شركة كياجين، 333923، خرزات QIAseq (10 مل)

خرز QIAseq (10 مل)

سمات

- سير عمل مبسط لمدة ساعتين ونصف لتسهيل الأتمتة
- يؤدي تعقيد المكتبة العالي والتغطية الموحدة إلى زيادة البيانات القابلة للتفسير إلى أقصى حد.
- محولات فريدة مزدوجة الفهرسة (UDI) متاحة لدمج ما يصل إلى 384 عينة
- حجم القطعة، وكمية الإدخال، وحجم الدفعة قابلة للتخصيص لأي تجربة تسلسل
- مدخلات مرنة من الحمض النووي تتراوح من 20 بيكوغرام إلى 1 ميكروغرام

تفاصيل المنتج

تُدمج تقنية QIAseq FX الخاصة بنا تجزئة الحمض النووي الأنزيمية بالكامل في بروتوكول مُبسط ومُحسّن لا يتطلب تنظيفًا إضافيًا للعينات قبل ربط المُهايئات. يُمكّن بروتوكول بسيط من ثلاث تفاعلات من أتمتة تحضير المكتبة بسهولة على منصات مُعالجة السوائل المُختلفة، مما يُقلل من وقت العمل اليدوي والتباين بين عمليات التشغيل. تتوافق هذه التقنية مع أجهزة تسلسل Illumina، وهي مُتاحة بتكوينات 24 و96 و384 عينة. يتطلب تحضير المكتبة ساعتين ونصف فقط، ودون الحاجة إلى معدات تقطيع الحمض النووي الإضافية باهظة الثمن، مما يُوفر وقتًا وتكاليف كبيرة.

هل ترغب بتجربة مجموعة QIAseq FX DNA Library UDI لأول مرة؟ اطلب عرض سعر لمجموعة تجريبية.

هل تحتاج إلى عرض سعر لمشروعك البحثي أو ترغب في مناقشة مشروعك مع فريقنا المتخصص؟ تواصل معنا.

أداء

تحويل سريع وفعال للمكتبات الإنزيمية

تتيح لك مجموعة QIAseq FX DNA Library Kit الجديدة تحويل 20 بيكوغرام إلى 1 ميكروغرام من الحمض النووي الجينومي إلى مكتبات مُضخّمة وجاهزة للتسلسل في غضون ساعتين ونصف فقط. إنها أسرع وأسهل في التشغيل الآلي من التقطيع الميكانيكي، ومع ذلك تُنتج مكتبات عالية الجودة تحتاجها لتسلسل الجينوم الكامل لأي كائن حي (انظر الشكل: سير العمل). يُنتج سير العمل قطعًا من الحمض النووي قابلة للتكرار بأحجام قابلة للتخصيص بشكل موثوق. (انظر الشكلين: أحجام القطع القابلة للتخصيص وقابلية التكرار العالية).

انخفاض نسبة GC لتحسين جودة المكتبة

تُجري مجموعة QIAseq FX DNA Library Kit تحضير المكتبات بأقل قدر من التحيز باستخدام إنزيمات مستقلة عن التسلسل للتجزئة، مما يُعطي نتائج مماثلة للقص الميكانيكي. (انظر الشكل: أقل قدر من التحيز في نسبة GC مقارنةً بالطرق الإنزيمية الأخرى)

توزيع تغطية فائق ومعدل تكرار أقل

تضمن تقنية QIAseq FX، بفضل تحيزها التسلسلي الأدنى، أن تتمتع غالبية الأهداف الجينومية بتغطية إجمالية متقاربة جدًا. وهذا يقلل الحاجة إلى تسلسل إضافي لرفع مستوى التغطية للأهداف ذات التغطية المنخفضة إلى نطاق قابل للتفسير، مما يوفر الوقت والموارد. تتميز مكتبات التسلسل الناتجة عن طريقة QIAseq FX بتعقيد عالٍ ومعدلات تكرار منخفضة، متجاوزةً بذلك القصور الشائع في طرق التجزئة الأنزيمية الأخرى. (انظر الأشكال: توزيع تغطية فائق ومعدل تكرار منخفض)

مكتبات خالية من تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) من مدخلات لا تقل عن 100 نانوغرام

تتيح المحولات المزدوجة ذات الرموز الشريطية كاملة الوظائف، بالإضافة إلى كواشف تضخيم المكتبات عالية الدقة الاختيارية، استخدام تقنيات تجزئة QIAseq FX وربط المحولات لإنتاج مكتبات خالية من تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) في أقل من ساعتين من وقت سير العمل. وبدون الحاجة إلى تضخيم إضافي للمكتبة باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل، يمكن لمجموعة QIAseq FX DNA Library Kit إنتاج تركيز مكتبة خالٍ من تفاعل البوليميراز المتسلسل أعلى من 2 نانومولار، وهو التركيز المطلوب للتسلسل على جهاز Illumina MiSeq أو NextSeq 500، وذلك من كمية ضئيلة من الحمض النووي المدخل لا تتجاوز 100 نانوغرام. (انظر الشكل: لا توجد فروق جوهرية بين تغطية المناطق الجينومية ذات المحتوى العالي أو المنخفض من الجوانين والسيتوزين).

مبدأ

تُدمج تقنية QIAseq FX من QIAGEN تجزئة الحمض النووي الأنزيمية في بروتوكول مُبسط ومُحسّن يجمع بين التجزئة وربط المُهايئات في تفاعل واحد، مما يوفر الوقت ويمنع الأخطاء. تحتوي مجموعة QIAseq FX على تركيبة نوكلياز مبتكرة تهضم الحمض النووي ثنائي السلسلة بشكل عشوائي دون تفضيل تسلسلي، مما يُنتج مكتبات تسلسل بأقل قدر من التحيز. يُمكن ضبط حجم القطع ببساطة عن طريق تغيير وقت حضانة الحمض النووي ثنائي السلسلة مع النوكلياز، مما يُتيح تطبيقات تسلسل مُختلفة. تضمن تركيبات الإنزيم والمحلول المُحسّنة إنتاجية عالية لمكتبة التسلسل. كما تُتيح بروتوكولات بناء المكتبة المُبسطة أتمتة تحضير المكتبة بسهولة على منصات مُعالجة السوائل المُختلفة.

توفر مجموعة QIAGEN QIAseq FX DNA Library Kit إجراءً سريعًا وإنزيميًا بالكامل، بدءًا من تجزئة الحمض النووي وحتى مكتبة NGS، دون أي خطوات تنظيف حتى بعد ربط المحولات بالحمض النووي للعينة.

إجراء

ملخص

تتألف مجموعة QIAseq FX DNA Library Kit من ثلاث خطوات سهلة التطبيق، تبدأ من الحمض النووي الجينومي وتنتهي بمكتبات NGS جاهزة للتسلسل. تبدأ العملية بتجزئة الحمض النووي وتعديل نهاياته، حيث يتم تحضير أجزاء العينة لتسهيل ربطها بمحولات ثنائية الترميز. بالنسبة للعينات التي تحتوي على أقل من 100 نانوغرام من الحمض النووي المدخل، أو في حال الحاجة إلى كميات كبيرة من الحمض النووي للمكتبة في تطبيقات لاحقة، يمكن إجراء خطوة تضخيم الحمض النووي الاختيارية باستخدام الكواشف المتوفرة في هذه المجموعة.

تجزئة الحمض النووي وربط المحولات

تُقسّم العينات المكونة من أجزاء DNA طويلة، مثل DNA الجينومي أو نواتج تضخيم PCR طويل المدى، إنزيميًا إلى أجزاء أصغر. يعتمد متوسط ​​حجم الجزء على التطبيقات وطول قراءة التسلسل، ويمكن تعديله بتغيير ظروف تفاعل تجزئة DNA. يُصلح DNA المُجزأ مباشرةً من الأطراف، ويُضاف حرف "A" إلى الطرف 3' أثناء تفاعل FX، مما يجعل أجزاء DNA جاهزة لربط المحولات. بعد هذه الخطوة، تُربط محولات خاصة بالمنصة بكلا طرفي أجزاء DNA. تحتوي هذه المحولات على تسلسلات ضرورية لربط مكتبات ذات رموز شريطية مزدوجة بخلية التدفق للتسلسل، مما يسمح بتضخيم PCR للأجزاء المربوطة بالمحولات وربط بادئات تسلسل Illumina القياسية.

تضخيم الحمض النووي

لضمان الحصول على أعلى إنتاجية من كميات محدودة من المادة الأولية، يمكن إجراء خطوة تضخيم عالية الدقة باستخدام الكواشف المضمنة في مجموعة QIAseq FX DNA Library Kit. يستطيع مزيج HiFi PCR Master Mix الخاص تضخيم مناطق الحمض النووي ذات المحتوى GC المختلف بشكل كبير بالتساوي، مما يقلل من تحيز التسلسل الناتج عن تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR).

بناء المكتبة

تتضمن مجموعة QIAseq FX DNA Library Kit محولات ثنائية الرموز الشريطية بتنسيق اللوحة. تحتوي كل بئر على مزيج فريد من رمزين شريطيين للتعريف. تدعم مجموعات QIAseq FX تجميع ما يصل إلى 24 أو 96 أو 384 عينة قبل التسلسل.

تنظيف وإزالة ثنائيات المحولات

بعد بناء المكتبة، يمكن تحقيق تنظيف التفاعل وإزالة ثنائيات المحولات باستخدام خرز QIAseq، مما يتيح التشغيل الآلي السهل على منصات التشغيل الآلي عالية الإنتاجية المختلفة.

تطبيع

يتكامل برنامج QIAseq Library Normalizer بسلاسة مع مجموعة QIAseq FX DNA Library Prep Kit، مما يُغني عن الحاجة إلى تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR) المُرهِق والتخفيف اليدوي للمكتبات قبل تجميعها. تُصبح المكتبات المُعايرة جاهزة للتسلسل من الحمض النووي ثنائي السلسلة (dsDNA) بتركيز 4 نانومول/لتر تقريبًا.