كياجين، 334377، QIAseq FastSelect -Globin Kit (96)

يحتوي على أنبوب واحد من كاشف QIAseq FastSelect لإزالة mRNA الغلوبين؛ يكفي لـ 96 تفاعلًا من عينات بشرية وفأرية وجرذية

سمات

- مكتبات RNA-seq عالية الجودة ومُعلقة لتحليل النسخ الجيني
- يلزم فقط 100-5000 نانوغرام من الحمض النووي الريبي الكلي أو 1-100 نانوغرام من الحمض النووي الريبي المُخصب بـ poly-A+
- يتضمن خرزات QIAseq وألواح محول العينات
- متوافق مع العينات الطازجة، وكذلك عينات FFPE
- يتضمن الوصول إلى بوابة تحليل تسلسل الحمض النووي الريبوزي (RNA-seq) لعينات الإنسان والفأر والجرذ

تفاصيل المنتج

توفر مجموعات QIAseq Stranded RNA Library Kits طريقةً فائقةً لإنشاء مكتبات تسلسل الحمض النووي الريبوزي (RNA-seq) المتوافقة مع Illumina من عينات الحمض النووي الريبوزي الكلي أو عينات الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) المُخصبة. بالنسبة لتطبيقات مثل التعبير الجيني، أو الجينات المندمجة، أو الكشف عن الطفرات، تتضمن مجموعات QIAseq Stranded mRNA Select Kits بروتوكولًا مُحسَّنًا لتخصيب الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) مع جميع الكواشف والمكونات اللازمة لبناء مكتبات تسلسل الحمض النووي الريبوزي (RNA-seq) عالية الجودة. تستخدم مجموعات QIAseq Stranded RNA Library Kits بروتوكولًا فريدًا لا يتطلب استخدام أكتينوميسين د للحفاظ على خصوصية السلسلة أو دUTP لضمان بناء مكتبة مُوجهة، مما يضمن كشفًا عالي الحساسية لجزيئات الحمض النووي الريبوزي (RNA) منخفضة التعبير مع زيادة التعقيد وتغطية النسخ. تستخدم مجموعات QIAseq Stranded RNA Library Kits مزيج CleanStart HiFi PCR Mastermix لضمان تضخيم عالي الدقة للمكتبات والحماية من تلوث تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). يُضمَّن مزيج CleanStart HiFi PCR Mastermix في كل مجموعة أو يمكن استخدامه بشكل منفصل مع طرق تحضير المكتبات الأخرى.

قم بتحليل بيانات RNA-seq الموجهة بسهولة باستخدام بوابة تحليل RNA-seq المتكاملة مع GeneGlobe - وهو حل تحليل بيانات بديهي قائم على الويب تم إنشاؤه لعلماء الأحياء ومضمن في مجموعات مكتبة QIAseq Stranded RNA.

هل ترغب بتجربة هذا الحل لأول مرة؟ اطلب عرض سعر لمجموعة تجريبية.

لإزالة الحمض النووي الريبوزي (rRNA) والحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) للغلوبين في خطوة واحدة فقط في غضون 20 دقيقة، استخدم مجموعات QIAseq FastSelect –rRNA HMR.

أداء

تجربة QIAseq 1: تجربة QIAseq 2
نسبة القراءات التي تم تعيينها في أزواج: 91.86%
نسبة القراءات التي تم تعيينها في أزواج مكسورة: 4.84%
نسبة القراءات غير المُرتبطة: 3.29%
المجموع: 100

تجربة QIAseq 1: تجربة QIAseq 2
نسبة القراءات المُرتبطة بشكل فريد: 92.02%
نسبة القراءات التي تم ربطها بمواقع متعددة: 4.51%
نسبة القراءات التي تم ربطها بعدد كبير جدًا من المواقع: 0.05%
تمت قراءة البيانات التالية: قصيرة جدًا: 3.38%
تمت قراءة البيانات المُرتبطة: أخرى: 0.04%
المجموع: 100

توفر مجموعات مكتبات QIAseq Stranded RNA طريقةً فائقةً لإنتاج مكتبات تسلسل الحمض النووي الريبوزي (RNA-seq) عالية الجودة، متوافقة مع أجهزة تسلسل Illumina، في غضون 4-5 ساعات فقط (انظر الشكلين "تحضير مكتبات تسلسل الحمض النووي الريبوزي (RNA-seq) في يوم واحد" و"ملامح نسخ قابلة للتكرار مع كميات مختلفة من الحمض النووي الريبوزي (RNA) المدخل"). وبالمقارنة مع مجموعات الموردين الآخرين، تضمن مجموعات QIAseq تعقيدًا عاليًا للمكتبة مع معدلات تكرار منخفضة، بالإضافة إلى إنتاجية عالية للمكتبات (انظر الشكل "تعقيد عالٍ للمكتبة ومعدلات تكرار منخفضة"). عند استخدام بروتوكول إثراء الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) المُحسَّن للغاية من QIAseq، يتم ربط أكثر من 96% من القراءات بمناطق ترميز البروتين، مما يدل على الكفاءة العالية والخصوصية لخطوات إثراء الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) وبناء المكتبة في QIAseq (انظر الشكل "توزيع النمط الحيوي للحمض النووي الريبوزي: الكفاءة العالية لبروتوكول إثراء الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA)"). يتم توليد بيانات RNA-seq عالية الجودة، حتى من عينات FFPE المتدهورة للغاية (انظر الشكل "بيانات RNA-seq من RNA المتدهور للغاية").

جودة رسم خرائط عالية مع مسارات تحليل بيانات مختلفة

تضمن مجموعات مكتبة الحمض النووي الريبي المجدول QIAseq معدلات عالية من القراءات المحددة بشكل فريد، مما يسمح لك بتحسين كمية القراءات التي يمكنك استخدامها لتحليل بيانات NGS اللاحقة والمساعدة في توفير الوقت والتكاليف (انظر الجداول أدناه).

حد أدنى ممتاز للكشف (LoD)

تُظهر مجموعات مكتبة الحمض النووي الريبوزي الموجه QIAseq حساسية عالية فيما يتعلق بالكشف عن النسخ الجينية منخفضة الوفرة. حتى الكميات الضئيلة من جزيئات الحمض النووي الريبوزي تؤدي إلى قراءات كافية لتقنية التسلسل الجيني عالي الإنتاجية (NGS)، مما يضمن تحديدًا دقيقًا للنسخ الجينية من الجينات منخفضة التعبير.

تعقيد عالٍ للمكتبة مع معدلات تكرار منخفضة

تُنتج الإنزيمات المُحسّنة للغاية، إلى جانب البروتوكولات المُطوّرة، مكتبات تسلسل الحمض النووي الريبوزي (RNA-seq) ذات تعقيد عالٍ وتكرار ضئيل. وهذا يضمن أن توفر مجموعات مكتبات الحمض النووي الريبوزي المجدول QIAseq أقصى قدر من البيانات من كل عينة، حتى عند البدء بكميات قليلة من الحمض النووي الريبوزي.

تركيبة CleanStart PCR الجديدة تزيل الملوثات بشكل فعال

تستخدم خطوة الإثراء CleanStart PCR بوليميراز الحمض النووي عالي الدقة لضمان التضخيم الدقيق لمكتبة RNA-seq الخاصة بك، مع توفير طريقة متكاملة لإزالة تلوث PCR.

مبدأ

تُمكّن مجموعات QIAseq Stranded RNA Library Kits من إنشاء مكتبات تسلسل الجيل التالي (NGS) بسرعة وكفاءة ودقة، ليس فقط من الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) عالي الجودة، بل أيضًا من الحمض النووي الريبوزي الكلي المجزأ منخفض الجودة من مصادر متنوعة. بعد خطوة تجزئة الحمض النووي الريبوزي الاختيارية، تُنتج خطوة النسخ العكسي الحمض النووي التكميلي (cDNA) من السلسلة الأولى. ويتم ضمان خصوصية السلسلة بفضل التركيبات المُحسّنة لإنزيم النسخ العكسي والمحلول المنظم المُقدمة من مجموعات QIAseq Stranded RNA Library Kits، مما يُغني عن استخدام الكواشف السامة مثل أكتينوميسين د. في خطوة تخليق السلسلة الثانية، يسمح مزيج خاص من الإنزيمات مع تركيبات محاليل منظمة مُعدّلة بعناية بتحليل الحمض النووي الريبوزي، وإنتاج سلسلة ثانية من الحمض النووي التكميلي، وتكوين نهايات DNA غير لاصقة، وإضافة قاعدة الأدينين اللازمة لربط محولات Illumina المتوافقة بكفاءة. تضمن خطوة الربط الخاصة بنوع السلسلة في بروتوكول QIAseq Stranded RNA Kit خصوصية السلسلة دون الحاجة إلى كواشف إضافية أو خطوات بروتوكول مُرهقة ومُستهلكة للوقت. يمكن استخدام لوحات المحولات المرفقة بتقنية الفهرسة المزدوجة لتسلسل عينات متعددة (حتى 96 عينة). يعمل مزيج تفاعل البوليميراز المتسلسل CleanStart PCR بكفاءة عالية على تضخيم مكتبة تسلسل الحمض النووي الريبوزي (RNA-seq) المُنشأة، بغض النظر عن تسلسلات GC أو AT العالية، كما أنه يُزيل المواد الملوثة مثل مكتبات التسلسل من الجيل التالي (NGS) المُنشأة سابقًا. توفر خرزات QIAseq المغناطيسية المرفقة مع المجموعات تنظيفًا سريعًا وفعالًا للتفاعل بين خطوات البروتوكول. يمكن إنشاء مكتبات تسلسل الحمض النووي الريبوزي (RNA-seq) عالية الجودة في غضون 4-5 ساعات فقط.

