شركة كياجين، 249910، اختبار كوانتينوفا LNA PCR المخصص (200)

مزيج بادئات مخصص خاص بالـ mRNA/lncRNA في أنبوب واحد؛ لـ 200 تفاعل qPCR أو 400 تفاعل dPCR

سمات

- فحوصات عالية الأداء تم إنشاؤها باستخدام أداة تصميم ملائمة ونفس الخوارزمية المستخدمة في فحوصاتنا المصممة مسبقًا
- فحوصات مخصصة لتناسب هدفك واحتياجاتك بدقة، بما في ذلك الكشف عن نسخ جديدة أو شكل متغاير أو متغير تضفير محدد
- القدرة على تقديم ما يصل إلى 10 تسلسلات وتصميم فحوصات للتمييز بين جميع التسلسلات أو الكشف عنها.
- بادئات قصيرة معززة بتقنية LNA تتميز بخصوصية عالية ومرونة أكبر في تحديد موضع الفحص
- التحديد الكمي المطلق لتغيرات التعبير الجيني باستخدام تقنية dPCR وجهاز QIAcuity ومجموعة QIAcuity EG PCR Kit

تفاصيل المنتج

توفر فحوصات QuantiNova LNA PCR المخصصة تحليلًا دقيقًا وحساسًا للتعبير الجيني لأي هدف من الحمض النووي الريبوزي (RNA) باستخدام تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي (PCR) المحسّنة بتقنية LNA والقائمة على صبغة EvaGreen. تُوفر خوارزمية التصميم القوية لدينا دعمًا كاملًا لقاعدة بيانات Ensembl للأهداف البشرية والفأرية والجرذية، وتُبسط عملية إنشاء الفحوصات. تُعد الفحوصات المخصصة مناسبة تمامًا للأهداف التي لا تتوفر لها فحوصات مُصممة مسبقًا، وللتمييز بين المتغيرات الناتجة عن التضفير، وللتحقق من الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) أو الحمض النووي الريبوزي غير المشفر الطويل (lncRNA) الجديد. بالنسبة لتقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي (PCR)، قمنا بتحسين الفحوصات باستخدام مجموعات QIAcuity EG PCR وجهاز QIAcuity، وأنشأنا سير عمل بسيطًا وسريعًا للقياس الكمي المطلق يستغرق ساعتين فقط.

هل تخطط لاستخدام فحوصات QuantiNova LNA PCR المخصصة لتحليل qPCR؟ يمكنك العثور على تفاصيل المنتج والأداء الخاصة بـ qPCR على صفحة كتالوج qPCR المخصصة.

هل تحتاج إلى عرض سعر لمشروعك البحثي أو ترغب في مناقشة مشروعك مع فريقنا المتخصص؟ تواصل معنا الآن!

أداء

تحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي المُحسَّن باستخدام مجموعات QIAcuity EG PCR وجهاز QIAcuity

طُوِّرت فحوصات QuantiNova LNA PCR لتوفير تضخيم عالي التخصص للهدف. ويمكن قياس هذا التضخيم باستخدام طريقتين لتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR): تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR) باستخدام أجهزة التدوير الحراري القياسية في الوقت الحقيقي، وتفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي (digital PCR) باستخدام جهاز QIAcuity ومجموعة QIAcuity EG PCR (انظر الشكل: استخدام فحوصات QuantiNova LNA PCR لتفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي). بعد تخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) باستخدام مجموعة QuantiTect Reverse Transcription Kit، يوفر تفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي قياسًا كميًا دقيقًا للغاية للهدف، حيث يكشف حتى أصغر تغيرات التعبير عند أدنى التركيزات. وقد تم التحقق تجريبيًا من صحة مجموعة فرعية من الفحوصات الرئيسية على جهاز QIAcuity.

فحوصات معززة بتقنية LNA عالية الحساسية والنوعية

تم تصميم فحوصات QuantiNova LNA PCR المخصصة باستخدام معايير تصميم صارمة وخوارزميات تم التحقق من صحتها في المختبر لتقديم أعلى مستوى من الخصوصية والكفاءة للحصول على نتائج تحليل التعبير الجيني الموثوقة والدقيقة.

تزيد قوة ارتباط قواعد LNA العالية من مرونة وضع البادئات على النسخة، مما يسمح لنا باستخدام التموضع الذكي لتصميم فحوصات لأهداف يصعب تحليلها. وهذا يوفر تمييزًا أفضل للأهداف وقياسًا كميًا دقيقًا وموثوقًا، حتى بالنسبة للأهداف الغنية بـ AU، والنسخ منخفضة الوفرة، والأهداف ذات البنية الثانوية العالية، والعينات شديدة التعقيد.

تضمن الحساسية العالية لهذه الاختبارات كفاءة تضخيم ممتازة حتى مع جزيء RNA واحد، مما يُسهّل عليك اكتشاف الأهداف منخفضة الوفرة، مثل lncRNAs، من كمية أقل من المادة الأولية. كما تُوفر الخصوصية المُحسّنة الناتجة عن التوزيع الذكي لـ LNA نسبة إشارة إلى ضوضاء عالية، مما يسمح بالتمييز بين التسلسلات التي تختلف بنوكليوتيد واحد فقط، ويُزيل التضخيم غير النوعي وتكوين ثنائيات البادئات.

