Qiagen، 30450، Ni-NTA Superflow (500 مل)

500 مل من الراتنج المشحون بالنيكل (أقصى ضغط: 140 رطل لكل بوصة مربعة)

سمات

- استقرار ميكانيكي فائق، وخصائص تدفق متميزة، وقدرة ربط ديناميكية عالية
- تنقية مريحة بخطوة واحدة للبروتينات الموسومة بستة علامات هيستيدين
- يسمح بمعدلات تدفق وضغوط عالية لتطبيقات الإنتاج على نطاق واسع وتطبيقات FPLC بكفاءة

تفاصيل المنتج

Ni-NTA Superflow عبارة عن مصفوفة كروماتوغرافيا تقارب لتنقية البروتينات المؤتلفة التي تحمل علامة His.

ترتبط بقايا الهيستيدين في وسم الهيستيدين بالمواقع الشاغرة في مجال التناسق لأيونات النيكل المثبتة بانتقائية عالية وقوة ارتباط كبيرة. تُحمّل مستخلصات الخلايا المصفاة على المصفوفات. ترتبط البروتينات الموسومة بالهيستيدين، بينما تمر البروتينات الأخرى عبر المصفوفة. بعد الغسل، تُستخلص البروتينات الموسومة بالهيستيدين في محلول منظم في ظروف طبيعية أو ظروف مُفسِّخة.

أداء

يتكون راتنج Ni-NTA Superflow من Ni-NTA مرتبط براتنج Superflow. يتميز هذا الراتنج بثبات ميكانيكي فائق وخصائص تدفق ممتازة وقدرة ربط ديناميكية عالية. تبلغ قدرته على ربط البروتينات الموسومة بـ 6xHis من 5 إلى 10 ملغم/مل. يتيح هذا الراتنج تنقية البروتينات الموسومة بـ 6xHis بخطوة واحدة باستخدام معدلات تدفق وضغوط عالية، مما يجعله مناسبًا للتطبيقات الإنتاجية واسعة النطاق وتطبيقات FPLC.

مبدأ

يعتمد نظام تنقية البروتينات QIAexpress Ni-NTA على الانتقائية الفائقة لراتنج Ni-NTA (حمض النيكل-نيتريلوترياسيتيك) الحاصل على براءة اختراع، وذلك للبروتينات التي تحتوي على علامة تقارب مكونة من ستة بقايا هيستيدين أو أكثر - علامة His. تتيح هذه التقنية تنقية أي بروتين تقريبًا يحمل علامة His في خطوة واحدة من أي نظام تعبير، سواء في الظروف الطبيعية أو ظروف التشويه.

يتميز نظام NTA، الذي يحتوي على أربعة مواقع ارتباط لأيونات النيكل، بقدرته على ربط النيكل بقوة أكبر من أنظمة تنقية البروتينات التي تعتمد على استخلاب المعادن، والتي لا توفر سوى ثلاثة مواقع للتفاعل مع أيونات المعادن. يمنع موقع الارتباط الإضافي تسرب أيونات النيكل، مما ينتج عنه قدرة ربط أعلى وتحضير بروتينات ذات نقاء أعلى من تلك التي يتم الحصول عليها باستخدام أنظمة تنقية البروتينات الأخرى التي تعتمد على استخلاب المعادن. يمكن استخدام نظام Ni-NTA Superflow لتنقية البروتينات الموسومة بالهيستيدين من أي نظام تعبير، بما في ذلك الفيروسات الباكولية، والخلايا الثديية، والخميرة، والبكتيريا.

إجراء

تتألف عملية تنقية البروتينات الموسومة بالهيستيدين من أربع مراحل: تحلل الخلايا، والربط، والغسل، والإذابة. لا تعتمد عملية تنقية البروتينات المؤتلفة باستخدام تقنية Ni-NTA Superflow على البنية ثلاثية الأبعاد للبروتين أو وسم 6xHis. وهذا يسمح بتنقية البروتين في خطوة واحدة، سواء في الظروف الطبيعية أو ظروف التشويه، من محاليل مخففة ومستخلصات خام.

يمكن استخدام مواد قوية مُفسِّخة للبروتينات ومنظفات فعّالة لإذابة وتنقية المستقبلات والبروتينات الغشائية والبروتينات التي تُشكِّل أجسامًا مُتضمنة بكفاءة. كما يمكن إضافة كواشف تسمح بإزالة الملوثات غير المرتبطة بشكل نوعي بكفاءة إلى محاليل الغسل (انظر الجدول).

يتم استخلاص البروتينات المنقاة في ظل ظروف معتدلة عن طريق إضافة 100-250 ملي مول من الإيميدازول كمنافس أو عن طريق خفض درجة الحموضة.

التطبيقات

- دراسات هيكلية ووظيفية
- التبلور لتحديد البنية ثلاثية الأبعاد
- فحوصات تفاعل البروتين مع البروتين وتفاعل البروتين مع الحمض النووي
- التحصين لإنتاج الأجسام المضادة
- توسيع نطاق عملية التنقية إلى مستوى الإنتاج

توفر مصفوفات Ni-NTA تنقية موثوقة بخطوة واحدة للبروتينات الموسومة بـ His، وهي مناسبة لأي تطبيق، بما في ذلك:

بالنسبة لـ Ni-NTA Superflow، يتوفر ملف رئيسي للأدوية (DMF) يحتوي على خصائص المنتج، والمعلمات الكروماتوغرافية، والمعلومات الكيميائية والفيزيائية، ومواصفات مراقبة الجودة، ومعلومات السلامة والسمية، وبروتوكولات التنقية القياسية للدعم في المسائل التنظيمية.