شركة كياجين، 339121، مثبطات الحمض النووي الريبوزي الميكروي miRCURY LNA (5 نانومول)

5 نانومول من مثبطات miRNA من نوع miRCURY LNA ذات روابط فوسفاتية ثنائية الإستر طبيعية، مع خيار إضافة علامة FAM، متوفرة في شكل أنبوب.

سمات

- مثبطات مُعايرة T m ذات فعالية لا مثيل لها ضد أي miRNA، بغض النظر عن محتوى GC
- مثبطات قوية لدرجة أنها تعمل عن طريق الامتصاص الذاتي دون الحاجة إلى كواشف نقل الجينات.
- خصوصية فائقة واستقرار بيولوجي لنشاط مضاد للجينات طويل الأمد
- متوفر بكميات 1 نانومول، 5 نانومول، و15 نانومول
- علامات فلورية لتسهيل مراقبة كفاءة عملية النقل الجيني

تفاصيل المنتج

تتميز مثبطات miRCURY LNA miRNA ومثبطات Power Inhibitors بفعاليتها الاستثنائية، مما يُمكّن من تقييم الأنماط الظاهرية الخلوية في دراسات فقدان وظيفة miRNA، حتى في سلالات الخلايا التي يصعب نقل الجينات إليها. تتشابه ضوابط مثبطات miRCURY LNA miRNA وضوابط مثبطات Power Inhibitors في طول التسلسل وتصميم LNA مع المثبطات، ولا يوجد بينها أي تشابه مع أي تسلسل miRNA أو mRNA معروف في الفئران أو الجرذان أو البشر.

أداء

تتمتع مثبطات miRNA من نوع miRCURY LNA، المُعايرة وفقًا لدرجة حرارة الانصهار (Tm)، بفعالية فائقة ضد جميع أنواع miRNA، بغض النظر عن محتواها من GC (انظر الشكل: أمثلة على إسكات miRNA باستخدام مثبطات miRNA من نوع miRCURY LNA). تتميز هذه المثبطات بفعاليتها العالية لدرجة أنه يمكن إضافتها مباشرةً إلى مزارع الخلايا دون الحاجة إلى عوامل نقل الجينات (انظر الشكل: إسكات miRNA عبر الامتصاص المباشر (gymnosis) لمثبطات Power). بالإضافة إلى ذلك، يُمكّن الإعطاء الجهازي البسيط لمثبطات miRNA المُعدّلة بتقنية LNA والمُصممة للاستخدام في الجسم الحي من تحليل وظيفة miRNA في النماذج الحيوانية.

مبدأ

- مثبطات miRNA من نوع miRCURY LNA: تحتوي هذه المثبطات على روابط فوسفاتية ثنائية الإستر طبيعية، وهي فعالة للغاية في معظم التجارب القياسية.
- مثبطات miRNA القوية من نوع miRCURY LNA: تتميز هذه المثبطات بهياكل أساسية معدلة بالكامل بالفوسفوروثيوات (PS)، وهي مفيدة للتطبيقات الصعبة، مثل خطوط الخلايا التي يصعب نقل الجينات إليها.

- عنصر التحكم السلبي أ: لا توجد نتائج ذات تشابه >70% مع أي تسلسل في أي كائن حي في قواعد بيانات NCBI و miRBase.
- عنصر التحكم السلبي ب: لا توجد نتائج مطابقة بنسبة تزيد عن 70% لأي تسلسل بشري أو فأري أو جرذي في قواعد بيانات NCBI وmiRBase؛ لا يُنصح باستخدامه في النباتات

مثبطات miRCURY LNA miRNA هي أوليغونوكليوتيدات مضادة للمعنى ذات تسلسل مكمل تمامًا لأهدافها. عند إدخالها إلى الخلايا، تعزل هذه المثبطات miRNA المستهدف في جزيئات غير متجانسة عالية الاستقرار، مما يمنع miRNA بشكل فعال من التهجين مع شركائه الخلويين الطبيعيين. تتحدد فعالية مثبطات miRNA المضادة للمعنى من خلال ألفة ارتباطها بهدف miRNA واستقرارها البيولوجي. تعتمد ألفة الارتباط للمثبطات العادية ذات التركيب الكيميائي النيوكليوتيدي التقليدي على محتوى GC لهدف miRNA. نظرًا لأن محتوى GC في miRNAs يمكن أن يتراوح بين 5% و95%، فإن فعالية هذه المثبطات ستختلف اختلافًا كبيرًا وفقًا لتسلسل miRNA، مع انعدام الفعالية تقريبًا مع miRNAs الغنية بـ AT.

تصميم

لقد استغللنا خصائص الألفة العالية لتقنية LNA لإنتاج مثبطات miRCURY LNA miRNA المُعَيَّرة بدرجة حرارة الانصهار (Tm) ومثبطات miRCURY LNA miRNA عالية الفعالية. يؤدي تغيير عدد ومواقع نيوكليوتيدات LNA في هذه المثبطات المُختلطة من DNA/LNA، والاختيار الدقيق للتسلسلات المستهدفة، إلى توحيد درجات انصهار الأوليغونوكليوتيدات ضمن نطاق ضيق حول درجة حرارة عالية مثالية مُحددة تجريبيًا (انظر الشكل: السمات العامة لتصميم مثبطات miRNA من الجيل الثالث). تضمن هذه السمات التصميمية أن تتمتع مثبطات miRCURY LNA miRNA بنفس الفعالية العالية، بغض النظر عن محتوى GC لأهداف miRNA الخاصة بها. نُقدم النوعين التاليين من مثبطات miRNA:

