مجموعة Qiagen، 250221، مجموعة قياس كمية الحمض النووي المؤتلف لبكتيريا الإشريكية القولونية

معيار كمية الحمض النووي المؤتلف لبكتيريا الإشريكية القولونية (1x)، محلول إعادة الترطيب

سمات

- مزيج رئيسي مُعد مسبقًا مع أدوات تحكم لسهولة الإعداد والكشف عن الحمض النووي للخلايا المضيفة
- يُمكّن من الكشف الدقيق عن الحمض النووي المتبقي من الخلايا المضيفة من بكتيريا الإشريكية القولونية، وخلايا CHO، وخلايا HEK293 حتى مستويات الفيمتوغرام المنخفضة
- اختبار هدف متعدد النسخ يكشف ويحدد كمية الحمض النووي للخلايا المضيفة المجزأة للغاية
- يُمكّن من الكشف عن الحمض النووي للخلايا المضيفة في كل من العينات المستخلصة وغير المستخلصة

تفاصيل المنتج

يشكل تلوث الحمض النووي للخلايا المضيفة في منتجات مثل اللقاحات والأدوية والمستحضرات الصيدلانية الحيوية الأخرى مخاطر صحية جسيمة. ولذلك، تخضع حدوده الآمنة لرقابة صارمة من قبل هيئات مثل إدارة الغذاء والدواء الأمريكية ومنظمة الصحة العالمية. وتُحدد إرشادات واضحة للحدود القصوى للحمض النووي المتبقي بناءً على طبيعة إعطاء الدواء، وقدرة الحمض النووي للخلايا الملوثة على إحداث العدوى والأورام. فعلى سبيل المثال، يجب ألا تتجاوز جرعة الحمض النووي للخلايا غير المسببة للأورام عند إعطائها عن طريق الحقن 10 نانوغرام/جرعة، وبحد أقصى طول 200 زوج قاعدي، بينما توصي منظمة الصحة العالمية بأن تكون كمية الحمض النووي المتبقي أقل من 100 ميكروغرام/جرعة في اللقاحات التي تُعطى عن طريق الفم.

يتطلب الكشف عن هذه الملوثات وإزالتها في المنتجات المصنعة قياسات دقيقة وحساسة للغاية للكميات المنخفضة للغاية من الحمض النووي للخلايا المضيفة الموجودة في المنتجات.

يُعدّ تفاعل البوليميراز الرقمي (Digital PCR) الطريقة المُفضّلة للكشف عن الحمض النووي المتبقي. ويعود ذلك إلى حساسيته ودقته الفائقة، لا سيما عند مستويات التلوث الضئيلة، مقارنةً بطرق الكشف الأخرى مثل تفاعل البوليميراز الكمي (qPCR). توفر مجموعات QIAcuity للكشف عن الحمض النووي المتبقي دقةً عاليةً في الكشف عن الحمض النووي لخلايا الإشريكية القولونية (E. coli)، وخلايا مبيض الهامستر الصيني (CHO)، وخلايا الكلى الجنينية البشرية 293 (HEK293).

أداء

التحليل: عدد النسخ المستهدفة
مجموعة QIAcuity E.coli resDNA Quant Kit: 7
مجموعة QIAcuity CHO resDNA Quant Kit: ~ مليون، غير محدد (عنصر متكرر)
مجموعة QIAcuity HEK293 resDNA Quant Kit: ~ مليون، غير محدد (عنصر متكرر)

كمية التحميل لكل تفاعل (fg/rxn): معيار الإشريكية القولونية (نسخ/ميكرولتر)
50000: 2949.7
5000: 291.6
500: 27.6
50: 2.8
25: 1.46
5: 0.45
NTC: 0

كمية التحميل لكل تفاعل (fg/rxn): معيار CHO (نسخ/ميكرولتر)
50000: 4939.3
5000: 508.3
500: 50.2
50: 4.7
25: 2.6
5: 0.6
NTC: 0

كمية التحميل لكل تفاعل (fg/rxn): معيار HEK293 (نسخ/ميكرولتر)
50000: 1104.9
5000: 104.5
500: 8.83
50: 0.99
NTC: 0

توفر مجموعات QIAcuity لتحديد كمية الحمض النووي المتبقي نتائج دقيقة لتحديد كمية الحمض النووي المتبقي (resDNA) في خلايا CHO و E. coli و HEK293، سواءً مع الاستخلاص أو بدونه، حتى في وجود ملوثات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) أو غيرها من الكواشف المثبطة. وتُعد هذه الاختبارات اختبارات متعددة النسخ تستهدف تحديد كمية الحمض النووي المتبقي من الخلية المضيفة المجزأة بدقة.

يكشف جهاز QIAcuity E.coli resDNA Quant Kit عن كميات ضئيلة تصل إلى 5 فيمتوغرام من الحمض النووي المتبقي في تفاعل واحد

*يُتوقع وجود 100 نسخة/ميكرولتر للتحكم الداخلي

يوفر تفاعل البوليميراز الرقمي حساسية أعلى للكشف عند نطاق إدخال قالب أقل مقارنة بتفاعل البوليميراز الكمي، وبالتالي يتيح تطبيقًا أكثر قوة.

يكشف جهاز QIAcuity CHO resDNA Quant Kit عن كميات ضئيلة تصل إلى 5 فيمتوغرام من الحمض النووي المتبقي في تفاعل واحد

يكشف جهاز QIAcuity HEK293 resDNA Quant Kit عن كميات ضئيلة تصل إلى 5 فيمتوغرام من الحمض النووي المتبقي في تفاعل واحد

تعمل هذه المجموعات بالتزامن مع نظام QIAcuity Digital PCR وألواح QIAcuity Nanoplates، مما يوفر سير عمل dPCR سريعًا ومتكاملًا يُضاهي qPCR، ولكنه يُتيح قياسًا كميًا دقيقًا للحمض النووي الريبوزي (resDNA) في العينة. وقد صُممت هذه المجموعات مع مراعاة متطلبات تصنيع العمليات الحيوية ومراقبة الجودة.

مبدأ

تم وصف مبدأ تفاعل dPCR في الصفائح النانوية هنا.

يُحسّن استخدام تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي QIAcuity لمراقبة الحمض النووي للخلايا المضيفة من حد الكشف (LOD) وحد الكمية (LOQ) من خلال تقسيم العينة باستخدام لوحة QIAcuity Nanoplate 26k. يزيد التقسيم من التركيز الفعال للهدف، مما يسمح بالتقاط وقياس كمية صغيرة من الحمض النووي للخلايا المضيفة بدقة عالية. تُعدّ القدرة على تحميل كميات كبيرة من القالب في لوحة QIAcuity Nanoplate 26k، بالإضافة إلى زيادة عدد الأقسام، أحد أسباب ارتفاع دقة الكشف عن بقايا الخلايا المضيفة.

إجراء

تُضاف خلاصة الخلايا إلى اختبار الكمية المتبقية مع عنصر التحكم الداخلي، ويتم قياس الحمض النووي للخلايا المضيفة بالقياس الكمي المطلق. تُحوّل وحدات النسخ/ميكرولتر إلى وحدات فيمتوغرام/ميكرولتر باستخدام معامل تحويل مُقدّم.

التطبيقات

تُعد مجموعات QIAcuity لتحديد كمية الحمض النووي المتبقي مثالية لتحديد كمية الحمض النووي للخلايا المضيفة بدقة عالية في وسائط العمليات الحيوية المعقدة.