شركة كياجين، 250213، اختبار مرجعي لمسبار dPCR CNV

أنبوب واحد يحتوي على محلول مرجعي جاهز للاستخدام، بتركيز 20 ضعفًا؛ يكفي لـ 300/500/1000 تفاعل dPCR بحجم 12 ميكرولتر لكل منها

سمات

- أكثر من 200 اختبار تم التحقق من صحتها في المختبر الرطب وأداة مخصصة لتصميم الاختبارات الحاسوبية
- يتيح اختيار الصبغة إمكانية تعدد الإرسال لما يصل إلى 5 أهداف لكل تفاعل
تتوفر فحوصات جينية مرجعية وفحوصات مرجعية للجينات ذات الأهمية والجينات المركزية.
- تم التحقق من صحة المقايسات الجاهزة للاستخدام لمجموعة من العينات، مثل عينات الأنسجة المثبتة بالفورمالين والمضمنة في البارافين، وخطوط الخلايا، والحمض النووي الجينومي.
- سير عمل dPCR بسيط وسريع على جهاز QIAcuity
- تحليل بيانات عدد النسخ بسهولة باستخدام مجموعة برامج QIAcuity

تفاصيل المنتج

تُمكّن فحوصات dPCR CNV Probe من إجراء تحليل دقيق ومحدد وقابل للتكرار وسهل التفسير لتغيرات عدد النسخ لجينات أو مناطق محددة. وقد تم التحقق من صحة هذه الفحوصات لأكثر من 200 هدف باستخدام تقنية PCR في المختبر، ويُشار إلى ذلك في وصف الفحص.

بالإضافة إلى ذلك، تتوفر أداة تصميم مخصصة لتلبية احتياجات التحليل خارج نطاق عرض التحليل الذي تم التحقق منه في المختبر الرطب.

تتوفر فحوصات dPCR CNV Probe Assays في شكل أنبوب كفحص جاهز للاستخدام بتركيز 20 ضعفًا. يحتوي الأنبوب على زوج من البادئات ومسبار تحلل مائي للاستخدام مع مجموعة QIAcuity Probe PCR Kit (أهداف الحمض النووي)، ونظام QIAcuity Digital PCR، وألواح QIAcuity Nanoplates.

يتضمن كل اختبار اختيار خمسة مجسات تحلل مختلفة (فلوروفورات): FAM وHEX وROX وAtto 550 وCy5. تتيح هذه المرونة مزج ومطابقة الاختبارات لإجراء تحليل متعدد لما يصل إلى خمسة أهداف في تفاعل dPCR واحد.

هل ترغب بمعرفة المزيد عن المنتج والتواصل مع أحد متخصصي تقنية dPCR لدينا؟ سجّل دخولك هنا، وسنتواصل معك قريباً.

أداء

أداء متميز في التحليل

تُظهر فحوصات dPCR CNV Probe Assays تضخيمًا ممتازًا للمنتج وفصلًا دقيقًا بين مجموعات التقسيم السالبة والموجبة في تحليل ثنائي باستخدام تركيزين مختلفين من قالب الحمض النووي الجينومي (انظر مخططات التشتت أحادية وثنائية الأبعاد لتفاعلات الحمض النووي الجينومي لفحوصات KRAS وTERT). تشير النتائج إلى إمكانية إجراء تحليل دقيق لتغيرات عدد النسخ (CNVs) حتى مع التركيزات المنخفضة من الحمض النووي الجينومي المُدخل. للاطلاع على الحد الأدنى والحد الأقصى لكميات التحميل في صفائح نانوية 8.5 كيلو جول، يُرجى مراجعة ملحق دليل مستخدم QIAcuity.

تحليل دقيق وقابل للتكرار لعدد النسخ باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي

يُتيح نظام QIAcuity dPCR عالي الدقة وقابلية التكرار العالية، بالإضافة إلى فحوصات dPCR CNV Probe Assays، تحليلَ تباين عدد النسخ (CNV) دون الحاجة إلى تكرارات، مما يزيد من إنتاجية العينات بطريقة فعّالة من حيث التكلفة. وقد أسفر التحليل المزدوج لعينة الحمض النووي الجينومي (gDNA) عن العدد المتوقع من النسخ لكل جينوم لجميع التكرارات (انظر: تحليل دقيق وقابل للتكرار لعدد النسخ في تفاعل مزدوج). وفي اختبار دقة لتحليل سلسلة تخفيف الحمض النووي الجينومي، أظهرت الفحوصات توزيعًا خطيًا ممتازًا وفصلًا دقيقًا للمجموعات (انظر: التوزيع الخطي في اختبار دقة سلسلة التخفيف).

تحليل عدد النسخ المتعددة بواسطة تفاعل البوليميراز الرقمي (dPCR)

يُحسّن التحليل المتعدد باستخدام فحوصات dPCR CNV Probe Assays الإنتاجية ويُقلل بشكل ملحوظ من تكاليف التحليل لكل هدف. تُتيح إمكانية طلب هذه الفحوصات مع أصباغ مختلفة (FAM، HEX، ROX، Atto 550، وCy5) تصميمًا تجريبيًا مرنًا وتحليلًا متعددًا لما يصل إلى 5 أهداف في تفاعل واحد. تُظهر فحوصات dPCR CNV Probe Assays تضخيمًا ممتازًا وفصلًا دقيقًا للمجموعات الإيجابية والسلبية لخمسة فحوصات مُجمعة في تفاعل واحد (انظر: الكشف عن CNV في تفاعل خماسي).

مبدأ

صُممت جميع فحوصات مجسات dPCR CNV لتحديد مناطق فريدة من الجينوم البشري. تستهدف فحوصات dPCR CNV Probe Gene of Interest Assays جينات السرطان والجينات المرتبطة به التي خضعت لدراسات مكثفة. تتضمن فحوصات dPCR CNV Probe Reference Assays وفحوصات dPCR CNV Probe Centromeric Reference Assays مجموعة متنوعة من المراجع ذات أعداد نسخ مختلفة لكل جينوم، مما يتيح اختيار المراجع المثلى للتطبيع لكل تحليل. اعتمادًا على الظروف التجريبية، يمكن تضمين فحوصات متعددة لجينات الاهتمام والمراجع في التفاعلات لحساب دقيق لعدد نسخ الجين أو الهدف محل الاهتمام.

تُعدّ فحوصات مجسات عدد النسخ بتقنية dPCR جاهزة للاستخدام: ما عليك سوى إضافة مزيج الفحص الفردي إلى عينة الحمض النووي ومزيج Mastermix من مجموعة QIAcuity Probe PCR Kit، ثم تحميلها في لوحة QIAcuity Nanoplate وبدء التشغيل على جهاز QIAcuity. يعتمد كل فحص على تضخيم PCR نهائي لمنطقة محددة من الجينات عبر الجينوم البشري. يتم الكشف عن المنتج المُضخّم باستخدام مجسات تحلل فلورية خاصة بالهدف، مما يساعد على ضمان دقة عالية للفحص.

تم وصف مبدأ تفاعل dPCR في الصفائح النانوية هنا.

إجراء

إجراء التجربة بسيط وسهل، ويمكن تنفيذه في أي مختبر يستخدم جهاز QIAcuity dPCR. ولتحليل أدق لعدد النسخ، نوصي بإجراء هضم إنزيمي تقييدي بعد عزل الحمض النووي الجينومي من العينة. لا يُشترط الهضم الإنزيمي التقييدي للحمض النووي شديد التجزئة (مثل الحمض النووي المستخلص من عينات الأنسجة المثبتة بالفورمالين والمضمنة في البارافين أو الحمض النووي المتداول) أو الحمض النووي المكمل (cDNA). لإجراء الهضم الإنزيمي التقييدي مباشرةً في مزيج التفاعل، أضف الإنزيم التقييدي الموصى به أثناء تحضير التفاعل. من الضروري تجنب استخدام إنزيمات تقييدية تقطع داخل منطقة التضخيم المستهدفة.

يُخلط القالب المُجزأ مع المزيج الرئيسي الجاهز للاستخدام من مجموعة QIAcuity Probe PCR Kit واختبار dPCR CNV Probe Assay، ثم يُوزع هذا المزيج في كل بئر من آبار صفيحة dPCR التحضيرية. بعد ذلك، يُخلط مزيج التفاعل جيدًا باستخدام الماصة، ثم يُنقل إلى آبار صفيحة QIAcuity Nanoplate. يمكن تحليل كل جين أو هدف مُراد دراسته، بالإضافة إلى كل اختبار مرجعي، في بئر واحد ضمن تفاعل متعدد، وذلك بدمجها مع فلوروفورات مختلفة.

بعد تحميل وإغلاق الصفيحة النانوية، يتم تشغيل برنامج التدوير الموصى به على جهاز QIAcuity. تُعرض النسخ الناتجة لكل ميكرولتر في نوع تحليل التحديد الكمي المطلق ضمن حزمة برامج QIAcuity. لحساب عدد النسخ لكل جينوم، حدد نوع تحليل بيانات عدد النسخ في حزمة برامج QIAcuity، وحدد آبار الصفيحة النانوية للجين/المنطقة محل الاهتمام أو مرجع التطبيع. بناءً على بروتوكول التدوير، يمكن تحليل نتائج تشغيل dPCR في حزمة برامج QIAcuity بعد ساعتين تقريبًا.

التطبيقات

تعتبر فحوصات dPCR CNV Probe Assays مناسبة للغاية للكشف بدقة عن تغيرات أو اختلافات عدد النسخ في المواقع الفردية باستخدام الحمض النووي من العينات الطازجة أو المجمدة أو الثابتة.