إسكات الحمض النووي الريبوزي الميكروي بدون استخدام كواشف النقل الجيني

يُحسّن الجمع بين تعديلات LNA والفوسفوروثيوات بشكلٍ كبير استقرار مثبطات miRCURY LNA miRNA Power Inhibitors ضد التحلل الأنزيمي، مما يجعل فعاليتها أفضل بكثير من المثبطات العادية (انظر الشكل: تعزيز فعالية مثبطات miRCURY LNA miRNA Power Inhibitors). في الواقع، تتميز هذه المثبطات بثباتها وفعاليتها العالية لدرجة أنه يُمكن إضافتها مباشرةً إلى وسط الاستنبات المحتوي على المصل دون الحاجة إلى عوامل نقل الجينات، مما يوفر تثبيطًا فعالًا لـ miRNA عبر التوصيل المباشر غير المُساعد، والمعروف أيضًا باسم "التوصيل المباشر". يتيح ذلك تقييم نتائج إسكات miRNA دون القلق بشأن الآثار الجانبية المُربكة لعوامل نقل الجينات. يتطلب التوصيل المباشر تركيزات أعلى بكثير من المثبط، وتكون حركية الامتصاص أبطأ بشكل عام من استخدام عوامل نقل الجينات (انظر الشكل: إسكات miRNA عبر الامتصاص المباشر (التوصيل المباشر) لمثبطات Power Inhibitors). علاوة على ذلك، تختلف قدرة الخلايا على امتصاص الأوليغونوكليوتيدات مباشرةً من وسط الاستنبات اختلافًا كبيرًا بين سلالات الخلايا. تُعدّ مثبطات الطاقة مفيدةً بشكل خاص للتطبيقات المعقدة، مثل تلك التي تتضمن خلايا يصعب نقل الجينات إليها، أو أهداف miRNA عالية التعبير، أو التجارب طويلة الأمد، أو عندما تؤدي إجراءات نقل الجينات العادية إلى نتائج ظاهرية غير مقبولة. لا يُنصح باستخدام مثبطات الطاقة miRCURY LNA miRNA مع الخلايا أو سلالات الخلايا المشتقة من العضلات أو الجهاز العصبي المركزي. من المعروف أن هذه الأنواع من الخلايا حساسة بشكل خاص للأوليغونوكليوتيدات المعدلة بالفوسفوروثيوات، والتي قد تُعطي أنماطًا ظاهرية مضللة لا علاقة لها بنشاط مضادات التعبير الجيني.

سمية منخفضة وآثار جانبية غير مرغوب فيها

تتيح الفعالية العالية لمثبطات miRCURY LNA miRNA ومثبطات miRCURY LNA miRNA Power استخدامها بتراكيز منخفضة، مما يقلل من خطر الآثار الجانبية غير المرغوب فيها غير المرتبطة بنشاط مضادات التعبير الجيني. تُعدّ ثنائيات الحمض النووي DNA/RNA ركيزةً لإنزيم RNase H، الذي يُحلل سلسلة RNA، ونستخدم هذا النشاط التحفيزي في GapmeRs الخاصة بنا لكتم التعبير الجيني RNA. ولضمان عدم تحلل مثبطات miRNA الخاصة بنا لـ mRNA و RNA الطويل غير المشفر الذي يحتوي على تسلسل مكمل، قمنا بوضع نيوكليوتيدات LNA بحيث لا تفصل بينها مسافة تزيد عن بضع قواعد. يثبط LNA نشاط RNase H بفعالية، مما يضمن عدم تعرف RNase H على ثنائيات مثبط LNA/RNA كركائز. ونتيجةً لذلك، يتم تقليل التأثيرات الجانبية على استقرار mRNA و lncRNA إلى أدنى حد. وأخيرًا، تتمتع الريبوسومات بنشاط هيليكاز قوي قادر على إزالة حتى قليل النوكليوتيدات القصيرة عالية الألفة والمعززة بتقنية LNA. لذلك، فإن مثبطاتنا لها تأثيرات ضئيلة على ترجمة mRNAs التي تحتوي على تسلسلات مكملة في إطار القراءة المفتوح.

التغطية

صُممت مثبطات miRCURY LNA miRNA ومثبطات miRCURY LNA miRNA Power مسبقًا لجميع أنواع miRNA المعروفة في الإنسان والفأر والجرذ. ونظرًا لأن العديد من أنواع miRNA محفوظة تطوريًا، فإن هذه المجموعة من المثبطات تغطي نسبة كبيرة من أنواع miRNA في الفقاريات واللافقاريات. تتوفر هذه المثبطات أيضًا مع علامات الفلورسين (6-FAM). جميع مثبطات miRNA مُزالة الأملاح ومُجففة ومُعبأة في أنابيب بكميات 1 نانومول، و5 نانومول، و15 نانومول.

ضوابط سلبية مصممة مسبقًا

نُقدّم حاليًا أربعة ضوابط سلبية مُصممة مُسبقًا، اثنان منها للاستخدام مع مُثبّطات miRCURY LNA miRNA، واثنان للاستخدام مع مُثبّطات miRCURY LNA miRNA Power. تتميّز ضوابط مُثبّطات miRCURY LNA miRNA Power بهياكل أساسية مُعدّلة بالفوسفوروثيوات لتتوافق مع مُثبّطات miRCURY LNA miRNA Power. لكل فئة من المُثبّطات، نُقدّم الضابطين التاليين: