Qiagen، 249990، اختبار QuantiNova LNA PCR (200)

مزيج بادئات مُصمم مسبقًا خاص بالـ mRNA/lncRNA في أنبوب واحد؛ لـ 200 تفاعل qPCR أو 400 تفاعل dPCR

سمات

- يوفر أكثر من 1.3 مليون اختبار تغطية واسعة النطاق وأفضلها لنسخ mRNA وlncRNA البشرية والفأرية والجرذية في Ensembl
- حساسية ونوعية استثنائية باستخدام بادئات قصيرة معززة بتقنية LNA
- كشف دقيق ضمن نطاق ديناميكي واسع يبدأ من نسخة واحدة من الحمض النووي الريبي
- مُحسَّن للقضاء على التضخيم غير المحدد
- التحديد الكمي المطلق لتغيرات التعبير الجيني باستخدام تقنية dPCR وجهاز QIAcuity ومجموعة QIAcuity EG PCR Kit

تفاصيل المنتج

تُرسّخ فحوصات QuantiNova LNA PCR معايير جديدة في تحليل التعبير الجيني القائم على تفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي. اختر من بين مجموعة واسعة من الفحوصات المصممة مسبقًا للكشف الدقيق والحساس عن أي mRNA أو lncRNA بشري أو فأري أو جرذي - بدءًا من الكشف العام عن النسخ الجينية وصولًا إلى التمييز بين أشكال النسخ الجينية المحددة. يُمكّننا تحسين LNA من تصميم بادئات أقصر، ما يُتيح مرونة أكبر في تحديد موقعها على الهدف. ونتيجةً لذلك، يُمكننا تحسين تصميماتنا للكشف عن نسخ جينية محددة أو التمييز بين الأهداف. بالإضافة إلى ذلك، يضمن التحقق الشامل من التصميم الأداء الأمثل والكشف الموثوق. بالنسبة لتفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي، قمنا بتحسين الفحوصات باستخدام مجموعات QIAcuity EG PCR وجهاز QIAcuity، وأنشأنا سير عمل بسيطًا وسريعًا للقياس الكمي المطلق يستغرق ساعتين فقط.

هل تخطط لاستخدام فحوصات QuantiNova LNA PCR لتحليل qPCR؟ يمكنك العثور على تفاصيل المنتج والأداء الخاصة بـ qPCR على صفحة كتالوج qPCR المخصصة.

هل تحتاج إلى عرض سعر لمشروعك البحثي أو ترغب في مناقشة مشروعك مع فريقنا المتخصص؟ تواصل معنا الآن!

أداء

تحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي المُحسَّن باستخدام مجموعات QIAcuity EG PCR وجهاز QIAcuity

طُوِّرت فحوصات QuantiNova LNA PCR لتوفير تضخيم عالي التخصص للهدف. ويمكن قياس هذا التضخيم باستخدام طريقتين لتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR): تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR) باستخدام أجهزة التدوير الحراري القياسية في الوقت الحقيقي، وتفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي (digital PCR) باستخدام جهاز QIAcuity ومجموعة QIAcuity EG PCR (انظر الشكل: استخدام فحوصات QuantiNova LNA PCR لتفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي). بعد تخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) باستخدام مجموعة QuantiTect Reverse Transcription Kit، يوفر تفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي قياسًا كميًا دقيقًا للغاية للهدف، حيث يكشف حتى أصغر تغيرات التعبير عند أدنى التركيزات. وقد تم التحقق تجريبيًا من صحة مجموعة فرعية من الفحوصات الرئيسية على جهاز QIAcuity.

يعزز LNA أداء تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)

طُوِّرت فحوصات QuantiNova LNA PCR باستخدام معايير تصميم صارمة وخوارزميات مُعتمَدة مخبريًا. تضمن عملية اختيار الفحص الدقيقة أن تُقدِّم كل مجموعة من البادئات أعلى درجات الخصوصية والكفاءة للحصول على نتائج موثوقة ودقيقة. يُعطي توحيد درجة حرارة الانصهار (Tm) وتعزيز LNA البادئات ألفة ارتباط أعلى من بادئات الحمض النووي القياسية، مما يزيد بشكل كبير من حساسية الفحص وخصوصيته.

تضمن هذه الحساسية المتزايدة كفاءة تضخيم ممتازة حتى مع جزيء RNA واحد، مما يُسهّل عليك اكتشاف الأهداف منخفضة الوفرة مثل lncRNAs من كمية أقل من المادة الأولية. كما تُوفر لك الخصوصية المتزايدة الناتجة عن التموضع الذكي لـ LNA نسبة إشارة إلى ضوضاء عالية، مما يسمح بالتمييز بين التسلسلات التي تختلف بنوكليوتيد واحد فقط، ويمنع التضخيم غير النوعي وتكوين ثنائيات البادئات.

تزيد قوة ارتباط قواعد LNA العالية من مرونة وضع البادئات على النسخة، مما يُمكّننا من استخدام التموضع الذكي لتصميم فحوصات لأهداف يصعب تحليلها. وهذا يُتيح تمييزًا أفضل للأهداف وقياسًا كميًا موثوقًا، حتى بالنسبة للأهداف الغنية بـ AU، والنسخ منخفضة الوفرة، والأهداف ذات البنية الثانوية العالية، والعينات شديدة التعقيد.

ثق بخبراء تصميم مضخمات الضوضاء المنخفضة

بفضل خبرتنا الممتدة لعشرين عامًا في تصميم LNA، تمكّنا من تطوير وتحسين خوارزمية تصميم LNA المتطورة لدينا، والتي تتضمن أكثر من 50 مُعاملًا مختلفًا - تم التحقق من صحتها جميعًا في المختبر وفقًا لمعايير أداء صارمة للغاية - لضمان الحصول على أفضل اختبار للكشف الناجح عن الهدف. لقد اخترنا ما يصل إلى ثلاثة تصميمات اختبار مختلفة لكل نسخة، وتحققنا من صحة جميع اختبارات mRNA وlncRNA الشائعة في المختبر. تعمل اختبارات QuantiNova LNA PCR ببساطة، دون الحاجة إلى إنفاق وقتك أو أموالك على التحسين.

مبدأ

فحوصات تغطية الجينات: فحوصات خاصة بالنسخ الجينية
الاختبار الموصى به من قبل شركة QIAGEN: مصنف على أنه "أفضل تغطية"
وصف تصميم التحليل وتغطيته: يغطي معظم النسخ الجينية ذات الأهمية البيولوجية للجين المحدد.
متى يُنصح بالاختيار: لإجراء فحص عام للنسخ الجينية وتحديد ما إذا كان الجين محل الاهتمام مُعبرًا عنه في العينة؛ وللكشف عن أكبر عدد ممكن من النسخ الجينية والأشكال المتغايرة للجين.

- أفضل تغطية: للكشف العام عن النصوص
- أفضل اختبار للنسخ الجيني: للكشف عن نسخة جينية محددة
- أفضل اختبار خاص بالنسخة الجينية: للتمييز بين أشكال النسخ الجينية المحددة

تفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي القائم على EvaGreen

للقياس الكمي المطلق باستخدام تقنية dPCR، استخدم فحوصات QuantiNova LNA PCR مع مجموعة QIAcuity EG PCR، التي تعتمد على الكشف الفلوري باستخدام صبغة EvaGreen. EvaGreen هي صبغة متداخلة ترتبط بالحمض النووي المزدوج (على غرار SYBR® Green) وتُصدر فلورة عند ارتباطها به. يوفر استخدام تقنية dPCR القائمة على EvaGreen سهولةً وتوفيرًا، إذ يكفي استخدام مجموعة البادئات لتضخيم المنتج والكشف عنه. كما يوفر دقةً أعلى في تفاعل dPCR، الذي يُقسّم إلى آلاف الأجزاء في صفيحة dPCR النانوية، مما يجعل تركيز البادئات المطلوب لتفاعل dPCR نصف التركيز المطلوب لتقنية qPCR.

