Product Description
25 مل من الراتنج المشحون بالنيكل (أقصى ضغط: 2.8 رطل لكل بوصة مربعة)
سمات
- تنقية بخطوة واحدة من المستخلص الخام إلى بروتين نقي بنسبة تزيد عن 95%
- قوة ارتباط عالية وسعة عالية
- اختيار التنقية في ظل الظروف الطبيعية أو ظروف التشويه
- مصفوفات مشحونة مسبقًا وجاهزة للاستخدام لأي مستوى من مستويات التنقية
- بروتوكولات التنقية والتحليل الآلية
تفاصيل المنتج
يُعدّ Ni-NTA Agarose مادةً لفصل البروتينات المؤتلفة الحاملة لعلامة الهيستيدين (His tag) باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. ترتبط بقايا الهيستيدين في علامة الهيستيدين بالمواقع الشاغرة في مجال التناسق لأيونات النيكل المثبتة، وذلك بانتقائية وتقارب عاليتين. تُحمّل مستخلصات الخلايا المصفاة على هذه المادة، حيث ترتبط بها البروتينات الموسومة بالهيستيدين، بينما تمر البروتينات الأخرى عبرها. بعد الغسل، تُفصل البروتينات الموسومة بالهيستيدين في محلول منظم في ظروف طبيعية أو مُغيّرة لطبيعتها.
أداء
يوفر Ni-NTA Agarose جزيء Ni-NTA مرتبطًا بدعامة Sepharose CL-6B، ويتميز بقدرة ربط عالية وارتباط غير نوعي ضئيل (انظر الشكل: تنقية بخطوة واحدة في الظروف الطبيعية). يتمتع هذا المركب بخصائص معالجة ممتازة لمعظم أحجام عمليات التنقية الدفعية والعمودية. يتوفر Ni-NTA Agarose بشكل منفصل أو كجزء من مجموعات QIA express، وهي مجموعات متكاملة للتعبير الفعال عن البروتينات الموسومة بـ His وتنقيها من بكتيريا الإشريكية القولونية.
مبدأ
يعتمد نظام تنقية البروتينات QIA express Ni-NTA على الانتقائية الفائقة لراتنج Ni-NTA (حمض النيتريلوترياسيتيك النيكل) الحاصل على براءة اختراع، وذلك للبروتينات التي تحتوي على علامة تقارب مكونة من ستة بقايا هيستيدين أو أكثر (متتالية أو متناوبة) - علامة His. تتيح هذه التقنية تنقية أي بروتين موسوم بعلامة His تقريبًا بخطوة واحدة من أي نظام تعبير، سواء في الظروف الطبيعية أو ظروف التشويه. يتميز راتنج NTA، الذي يحتوي على أربعة مواقع ارتباط لأيونات النيكل، بقدرته على ربط النيكل بقوة أكبر من أنظمة التنقية التي تعتمد على استخلاب المعادن، والتي لا تحتوي إلا على ثلاثة مواقع متاحة للتفاعل مع أيونات المعادن. يمنع موقع الارتباط الإضافي تسرب أيونات النيكل، مما ينتج عنه قدرة ربط أكبر وتحضيرات بروتينية ذات نقاء أعلى من تلك التي يتم الحصول عليها باستخدام أنظمة التنقية الأخرى التي تعتمد على استخلاب المعادن. يمكن استخدام نظام QIA express لتنقية البروتينات الموسومة بعلامة His من أي نظام تعبير، بما في ذلك الفيروسات الباكولية، وخلايا الثدييات، والخميرة، والبكتيريا.
إجراء
المواد المسببة لتغير لون المنظفات
6 مولار غوانيدين هيدروكلوريد: 2% تريتون إكس-100
8 مول يوريا: 2% توين 20
1% CHAPS: 20 ملي مول TCEP
تتألف عملية تنقية البروتينات الموسومة بالهيستيدين من أربع مراحل: تحلل الخلايا، والارتباط، والغسل، والإذابة (انظر: تنقية البروتينات باستخدام نظام تنقية البروتينات Ni-NTA). لا تعتمد تنقية البروتينات المؤتلفة باستخدام نظام QIA express على البنية ثلاثية الأبعاد للبروتين أو وسم 6xHis. يتيح ذلك تنقية البروتينات في خطوة واحدة، سواء في الظروف الطبيعية أو المُفسِّخة، من محاليل مخففة ومستخلصات خام. يمكن استخدام عوامل تفسيخ قوية ومنظفات لإذابة وتنقية المستقبلات، والبروتينات الغشائية، والبروتينات التي تُشكِّل أجسامًا مُتضمنة بكفاءة. يمكن إضافة كواشف تسمح بإزالة الملوثات المرتبطة بشكل غير نوعي بكفاءة إلى محاليل الغسل (انظر الجدول). تُستخلص البروتينات المنقاة في ظروف معتدلة بإضافة 100-250 ملي مول من الإيميدازول كمنافس أو عن طريق خفض الرقم الهيدروجيني.
التطبيقات
- دراسات هيكلية ووظيفية
- التبلور لتحديد البنية ثلاثية الأبعاد
- فحوصات تفاعل البروتين مع البروتين وتفاعل البروتين مع الحمض النووي
- التحصين لإنتاج الأجسام المضادة
- توسيع نطاق عملية التنقية إلى مستوى الإنتاج
توفر مصفوفات Ni-NTA تنقية موثوقة بخطوة واحدة للبروتينات الموسومة بـ His، وهي مناسبة لأي تطبيق، بما في ذلك:
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924