إجراء

تجزئة الحمض النووي الريبوزي (RNA) والنسخ العكسي

تضمن خطوة تجزئة الحمض النووي الريبوزي (RNA) باستخدام محلول النسخ العكسي إنتاج مكتبات RNA بأحجام إدخال مثالية. ويمكن تعديل حجم القطع عن طريق تقصير أو إطالة فترات الحضانة. كما يسمح البروتوكول باستخدام RNA المدخل المُجزأ مسبقًا، بالإضافة إلى RNA المُستخلص من أنسجة FFPE منخفضة الجودة والمتدهورة بشدة. في خطوة النسخ العكسي، تضمن تركيبات إنزيم النسخ العكسي والمحلول المُحسّنة خصوصية السلسلة أثناء إنتاج الحمض النووي التكميلي (cDNA). ولا حاجة لاستخدام الكواشف السامة مثل أكتينوميسين د، التي تؤثر سلبًا على كفاءة النسخ العكسي.

تخليق السلسلة الثانية / إصلاح النهاية / إضافة الأدينين

تم تحسين تركيبة مزيج الإنزيم والمحلول المنظم لإتمام عملية تخليق السلسلة الثانية، وإصلاح الأطراف، وإضافة الأدينين في وقت قصير جدًا. في البداية، تتحلل جزيئات الحمض النووي الريبوزي (RNA). بعد ذلك، تُستخدم جزيئات الحمض النووي التكميلي (cDNA) كقوالب لتوليد سلسلة cDNA ثانية. ثم، يتم توليد الحمض النووي المزدوج ذي النهايات غير المتداخلة. وأخيرًا، يُضاف نيوكليوتيد الأدينين إلى الطرف 5' من cDNA. لا يتطلب الأمر تعديل النيوكليوتيدات السداسية، وهو أمر ضروري في طريقة dUTP، مما يضمن كفاءة مثالية لتوليد cDNA.

ربط محول متوافق مع Illumina

يُمكّن الربط المُحدد للسلسلة باستخدام محولات متوافقة مع Illumina من إنشاء مكتبات تسلسل الحمض النووي الريبوزي (RNA-seq) بسرعة وكفاءة باستخدام الحمض النووي التكميلي (cDNA) المُحضر من خطوة تحضير المكتبة السابقة. ويمكن الحفاظ على معلومات أصل السلسلة للحمض النووي الريبوزي الأولي دون الحاجة إلى كواشف إضافية أو نيوكليوتيدات مُعدلة أو خطوات بروتوكول إضافية. وتتيح لوحات المحولات الجاهزة للاستخدام المرفقة تسلسل ما يصل إلى 96 عينة مختلفة من خلال الجمع بين رمز شريطي فريد مكون من 8 نيوكليوتيدات (i5 و i7).

إثراء تفاعل البوليميراز المتسلسل CleanStart

يعمل مزيج CleanStart PCR الخاص بشركة QIAGEN على تضخيم مكتبة تسلسل الحمض النووي الريبوزي (RNA-seq) بكفاءة وانتظام بغض النظر عن محتوى الجوانين والسيتوزين في القالب، مع توفير الحماية من تلوث تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). يضمن الجمع بين تركيبة محلول منظم مُحسَّنة وإنزيم بوليميراز Hotstart HiFi معدلات طفرات منخفضة وكفاءة عالية في إثراء مكتبة تسلسل الحمض النووي الريبوزي (RNA-seq). تتيح خطوة التطهير CleanStart إزالة المواد الملوثة، مثل مكتبات التسلسل الجيني من الجيل التالي (NGS) المُنشأة سابقًا، لزيادة نقاء العينة إلى أقصى حد.

التطبيقات

تُنتج مجموعات QIAseq Stranded RNA Library Kits مكتبات تسلسل الحمض النووي الريبوزي (RNA-seq) من كميات قليلة من الحمض النووي الريبوزي من مصادر وأنواع مختلفة. وتتيح مكتبات التسلسل عالي الإنتاجية (NGS) الناتجة، ذات التعقيد العالي والتخصص في اتجاه السلسلة، بالإضافة إلى خصائص التطهير لمزيج CleanStart PCR Mix، تحليل حتى النسخ ذات الوفرة المنخفضة بحساسية عالية. يسمح البروتوكول المبسط، الذي يستغرق من 4 إلى 5 ساعات، بإنتاج مكتبات NGS، وقياسات مراقبة جودة المكتبة، وبدء عملية تسلسل NGS في يوم عمل واحد فقط.