تغطية شاملة ومحددة للغاية

استُخدمت خوارزميتنا الخاصة لتصميم أكثر من 1.3 مليون اختبار QuantiNova LNA PCR، لتوفير تحليل mRNA وlncRNA بأعلى حساسية ودقة وفعالية. تغطي الاختبارات المصممة مسبقًا معظم النسخ في قاعدة بيانات Ensembl لجينات الإنسان والفأر والجرذ، مما يُمكّن من إجراء دراسات التعبير الجيني القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) بأقصى عمق ممكن. تغطي معظم الاختبارات الإنترونات كلما أمكن، وتكشف عن الحمض النووي الريبوزي (RNA) فقط. أما الاختبارات التي لا تغطي الإنترونات، فتُصنّف على هذا النحو، وفي حال وجود إكسون واحد في الهدف، يُمكن التخلص بسهولة من الإشارات غير المرغوب فيها باستخدام مجموعة QuantiTect Reverse Transcription Kit المزودة بخطوة إزالة الحمض النووي الجينومي (gDNA) المدمجة.

اختيار الفحص المناسب لهدفك

تتيح لك فحوصات QuantiNova LNA PCR المصممة مسبقًا الكشف بدقة وحساسية عن أي mRNA أو lncRNA بشري أو فأر أو جرذ، بغض النظر عن مستوى التحليل الذي تحتاجه: الكشف العام عن النسخ، أو الكشف عن نسخة معينة، أو التمييز بين أشكال النسخ.

تحتوي معظم جينات الإنسان والفأر والجرذ على نسخة واحدة فقط، ولكن بالنسبة للجينات التي تحتوي على نسخ متعددة، فقد اخترنا ما يصل إلى ثلاثة اختبارات لكل نسخة باستخدام نفس الخوارزمية. يختلف تصميم هذه الاختبارات وموضع البادئات فيها ليتناسب مع متطلبات الاستخدام المختلفة. يساعدك دليل اختيار الاختبارات لدينا على تحديد أفضل اختبار من كل فئة بسرعة. بعد البحث عن اختبارات لهدفك، ما عليك سوى مراجعة النتائج والبحث عن الاختبار الموصى به الذي يتوافق مع استخدامك المقصود.

راجع الجدول أدناه لمزيد من التفاصيل.

تحليل بيانات تفاعل البوليميراز الرقمي

تُستخدم مجموعة برامج QIAcuity لتحليل بيانات dPCR وتتضمن اختبار التعبير الجيني، والذي يوفر نتائجك كنسبة تغيير ونسبة تنظيم مع أشكال جاهزة للنشر.

فحوصات الجينات المرجعية لأي دراسة

تتوفر مجموعة واسعة من فحوصات الجينات المرجعية المُثبتة وظيفيًا للإنسان والفأر والجرذ، مما يُتيح توحيد البيانات بجودة عالية وضمان نتائج موثوقة. تستهدف هذه الفحوصات جزيئات الحمض النووي الريبوزي المشفر الداخلي، والحمض النووي الريبوزي الطويل غير المشفر، وجزيئات الحمض النووي الريبوزي النووي الصغير، والتي تُعبر عنها عادةً بشكل دائم في مجموعة متنوعة من الأنسجة.

تطبيع نتائج تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي للـ mRNA/lncRNA

تُزيل عملية التوحيد التباين التقني والبيولوجي بين العينات غير المرتبط بالتغيرات البيولوجية قيد الدراسة. ويُعدّ التوحيد الصحيح أمراً بالغ الأهمية لتحليل وتفسير نتائج تجارب تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (PCR) في الوقت الحقيقي بشكل سليم. وفي أغلب الأحيان، تُستخدم جينات مرجعية مستقرة التعبير لأغراض التوحيد.

يُنصح عمومًا باختبار عدة جينات مرجعية داخلية مُرشحة قبل البدء بتحليل التعبير الجيني الفعلي للـ mRNA/lncRNA. يجب اختيار هذه الجينات من بين الجينات المتوقع أن يكون تعبيرها ثابتًا في جميع العينات قيد الدراسة. يمكن أن تكون هذه الجينات عبارة عن mRNAs أو lncRNAs ذات تعبير ثابت، يتم اختيارها بناءً على الدراسات المنشورة أو البيانات الموجودة مسبقًا (مثل فحص لوحات NGS أو qPCR). يوفر نظام QuantiNova LNA PCR فحوصات جينية مرجعية مُعتمدة للـ RNAs التي تميل إلى أن يكون تعبيرها ثابتًا، وبالتالي فهي مرشحة جيدة كجينات مرجعية.