تم إنشاؤه باستخدام خوارزمية تصميم LNA متطورة

بفضل خبرتنا الممتدة لعشرين عامًا في تصميم مضخمات الحمض النووي (LNA)، تمكّنا من تطوير وتحسين خوارزمية تصميم مضخمات الحمض النووي المتطورة لدينا، والتي تتضمن أكثر من 50 معيارًا مختلفًا - تم التحقق من صحتها جميعًا في المختبر وفقًا لمعايير أداء صارمة للغاية - لضمان الحصول على أفضل اختبار للكشف الناجح عن الهدف. وقد استُخدمت هذه الخوارزمية الخاصة لتصميم أكثر من 1.3 مليون اختبار، وهي متاحة لتلبية طلباتكم الخاصة من خلال أداة إنشاء الاختبارات المخصصة سهلة الاستخدام في GeneGlobe.

مبدأ

تفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي القائم على EvaGreen

للقياس الكمي المطلق باستخدام تقنية dPCR، استخدم فحوصات QuantiNova LNA PCR مع مجموعة QIAcuity EG PCR، التي تعتمد على الكشف الفلوري باستخدام صبغة EvaGreen. EvaGreen هي صبغة متداخلة ترتبط بالحمض النووي المزدوج (على غرار SYBR® Green) وتُصدر فلورة عند ارتباطها به. يوفر استخدام تقنية dPCR القائمة على EvaGreen سهولةً وتوفيرًا، إذ يكفي استخدام مجموعة البادئات لتضخيم المنتج والكشف عنه. كما يوفر دقةً أعلى في تفاعل dPCR، الذي يُقسّم إلى آلاف الأجزاء في صفيحة dPCR النانوية، مما يجعل تركيز البادئات المطلوب لتفاعل dPCR نصف التركيز المطلوب لتقنية qPCR.

عملية التصميم حسب الطلب

تتيح لك أداة تصميم فحوصات تفاعل البوليميراز المتسلسل المخصصة بتقنية LNA من QuantiNova تصميم فحوصات تفاعل البوليميراز المتسلسل عالية الحساسية والنوعية والمعززة بتقنية LNA بسهولة لأي mRNA أو lncRNA غير متوفر كفحص مصمم مسبقًا. باستخدام خوارزمية تصميم فحوصات تفاعل البوليميراز المتسلسل المتقدمة من QuantiNova، يتم تقييم العديد من تركيبات الفحوصات بناءً على أكثر من 50 معيارًا مختلفًا للعثور على الفحص الأمثل لهدفك في غضون دقائق معدودة. صُممت الأداة لأهداف mRNA وlncRNA البشرية والفأرية والجرذية التي لا يقل طولها عن 55 نيوكليوتيدًا، وتُجري بحثًا برمجيًا (BLAST) في قواعد البيانات ذات الصلة بالأنواع، بما في ذلك Ensembl وRefSeq. بالنسبة للأهداف الجينية المعروفة، تُصمم الفحوصات افتراضيًا بحيث تغطي الإنترونات، على غرار الفحوصات المصممة مسبقًا، لمنع خطر تضخيم الحمض النووي الجينومي.

خيارات تصميم فحص متطورة وفريدة من نوعها

تتضمن أداة تصميم المقايسات المخصصة خيارات لإنشاء تصميمات خاصة بالنسخ الجينية للتمييز بين المتغيرات الناتجة عن التضفير، أو تعدد أشكال النوكليوتيدات المفردة، أو الأشكال المتغايرة. كما يمكن إنشاء تصميمات لمقايسات مشتركة بين جميع متغيرات النسخ الجينية. يمكنك إدخال ما يصل إلى 10 تسلسلات مستهدفة مختلفة في وقت واحد، وتصميم إما 10 مقايسات مختلفة، أو تصميم مقايسة مشتركة لجميع النسخ الجينية ذات الصلة.

يمكن دمج فحوصات الجينات المرجعية بسهولة مع الفحوصات المخصصة.

تتوفر مجموعة واسعة من فحوصات الجينات المرجعية المُثبتة وظيفيًا للإنسان والفأر والجرذ، مما يُتيح توحيد البيانات بجودة عالية وضمان نتائج موثوقة. تستهدف هذه الفحوصات جزيئات الحمض النووي الريبوزي المشفر الداخلي، والحمض النووي الريبوزي الطويل غير المشفر، وجزيئات الحمض النووي الريبوزي النووي الصغير، والتي تُعبر عنها عادةً بشكل دائم في مجموعة متنوعة من الأنسجة.

تطبيع نتائج تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي للـ mRNA/lncRNA

تُزيل عملية التوحيد التباين التقني والبيولوجي بين العينات غير المرتبط بالتغيرات البيولوجية قيد الدراسة. ويُعدّ التوحيد الصحيح أمراً بالغ الأهمية لتحليل النتائج وتفسيرها بدقة. وفي أغلب الأحيان، تُستخدم جينات مرجعية مستقرة التعبير لأغراض التوحيد.

يُنصح عمومًا باختبار عدة جينات مرجعية داخلية مُرشحة قبل البدء بتحليل التعبير الجيني الفعلي للـ mRNA/lncRNA. يجب اختيار هذه الجينات من بين الجينات المتوقع أن يكون تعبيرها ثابتًا في جميع العينات قيد الدراسة. يمكن أن تكون هذه الجينات عبارة عن mRNAs أو lncRNAs ذات تعبير ثابت، يتم اختيارها بناءً على الدراسات المنشورة أو البيانات الموجودة مسبقًا (مثل فحص لوحات NGS أو qPCR). يوفر نظام QuantiNova LNA PCR فحوصات جينية مرجعية مُعتمدة للـ RNAs التي تميل إلى أن يكون تعبيرها ثابتًا، وبالتالي فهي مرشحة جيدة كجينات مرجعية.

ينبغي التحقق تجريبياً من جميع الجينات المرجعية المرشحة لكل دراسة. أحد الخيارات المتاحة لتطبيع لوحة تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) عند تحليل عدد كبير من الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) والحمض النووي الريبوزي غير المشفر الطويل (lncRNA) هو التطبيع مقابل المتوسط ​​العام - أي متوسط ​​جميع الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) والحمض النووي الريبوزي غير المشفر الطويل (lncRNA) المُعبر عنه. يُعد هذا خياراً جيداً في العينات ذات معدل الاستدعاء العالي (الجينات المُعبر عنها)، ولكن يجب استخدامه بحذر في العينات ذات معدلات الاستدعاء المنخفضة. كما أنه ليس خياراً جيداً في العينات التي يتغير فيها مستوى التعبير الجيني العام. يمكن الاطلاع على المزيد من الإرشادات حول التطبيع في مركز تحليل بيانات GeneGlobe.

تحليل بيانات تفاعل البوليميراز الرقمي

تُستخدم مجموعة برامج QIAcuity لتحليل بيانات dPCR وتتضمن اختبار التعبير الجيني، والذي يوفر نتائجك كنسبة تغيير ونسبة تنظيم مع أشكال جاهزة للنشر.

إجراء

تقنية RT-dPCR ثنائية الخطوات

تُحقق أفضل النتائج عند إجراء تفاعل النسخ العكسي باستخدام مجموعة QuantiTect Reverse Transcription Kit (أرقام الكتالوج: 205311، 205313، 205314). لا يُنصح باستخدام مجموعة QuantiNova Reverse Transcription Kit. بعد ذلك، يتم قياس كمية الحمض النووي التكميلي الناتج (cDNA) باستخدام تقنية dPCR، وذلك باستخدام مزيج QIAcuity EG PCR Kit الرئيسي مع اختيارك من اختبار QuantiNova LNA PCR Assay.

ملاحظة هامة: كميات التفاعل الموضحة بين قوسين بعد أسماء نواتج التحليل خاصة باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR). يتطلب تفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي (dPCR) نصف تركيز البادئات فقط، ولكن أحجام التفاعل تختلف. باستخدام لوحة QIAcuity Nanoplate 26K، يمكنك إجراء نفس عدد التفاعلات الموضحة؛ وباستخدام لوحة Nanoplate 8.5K، يمكنك إجراء 3.3 أضعاف هذا العدد. يُرجى الرجوع إلى دليل استخدام QIAcuity للاطلاع على تعليمات dPCR.

الشحن والتوصيل

تُشحن فحوصات QuantiNova LNA PCR في درجة حرارة الغرفة. تُسلّم الفحوصات المتوفرة في المخزون خلال 1-5 أيام. خلال فترة الوصول المبكر، يُتوقع أن تكون مدة التسليم أطول.

ما تحتاجه للبدء في استخدام تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي (PCR) مع نظام QuantiNova LNA PCR

النسخ العكسي: مجموعة النسخ العكسي QuantiTect (أرقام الكتالوج، 205311، 205313، 205314)

مزيج تفاعل البوليميراز الرقمي الرئيسي: مجموعة QIAcuity EG PCR

التحليلات:

التطبيقات

- تحليل وتحديد وقياس التعبير الجيني للـ mRNA و lncRNA
- التحقق من صحة بيانات التعبير الجيني بتقنية تسلسل الحمض النووي الريبوزي (RNA-seq).
- تحليل التعبير الجيني
- تحليل الإشارات والمسارات
- تأكيد تثبيط التعبير الجيني بواسطة LNA GapmeRs أو siRNAs
- تطوير المؤشرات الحيوية، بما في ذلك فحص وتحديد والتحقق من صحة المؤشرات الحيوية المرتبطة بالأمراض
- رصد التغيرات الظاهرية المرتبطة بالتعبير الجيني

تُعدّ فحوصات QuantiNova LNA PCR المخصصة مناسبة للغاية للتطبيقات التي تشمل ما يلي:

يمكن أيضًا استخدام فحوصات QuantiNova LNA PCR المتعددة لفحص مجموعة مركزة من الجينات.