمة على TA (انظر الشكل "استنساخ عالي التخصص بوقت ربط أقصر يبلغ 30 دقيقة"). علاوة على ذلك، ولأن الثايمين (T) هو القاعدة الأكثر عرضة للتهجين مع القواعد غير المتكاملة (مثل الجوانين، والسيتوزين، والثايمين)، فإن النواقل ذات الطرف المتدلي للثايمين تكون أكثر عرضة للتهجين الذاتي أو لاستنساخ البادئات أو البادئات المهجنة، مما يؤدي إلى زيادة عدد المستعمرات ذات النتائج الإيجابية الكاذبة. في المقابل، تشير كفاءة الاستنساخ العالية لناقل الاستنساخ pDrive إلى أن اليوراسيل (U) لديه قدرة تحمل أقل للاقتران غير النوعي للقواعد.

تم تصميم مزيج الربط الرئيسي، الذي يتم توفيره بتنسيق جاهز للاستخدام، خصيصًا لتوفير ظروف التهجين المثلى من أجل الاستنساخ الفعال.

يُسهّل استخدام خلايا QIAGEN EZ المُؤهلة في مجموعة QIAGEN PCR Cloning plus عملية الاستنساخ ويجعلها أسرع وأكثر ملاءمة. عادةً ما تُحضن الخلايا المُحوّلة في وسط SOC للتعافي ولإتاحة الوقت الكافي لها لإظهار مقاومة المضادات الحيوية. في المقابل، لا تتطلب خلايا QIAGEN EZ المُؤهلة فترة التحضين الطويلة هذه لتحقيق تحويل عالي الكفاءة (أكثر من 10⁸ وحدة تشكيل مستعمرة (CFU) لكل ميكروغرام من الحمض النووي؛ انظر الشكل "التحويل بدون فترة تحضين للتعافي").

المكونات المرفقة مع مجموعات استنساخ تفاعل البوليميراز المتسلسل من QIAGEN

إجراء

ببساطة، امزج ناتج تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) مباشرةً مع ناقل الاستنساخ pDrive ومزيج الربط الرئيسي، ثم حضّن المزيج، وأضف تفاعل الربط إلى الخلايا المؤهلة للتحويل. لا تتطلب خلايا QIAGEN EZ المؤهلة، المتوفرة في مجموعة QIAGEN PCR Cloning plus Kit، فترة حضانة لاستعادة التوازن في وسط SOC بعد التحويل، وبالتالي يمكن زرعها مباشرةً على أطباق الآجار/الأمبيسيلين.

تُعدّ عملية استنساخ الحمض النووي بتقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) من QIAGEN (انظر المخطط الانسيابي "عملية استنساخ الحمض النووي بتقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل من QIAGEN") أسرع بكثير من طرق الاستنساخ التقليدية التي تعتمد على إنزيم توبويزوميراز، أو على إنزيم TA، أو على الأطراف اللاصقة أو غير اللاصقة. تستغرق عملية الربط 30 دقيقة، بينما تستغرق عملية التحويل والزرع باستخدام خلايا QIAGEN EZ المؤهلة 10 دقائق فقط، مما يجعل العملية الكاملة - من ناتج تفاعل البوليميراز المتسلسل إلى الخلايا المزروعة - تستغرق 40 دقيقة فقط.

التطبيقات

تُعدّ مجموعات استنساخ الحمض النووي بتقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) من QIAGEN مناسبة لاستنساخ أي منتج PCR يحتوي على قاعدة أدينين واحدة بارزة عند كل طرف 3'. يمكن استنساخ منتجات PCR المُنتجة باستخدام إنزيم Taq وغيره من بوليميرازات الحمض النووي غير المُصحِّحة مباشرةً دون أي تحضير. أما المجموعات التي تحتوي على بوليميرازات الحمض النووي المُصحِّحة، مثل مجموعة HotStar HiFidelity Polymerase Kit ومجموعة QIAGEN LongRange PCR Kit، فتُنتج منتجات PCR ذات قواعد أدينين بارزة، وهي مناسبة جدًا للاستخدام المباشر مع مجموعات استنساخ الحمض النووي بتقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل من QIAGEN.