ينبغي التحقق تجريبياً من جميع الجينات المرجعية المرشحة لكل دراسة. أحد الخيارات المتاحة لتطبيع لوحة تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) عند تحليل عدد كبير من الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) والحمض النووي الريبوزي غير المشفر الطويل (lncRNA) هو التطبيع مقابل المتوسط ​​العام - أي متوسط ​​جميع الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) والحمض النووي الريبوزي غير المشفر الطويل (lncRNA) المُعبر عنه. قد يكون هذا خياراً جيداً في العينات ذات معدل الاستدعاء العالي (الجينات المُعبر عنها)، ولكن ينبغي استخدامه بحذر في العينات ذات معدلات الاستدعاء المنخفضة. كما أنه ليس خياراً جيداً في العينات التي يتغير فيها مستوى التعبير الجيني العام.

إجراء

- فحوصات QuantiNova LNA PCR
- فحوصات QuantiNova LNA PCR المخصصة

تقنية RT-dPCR ثنائية الخطوات

تُحقق أفضل النتائج عند إجراء تفاعل النسخ العكسي باستخدام مجموعة QuantiTect Reverse Transcription Kit (أرقام الكتالوج: 205311، 205313، 205314). لا يُنصح باستخدام مجموعة QuantiNova Reverse Transcription Kit. بعد ذلك، يتم قياس كمية الحمض النووي التكميلي الناتج (cDNA) باستخدام تقنية dPCR، وذلك باستخدام مزيج QIAcuity EG PCR Kit الرئيسي مع اختيارك من اختبار QuantiNova LNA PCR Assay.

ملاحظة هامة: كميات التفاعل الموضحة بين قوسين بعد أسماء نواتج التحليل خاصة باستخدام تقنية qPCR. تتطلب تقنية dPCR نصف تركيز البادئات فقط، ولكن أحجام التفاعل تختلف. باستخدام لوحة QIAcuity Nanoplate 26K، يمكنك إجراء نفس عدد التفاعلات الموضحة؛ وباستخدام لوحة Nanoplate 8.5K، يمكنك إجراء 3.3 أضعاف هذا العدد. يُرجى الرجوع إلى دليل استخدام QIAcuity للاطلاع على تعليمات dPCR.

الشحن والتوصيل

تُشحن فحوصات QuantiNova LNA PCR في درجة حرارة الغرفة. تُسلّم الفحوصات المتوفرة في المخزون خلال 1-5 أيام. خلال فترة الوصول المبكر، يُتوقع أن تكون مدة التسليم أطول.

ما تحتاجه للبدء في استخدام تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي (PCR) مع نظام QuantiNova LNA PCR

النسخ العكسي: مجموعة النسخ العكسي QuantiTect (أرقام الكتالوج، 205311، 205313، 205314)

مزيج تفاعل البوليميراز الرقمي الرئيسي: مجموعة QIAcuity EG PCR

التحليلات:

التطبيقات

- تحليل وتحديد وقياس التعبير الجيني للـ mRNA و lncRNA
- التحقق من صحة بيانات التعبير الجيني بتقنية تسلسل الحمض النووي الريبوزي (RNA-seq).
- تحليل التعبير الجيني
- تحليل الإشارات والمسارات
- تأكيد تثبيط التعبير الجيني بواسطة LNA GapmeRs أو siRNAs
- تطوير المؤشرات الحيوية، بما في ذلك فحص وتحديد والتحقق من صحة المؤشرات الحيوية المرتبطة بالأمراض
- رصد التغيرات الظاهرية المرتبطة بالتعبير الجيني

تُعد فحوصات QuantiNova LNA PCR مناسبة للغاية للتطبيقات التي تشمل ما يلي: