شركة كياجين، 339306، اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل miRCURY LNA miRNA

يحتوي على بادئات أمامية وعكسية لـ 200 تفاعل qPCR في الوقت الحقيقي باستخدام SYBR® Green، أو 166 تفاعل PCR رقمي باستخدام EvaGreen للوحة Nanoplate 8.5k، أو 50 تفاعل PCR رقمي باستخدام EvaGreen للوحة Nanoplate 26k

سمات

- تتيح الحساسية غير المسبوقة تحديد كمية الحمض النووي الريبوزي الميكروي (miRNA) من 1 بيكوغرام فقط من الحمض النووي الريبوزي الكلي
- مثالي للعينات ذات كمية الحمض النووي الريبي المنخفضة، مثل المصل/البلازما، وشرائح FFPE، وعينات LCM
- تميز الخصوصية العالية بين جزيئات miRNA المتشابهة وجزيئات miRNA الناضجة من السلائف
- بروتوكول سريع وبسيط من خطوتين يستغرق أقل من 3 ساعات
- تغطية كاملة لقاعدة بيانات miRBase تُمكّن من تحديد خصائص miRNA من أي كائن حي

تفاصيل المنتج

تُعدّ فحوصات miRCURY LNA miRNA PCR عبارة عن مجموعات بادئات PCR فردية لـ miRNA، تُمكّن من قياس كمية miRNA بدقة وحساسية عاليتين باستخدام نظام miRCURY LNA miRNA PCR. تتميز بادئات التضخيم الأمامية والخلفية لـ miRNA بأنها مُخصصة لها، ومُحسّنة بتقنية LNA. تتوفر هذه الفحوصات في أنابيب أو صفائح، حيث يحتوي كل أنبوب أو بئر على 200 تفاعل.

هل تحتاج إلى عرض سعر لمشروعك البحثي أو ترغب في مناقشة مشروعك مع فريقنا المتخصص؟ تواصل معنا الآن!

أداء

حساسية لا مثيل لها

تُحقق حساسية فحوصات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) الخاصة بتقنية miRCURY LNA miRNA الاستثنائية من خلال الجمع بين النسخ العكسي الشامل والبادئات المُحسَّنة بتقنية LNA والمُعايَرة بدرجة حرارة الانصهار (Tm). يُمكّن هذا المزيج من تحديد كمية دقيقة وموثوقة لجزيئات miRNA الفردية من كمية ضئيلة تصل إلى 1 بيكوغرام من الحمض النووي الريبوزي الكلي المُدخل في عملية التخليق الأولي للحمض النووي التكميلي (cDNA) ذي السلسلة الأولى (انظر الشكل: تحديد كمية دقيقة من كمية تصل إلى 1 بيكوغرام من الحمض النووي الريبوزي الكلي كمادة أولية).

بالمقارنة مع أنظمة تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي الأخرى للـ miRNA التي تستخدم إما بادئات الحلقة الجذعية أو بادئات الحمض النووي القياسية، فإن البادئات المحسنة بتقنية LNA توفر حساسية متزايدة بشكل كبير، خاصة بالنسبة للـ miRNAs الغنية بـ AT (انظر الشكل LNA-enhanced primers ينتج عنه حساسية متزايدة بشكل كبير مقارنة ببادئات الحمض النووي).

كما أن متطلبات العينة المنخفضة تسمح بتحديد كمية miRNA باستخدام الحمض النووي الريبي الكلي المنقى من عينات صعبة مثل عينات LCM والمصل/البلازما (انظر الأشكال: الكشف عن التعبير التفاضلي لـ miRNAs في عينات LCM من مقاطع الأنسجة FFPE والاختلافات في التعبير عن miRNA بين عينات المصل).

تم التحقق من صحتها وتحسينها بالكامل

تم تحسين جميع فحوصات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) للكشف عن الحمض النووي الريبوزي الميكروي (miRNA) بتقنية miRCURY LNA، والتي تم التحقق من صحتها في المختبر، لتكون بأعلى حساسية ممكنة. يكشف أكثر من 80% من الفحوصات عن 5 نسخ على الأقل من الحمض النووي الريبوزي الميكروي في تفاعل البوليميراز المتسلسل (انظر الشكل: التخفيف التسلسلي لـ hsa-miR-181a). كما تم التحقق من صحة مجموعات البادئات لضمان التضخيم النوعي للهدف وتقليل إشارة الخلفية إلى أدنى حد (انظر الشكل: التضخيم النوعي والحساس للحمض النووي الريبوزي الميكروي).

المنصة الوحيدة ذات التخصص المثالي

تُعدّ فحوصات miRCURY LNA miRNA PCR المنصة الوحيدة لتحديد كمية miRNA التي تتميز بخصوصية مطلقة (انظر دراسة miRQC المنشورة في Nature Methods)، وقد تفوقت على منصة أخرى تعتمد على المجسات لتحديد كمية miRNA qPCR في اختبارات الخصوصية (انظر الشكل: اختبار الخصوصية باستخدام نظام miRNA qPCR القائم على المجسات). تضمن الخصوصية التامة عدم وجود نتائج إيجابية خاطئة، وتؤكد وجود إشارات miRNA قوية وموثوقة فقط.

تمييز فائق

يُتيح دمج LNA في كلٍّ من بادئات تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) الأمامية والعكسية تصميمَ فحوصاتٍ قادرةٍ على التمييز بين تسلسلات miRNA التي تختلف في نيوكليوتيد واحد فقط (انظر الشكل: التمييز بين النيوكليوتيدات المفردة). إضافةً إلى ذلك، تستطيع هذه الفحوصات التمييز بين تسلسلات miRNA الناضجة وسلائفها.

سريع وسهل وقابل للتكرار

يوفر لك هذا البروتوكول سهل التطبيق، والذي يستغرق ثلاث ساعات فقط، الوقت والجهد في المختبر. وباستخدام تفاعل النسخ العكسي نفسه كقالب في جميع تفاعلات البلمرة المتسلسلة اللاحقة، تُبسط العملية بشكل كبير مقارنةً بالأنظمة التي تتطلب تخليق السلسلة الأولى الخاصة بـ miRNA. ويقل عدد خطوات السحب بالماصة إلى الحد الأدنى، ويُقلل التباين التقني إلى أدنى حد. وهذا يُتيح تحقيق دقة عالية للغاية في النتائج، سواءً من يوم لآخر أو حتى من موقع لآخر.

تم تحسين فحوصات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) لـ miRCURY LNA miRNA للاستخدام مع مجموعة miRCURY LNA RT ومجموعة miRCURY LNA SYBR Green PCR. استخدام كواشف أخرى سيؤثر على جودة النتائج.

مبدأ

اسم المنتج: الكائن الحي المستهدف
مجموعة بادئات التحكم، SNORD38B (hsa): hsa
مجموعة بادئات التحكم، SNORD44 (hsa): hsa
مجموعة البادئات الضابطة، SNORD48 (hsa): hsa
مجموعة بادئات التحكم، SNORD49A (hsa): hsa
مجموعة البادئات الضابطة، SNORA66 (hsa): hsa
مجموعة بادئات التحكم، 5S rRNA (hsa): hsa، mmu
مجموعة البادئات الضابطة، U6 snRNA (hsa، mmu): hsa، mmu، rno
مجموعة البادئات الضابطة، RNU5G snRNA (mmu، hsa): mmu، hsa، rno
مجموعة بادئات التحكم، RNU1A1 (mmu، hsa): mmu، hsa، rno
مجموعة بادئات التحكم، SNORD65 (mmu): mmu
مجموعة بادئات التحكم، SNORD68 (mmu): mmu
مجموعة بادئات التحكم، SNORD110 (mmu): mmu

نظام فريد لتحليل بيانات الحمض النووي الريبوزي الميكروي (miRNA)

توفر فحوصات miRCURY LNA miRNA PCR أفضل مزيج من الأداء وسهولة الاستخدام في سوق تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (PCR) للـ microRNA، وذلك بفضل دمج النسخ العكسي الشامل مع تضخيم LNA PCR (انظر الشكل: مخطط نظام miRCURY LNA miRNA PCR). يُمكّن النسخ العكسي الشامل من استخدام تفاعل تخليق cDNA أحادي السلسلة كقالب لفحوصات PCR الكمي المتعددة للـ miRNA. هذا يوفر عينات ثمينة، ويقلل من التباين التقني، ويوفر الوقت في المختبر. إضافةً إلى ذلك، فإن كلاً من بادئات تضخيم PCR الأمامية والعكسية مُخصصة للـ miRNA ومُحسّنة بتقنية LNA. وهذا يوفر: 1) حساسية استثنائية وخلفية منخفضة للغاية، مما يُمكّن من التحديد الكمي الدقيق لمستويات الـ miRNA المنخفضة جدًا، و2) فحوصات عالية التخصص تسمح بالتمييز بين تسلسلات الـ miRNA المتقاربة.

التغطية

يتوفر أكثر من 20,000 اختبار تغطي جميع الكائنات الحية في قاعدة بيانات miRBase 20. تم التحقق من صحة أكثر من 1,400 اختبار منها في المختبرات الرطبة بشكل كامل من حيث الحساسية والنوعية والكفاءة والخلفية على كل من العينات الاصطناعية والبيولوجية المختلفة. أما الاختبارات المتبقية، فقد تم التحقق من صحتها حاسوبياً باستخدام خوارزمية تصميم شاملة تضمن اختبارات عالية الجودة ومخصصة لكل نوع، ومعززة بتقنية LNA، مع حساسية ونوعية مثاليتين داخل كل كائن حي. هذا يعني أن العديد من الاختبارات المختلفة قد تستهدف التسلسل نفسه. في النهاية، يتم اختيار الاختبار المناسب لكل نوع بناءً على الخلفية الجينية للكائن الحي. إذا كنت تعمل مع جزيئات miRNA جديدة، مثل تلك الناتجة عن تجربة NGS، فإن مجموعات بادئات LNA miRNA المصممة خصيصاً لأي جزيء miRNA متوفرة أيضاً.

فحوصات الجينات المرجعية للتطبيع

تتوفر تسع مجموعات من بادئات الجينات المرجعية، مما يتيح توحيد البيانات بجودة عالية وإنتاج بيانات موثوقة من أنواع عينات متعددة (انظر الجدول أدناه). تستهدف مجموعات البادئات هذه جزيئات الحمض النووي الريبوزي الصغيرة غير المشفرة الداخلية المنشأ، والتي تُعبر عنها بشكل دائم ومستقر نسبيًا في مختلف أنسجة الإنسان (انظر الشكل: مستويات التعبير عن الجينات المرجعية في مختلف أنسجة الإنسان). تغطي الجينات المرجعية نطاقًا واسعًا من قيم Cq، مما يوفر إمكانية توحيد مستويات التعبير عن الحمض النووي الريبوزي الميكروي بدقة وموثوقية عبر مجموعة من مستويات التعبير.

تم التحقق من صحة مجموعات البادئات الضابطة كجينات مرجعية لنظام تفاعل البوليميراز المتسلسل miRCURY LNA miRNA، وهي تعمل بكفاءة مثالية مع مجموعة miRCURY LNA RT ومجموعة miRCURY LNA SYBR Green PCR. من المهم جدًا التأكد دائمًا من التعبير الجيني الثابت وغير المتغير في جميع الأنسجة وتحت جميع المعالجات في التجربة قبل اختياره كجين مرجعي. نوصي باختبار عدد من الجينات المرجعية واستخدام برامج مثل GeNorm وNormFinder (جزء من برنامج GenEx) لاختيار الجينات المرجعية والتحقق من صحتها.

التطبيقات

- تحديد كمية الحمض النووي الريبوزي الميكروي الناضج
- الكشف عن الحمض النووي الريبوزي النووي الصغير (snoRNA)