كياجين، 333175، لوحة كيو آي إيه سيك إكس هاي بي المخصصة للبشر

لا تتضمن لوحة QIAseq xHYB Custom Human Panel سوى مجموعة (مجموعات) المجسات المخصصة اللازمة لالتقاط التهجين بالإضافة إلى 12 تفاعل التقاط هجين، والتي عادة ما تكون كافية لـ 96 عينة.

سمات

- تتيح خوارزمية تصميم المجسات المخصصة المرنة تغطية ممتازة لمنطقة الهدف
- كشف عالي الحساسية للمتغيرات ذات الترددات الأليلية المنخفضة
- سير عمل ليوم واحد مع مرونة التقاط هجينة تتراوح من 30 دقيقة إلى ليلة كاملة
- سير عمل سهل التشغيل الآلي

تفاصيل المنتج

- لوحة تحكم مُخصصة بالكامل: لوحة تحكم مصممة لاستهداف مناطق اهتمام العميل (ROIs)
- مرونة الاستخدام مع اللوحة الحالية: تم تصميم اللوحة لتتكامل مع إحدى لوحات QIAseq xHYB Human Hybrid Capture Panels أو لوحة مخصصة أخرى
- تعزيز اللوحة الحالية (بدون حد لمنطقة الاهتمام): لوحة مصممة لتعزيز مناطق الاهتمام باستخدام مجسات إضافية لتغطية أوسع.

توفر لوحات QIAseq xHYB المخصصة للتحليل البشري حلاً مرنًا وقابلاً للتخصيص يعتمد على تقنية التهجين لالتقاط الحمض النووي، مما يتيح تسلسل الحمض النووي المستهدف من العينة إلى النتائج باستخدام تقنية التسلسل من الجيل التالي (NGS). تُسهّل تقنية التهجين السريع والفعال من QIAGEN عملية إثراء متجانسة للغاية للتسلسلات المستهدفة، وتتيح الكشف الشامل عن المتغيرات بأقل جهد ممكن في عملية التسلسل.

تتيح آلية عمل xHYB المرنة التهجين المتزامن لما يصل إلى ثماني مكتبات تسلسل الجينوم الكامل المفهرسة (WGS) في أقل من 30 دقيقة من مدخلات لا تقل عن 200 نانوغرام لكل مكتبة WGS لإنتاج مكتبات معقدة للغاية.

لتخصيص الأهداف المُثرية، تقدم شركة QIAGEN هذه الخيارات:

أداء

توفر فحوصات QIAseq xHYB تغطية متجانسة استثنائية بغض النظر عن محتوى GC للأهداف في اللوحة. يتيح هذا التجانس تغطية أكثر من 99% من القواعد النيتروجينية للأهداف عند تكبير ≥20x. كما يُمكن الكشف الشامل والحساس عن المتغيرات (حساسية مُجمعة تزيد عن 98% للمتغيرات النوكليوتيدية المفردة والحذف والإدخال) مع تقليل حالات فقدان البيانات إلى أدنى حد.

مبدأ

ازداد استخدام تحليل الإكسوم وأنواع أخرى من التحليل الجينومي الشامل (CGP) بشكل ملحوظ خلال السنوات العشر الماضية. يوفر التحليل الجينومي الشامل طريقة فعالة واقتصادية للكشف عن المتغيرات المرتبطة بالأمراض مقارنةً بتحليل التسلسل الجينومي الكامل (WGS).

يُعدّ التهجين طريقة فعّالة لإثراء الهدف في بناء مكتبات تسلسل الجيل التالي (NGS). تُصمّم مجسات الاستهداف المُؤشّرة بالبيوتين (المُكمّلة في تسلسلها لأهدافها) كطُعم لالتقاط الأهداف من مكتبة جزيئات الحمض النووي. بمجرد تهجين المجسات مع أهدافها، ترتبط هذه الهجائن (المجس-الهدف) بخرزات مغناطيسية مُغطّاة بالستربتافيدين من خلال التفاعل مع علامة البيوتين الموجودة على المجسات. يُستخدم مغناطيس بعد ذلك لإبقاء هذه الخرزات مع هجائن المجس-الهدف على جانب الأنبوب، بينما يُغسل الحمض النووي المتبقي غير المرغوب فيه، مما يُقلّل من التأثيرات الجانبية. بعد غسل الحمض النووي غير المرتبط، تُضخّم الأهداف وتُجهّز للتسلسل.

إجراء

مجموعة مكتبات QIAseq: التطبيق
مجموعات مكتبة الحمض النووي QIAseq FX: التجزئة الأنزيمية للحمض النووي الجينومي، التجزئة الأنزيمية للحمض النووي المتضرر بالفورمالين
مجموعات مكتبة QIAseq ذات المدخلات المنخفضة للغاية: التقطيع الفيزيائي للحمض النووي الجينومي، التقطيع الفيزيائي للحمض النووي المتأثر بالفورمالين، تحضير المكتبة من الحمض النووي الخالي من الخلايا

إنشاء مكتبات WGS المفهرسة

تُحضّر مكتبات تسلسل الجينوم الكامل (WGS) في الخطوة الأولى قبل الإثراء بتقنية التهجين. نوصي باستخدام مجموعات تحضير مكتبات WGS التالية (تُشترى بشكل منفصل)، والتي تتضمن محولات QIAseq الفريدة ذات الفهرس المزدوج (UDI) أو المحولات التوافقية ذات الفهرس المزدوج (CDI)، وهي متوافقة تمامًا مع سير عمل QIAseq xHYB Custom Human Panel، وتتيح معالجة ما يصل إلى 384 عينة في كل دورة تسلسل. كلا المجموعتين متوافقتان مع الحمض النووي الجينومي المستخلص من أنواع مختلفة من العينات، مثل الدم الكامل، والخلايا، والأنسجة، واللعاب، وعينات FFPE، والحمض النووي الخالي من الخلايا (cfDNA).

مجموعات مكتبة الحمض النووي QIAseq FX: سير عمل تحضير مكتبة WGS لمدة 2.5 ساعة مع تجزئة الحمض النووي الأنزيمية وإصلاح النهاية وربط المحولات، متبوعًا بتضخيم المكتبة.

مجموعة QIAseq Ultralow Input Kit: للحمض النووي المزدوج الذي تم تجزئته إنزيميًا أو كيميائيًا أو ميكانيكيًا أو طبيعيًا: تقوم هذه المجموعة بإنشاء مكتبات WGS عن طريق تلميع النهاية وربط المحولات وتضخيم المكتبة.

الجدول 1. مجموعات تحضير المكتبات الموصى بها للاستخدام في عملية التهجين.

إثراء مناطق الاهتمام من الحمض النووي الجينومي البشري

تُربط شظايا مكتبات التسلسل الجينومي الكامل المفهرسة بمجسات التقاط الحمض النووي المزدوج السلسلة المُبَيوْتَن، مع أوقات تهجين مرنة للغاية تتراوح من 30 دقيقة إلى حضانة ليلية. تُثبَّت الشظايا المرتبطة على خرزات الستربتافيدين، وتُغسل الشظايا غير المستهدفة. تُضخَّم شظايا المكتبة المُثرية باستخدام مزيج تضخيم خاص بعد الالتقاط، يسمح بتضخيم متساوٍ لمناطق الحمض النووي ذات محتوى GC مختلف بشكل كبير، مما يقلل من تحيز التسلسل الناتج عن تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR).

تحليل

بعد اكتمال عملية التسلسل، يتم تحميل ملفات FASTQ إلى برنامج QIAGEN CLC Genomics Workbench لفلترة البيانات، ومطابقة القراءات، وتحديد المتغيرات. ثم يتم تحميل مخرجات VCF إلى برنامج QIAGEN Clinical Insight، الذي يُفعّل سلسلة من عمليات فلترة المتغيرات، مما يُسهّل تحديد أولويات المتغيرات لتفسيرها بناءً على الأدلة العلمية.

التطبيقات

- تحديد الجينات المسببة للأمراض النادرة والوراثية
- علم الوراثة السكانية وفحص حاملي المرض
- مسارات وآليات الأمراض البشرية
- آليات العدوى المسببة للأمراض

يمكن استخدام لوحة QIAseq xHYB المخصصة في مجموعة متنوعة من التطبيقات التي تستخدم التسلسل المستهدف، مثل ما يلي: