مجموعة أدوات التحليل الكمي لمكتبة QIAseq من شركة Qiagen، رقم 333314

أنبوب واحد من مزيج البادئات (500 ميكرولتر)، وزجاجة واحدة من محلول التخفيف (30 مل)، وأنبوب واحد من معيار الحمض النووي (100 ميكرولتر)، و5 أنابيب من صبغة GeneRead qPCR SYBR Green (1.35 مل) لتحديد كمية مكتبة العينات قبل التسلسل الجيني من الجيل التالي (NGS).

سمات

- معيار الحمض النووي الجاهز للاستخدام، والموزع مسبقًا، والمخفف بالتسلسل (بصيغة المصفوفة)
- الحساب التلقائي لتركيز المكتبة
- بروتوكول بسيط، حساسية عالية، ونطاق ديناميكي واسع
- التوافق مع منصات Illumina و Ion Torrent/Proton NGS
- التوافق مع معظم أجهزة تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي

تفاصيل المنتج

يوفر نظام QIAseq Library Quant حلاً بسيطاً وجاهزاً للاستخدام لتحديد كمية مكتبات التسلسل الجيني من الجيل التالي (NGS)، مما يضمن نتائج متسقة في كل عملية تسلسل. يستخدم هذا النظام تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي (PCR) لتحديد كمية جزيئات الحمض النووي بدقة باستخدام محولات التسلسل في كلا الطرفين، مما يضمن كثافة مثالية للمجموعات أو نسبة مثالية بين القالب والخرز.

يرجى الملاحظة: سيتم إيقاف إنتاج GeneRead Library Quant Array (رقم المنتج 180611) و GeneRead Library Quant Kit (رقم المنتج 180612) بحلول نهاية عام 2016. يرجى استخدام QIAseq Library Quant Assay Kit (رقم المنتج 333314) بدلاً من ذلك.

هل تحتاج إلى عرض سعر لمشروعك البحثي أو ترغب في مناقشة مشروعك مع فريقنا المتخصص؟ تواصل معنا

أداء

تمت مقارنة حساسية ونطاق ديناميكية نظام QIAseq Library Quant مع مجموعة Agilent High Sensitivity DNA Kit، باستخدام مكتبتين من مكتبات NGS بتراكيز مختلفة. كانت المكتبة الأولى قابلة للقياس الكمي بواسطة كلا النظامين، بينما كان تركيز المكتبة الثانية منخفضًا جدًا، حيث كان أقل من حد الكشف لجهاز Agilent 2100 BioAnalyzer. في المقابل، تمكن نظام QIAseq Library Quant Array من قياس كلتا المكتبتين كميًا (انظر الشكل: نظام QIAseq Library Quant يُمكّن من قياس المكتبات ذات التراكيز الأقل من حد الكشف للطرق التقليدية).

إجراء

تبدأ عملية تنسيق المصفوفة (انظر الشكل QIAseq Library Quant Array workflow) بتخفيف مكتبة العينات مرتين بمقدار عشرة أضعاف، لضمان أن يكون تركيزها ضمن نطاق المعايير المخففة بالتسلسل. تُخلط العينات مع مزيج QIAseq qPCR SYBR Green Mastermix وتُقسّم إلى ثلاث نسخ تقنية على لوحة المصفوفة. يُجرى تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، وتُصدّر قيم العتبة (CT) الخام إلى ملف Excel المرفق لتحليل البيانات، وذلك لحساب تركيز المكتبة تلقائيًا (منصة Illumina) أو عامل تخفيف القالب (منصة Ion Torrent/Proton).

تتشابه آلية العمل في صيغة الأنابيب مع آلية العمل في صيغة المصفوفة، مع بعض الاختلافات الطفيفة. تبدأ العملية بتحضير خمسة تخفيفات متسلسلة عشرية لمعيار الحمض النووي، وتخفيفين عشريين لمكتبة العينات. يضمن هذا أن يكون تركيز المكتبة ضمن نطاق التخفيفات القياسية. بعد ذلك، تُخلط معايير الحمض النووي المخففة ومكتبات العينات مع اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) المرفق ومزيج QIAseq qPCR SYBR Green Mastermix المناسب. يُجرى تفاعل البوليميراز المتسلسل، وتُصدّر قيم العتبة (CT) إلى ملف Excel المرفق لتحليل البيانات، وذلك لحساب تركيز المكتبة تلقائيًا (منصة Illumina) أو عامل تخفيف القالب (منصة Ion Torrent/Proton).