شركة كياجين، 301709، كاشف نقل الجينات عالي الكفاءة (100 مل)

كاشف نقل الجينات HiPerFect لنقل الجينات في ما يصل إلى 1388 لوحة ذات 96 بئراً

سمات

- نقل فعال باستخدام تركيزات منخفضة من الحمض النووي الريبوزي المتداخل الصغير
- نقل فعال للجينات إلى الخلايا الأولية مع الحفاظ على حيوية عالية للخلايا
- نقل الجينات الفعال للخلايا المعلقة والخلايا البلعمية
- بروتوكولات خاصة بالخلايا في قاعدة بيانات بروتوكولات TransFect
- نقل فعال لجزيئات miRNA المحاكية أو المثبطة

تفاصيل المنتج

يُعدّ كاشف النقل الجيني HiPerFect مزيجًا فريدًا من الدهون الكاتيونية والمحايدة، مما يُتيح امتصاصًا فعالًا لجزيئات siRNA وإطلاقها بكفاءة داخل الخلايا، ما يُؤدي إلى تثبيط جيني عالٍ حتى عند استخدام تراكيز منخفضة من siRNA. إضافةً إلى siRNA، يُعدّ كاشف النقل الجيني HiPerFect مثاليًا لنقل جزيئات miRNA المُحاكية أو المُثبّطة. تتوفر بروتوكولات خاصة بأنواع الخلايا التي تستخدم كاشف النقل الجيني HiPerFect في قاعدة بيانات بروتوكولات TransFect.

أداء

نوع الخلية: نوع الخلية
K562: سرطان الدم النخاعي المزمن لدى الإنسان
جركات: خلية تي بشرية
D1.1: الخلايا التائية البشرية
RAW 264.7: خلية بلعمية كبيرة من الفأر
J774.A1: خلية بلعمية فأرية
خلايا THP-1 المتمايزة بواسطة PMA: سرطان الدم النخاعي الحاد أحادي النواة البشري
MEL: ابيضاض الدم النخاعي الفأري

نوع الخلية: نوع الخلية
راجي: خلية بائية بشرية
U937: خلية بلعمية بشرية
مولت4: خلية تي بشرية
مولت 14: خلية تي بشرية
HL60: سلالة الخلايا النخاعية الأولية
E6.1: الخلايا التائية البشرية

تم اختبار مجموعة من خطوط الخلايا المعلقة والخلايا البلعمية المتمايزة وغير المتمايزة باستخدام كاشف HiPerFect لنقل الحمض النووي الريبوزي المتداخل الصغير (siRNA). وقد تم نقل الحمض النووي الريبوزي المتداخل الصغير بنجاح إلى العديد من الخطوط مع تثبيط ممتاز لتعبير الجين المستهدف (انظر الجدول 1). يُعد نقل الحمض النووي الريبوزي المتداخل الصغير باستخدام كاشف HiPerFect بديلاً أفضل من التثقيب الكهربائي للعديد من هذه الأنواع من الخلايا.

لم تكن بعض سلالات الخلايا قابلة للتحويل باستخدام كاشف HiPerFect (انظر الجدول 2).

يُمكن تحقيق تثبيط فعال (>80%) باستخدام تركيزات siRNA تتراوح بين 1 و50 نانومتر (انظر الشكل "يوفر كاشف HiPerFect تثبيطًا فعالًا لـ CDC2"). أدى نقل 1 نانومتر من siRNA إلى تثبيط بنسبة 86%، بينما زاد نقل 5 نانومتر من siRNA كفاءة التثبيط إلى 96%. بناءً على الغرض من تجربة RNAi، قد يكون التركيز الأمثل لـ siRNA هو 1 نانومتر (لتقليل مخاطر التأثيرات الجانبية وتثبيط فعال) أو 5 نانومتر (لزيادة كفاءة التثبيط).

مبدأ

قد يؤدي نقل جزيئات siRNA إلى تأثيرات جانبية، حيث تؤثر هذه الجزيئات على التعبير الجيني لجينات غير متماثلة أو متماثلة جزئيًا. ويمكن تجنب هذه التأثيرات الجانبية، التي قد تُنتج نتائج مُضللة في تجارب التداخل الرناوي (RNAi)، إلى حد كبير باستخدام تراكيز منخفضة من siRNA. وباستخدام كاشف النقل HiPerFect، لوحظت كفاءة عالية في النقل والتثبيط، حتى مع تركيز منخفض يصل إلى 10 بيكومول من siRNA في بعض الحالات. يوفر كاشف النقل HiPerFect نقلًا فعالًا للغاية لجزيئات siRNA عبر نطاق واسع من التراكيز، مما يسمح للباحثين باختيار التركيز المناسب. ويمكن استخدامه لنقل مجموعة واسعة من أنواع الخلايا، بما في ذلك HeLa وHeLa S3 وHEK 293 وNIH/3T3 وHuh-7 وHepG2 وMCF-7 وHUVEC وNHLF (انظر الشكل "نقل فعال لـ NHEK").

أبحاث الحمض النووي الريبوزي الميكروي (miRNA)

تُعدّ الميكرو الحمض النووي الريبوزي (miRNAs) فئة من جزيئات الحمض النووي الريبوزي الصغيرة الداخلية، ذات خصائص مشابهة للميكرو الحمض النووي الريبوزي المتداخل الصغير (siRNAs). تلعب الميكرو الحمض النووي الريبوزي دورًا في العديد من العمليات البيولوجية المتنوعة، مثل النمو والتمايز والاستماتة الخلوية. يُعدّ نقل جزيئات الميكرو الحمض النووي الريبوزي المُصنّعة، سواءً كانت مُحاكيات أو مُثبّطات، تقنيةً تُستخدم لتوضيح أهداف وأدوار أنواع مُحدّدة من الميكرو الحمض النووي الريبوزي. مُحاكيات الميكرو الحمض النووي الريبوزي هي جزيئات مُصنّعة كيميائيًا تُحاكي الميكرو الحمض النووي الريبوزي الموجودة طبيعيًا عند نقلها إلى الخلية. أما مُثبّطات الميكرو الحمض النووي الريبوزي فهي جزيئات حمض نووي ريبوزي مُعدّلة أحادية السلسلة، تعمل على تثبيط وظيفة الميكرو الحمض النووي الريبوزي بشكلٍ مُحدّد. يُشير انخفاض التعبير الجيني بعد نقل مُحاكي الميكرو الحمض النووي الريبوزي، أو زيادة التعبير بعد نقل مُثبّط الميكرو الحمض النووي الريبوزي، إلى أن الميكرو الحمض النووي الريبوزي المُستهدف يُشارك في تنظيم ذلك الجين. بدلاً من ذلك، يُمكن دراسة دور الميكرو الحمض النووي الريبوزي في مسارات مُختلفة من خلال فحص نمط ظاهري مُحدّد بعد نقل مُحاكي الميكرو الحمض النووي الريبوزي أو مُثبّطه. تم تطوير كاشف النقل HiPerFect من أجل نقل الخلايا حقيقية النواة بكفاءة عالية باستخدام siRNA، وهو مناسب تمامًا لنقل محاكيات أو مثبطات miRNA.

إجراء

يُقدَّم كاشف نقل الجينات HiPerFect كمحلول جاهز للاستخدام - ما عليك سوى إضافة الكاشف إلى محلول siRNA/miRNA المخفف، وخلطه، وحضانته، ثم وضع المركبات على الخلايا باستخدام الماصة. يمكن إجراء عمليات نقل الجينات في وجود المصل، مما يُغني عن إزالة المركبات من الخلايا. بالإضافة إلى البروتوكولات الواردة في دليل كاشف نقل الجينات HiPerFect، يمكنك العثور على بروتوكولات تناسب نوع خلاياك وشكل طبق الزراعة باستخدام قاعدة بيانات بروتوكولات TransFect. تُسهّل قاعدة البيانات عملية اختيار بروتوكولات نقل الجينات. فبدلاً من تعديل البروتوكولات الموجودة لتناسب متطلباتك، تُقدّم قاعدة البيانات البروتوكول المطلوب بدقة، مما يوفر الوقت والجهد. ما عليك سوى إدخال نوع الخلية، والحمض النووي، وشكل طبق الزراعة للحصول على بروتوكول نقل الجينات من QIAGEN، والذي يمكنك طباعته أو تنزيله بصيغة PDF. استخدام قاعدة بيانات بروتوكولات TransFect مجاني ولا يتطلب التسجيل.

يمكن إجراء عملية نقل الجينات باستخدام كاشف HiPerFect Transfection Reagent باتباع الإجراء الشائع المتمثل في زرع الخلايا قبل 24 ساعة من عملية النقل. كما تتوفر بروتوكولات لنقل الجينات العكسي في صفائح 96 بئرًا و384 بئرًا (انظر دليل كاشف HiPerFect Transfection Reagent). في هذه البروتوكولات، تُزرع الخلايا وتُجرى عملية النقل في نفس اليوم. تُوضع جزيئات siRNA/miRNA في الآبار، ثم يُضاف كاشف HiPerFect. بعد تكوين المركب، تُضاف الخلايا إلى الآبار (انظر المخطط الانسيابي "نقل الجينات العكسي باستخدام كاشف HiPerFect Transfection Reagent"). تتميز بروتوكولات نقل الجينات العكسي بالسرعة والسهولة وإمكانية أتمتتها بسهولة.

التطبيقات

- دراسات التداخل الرناوي
- أبحاث الحمض النووي الريبوزي الميكروي
- دراسات حول التعبير الجيني ووظيفته

يُمكّن كاشف النقل HiPerFect من نقل جزيئات siRNA بكفاءة عالية، حتى مع تركيزات منخفضة من siRNA، لتطبيقات مثل: