شركة كياجين، 339317، اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل المخصص miRCURY LNA miRNA

يحتوي على بادئات أمامية وعكسية لـ 200 تفاعل qPCR في الوقت الحقيقي باستخدام صبغة SYBR® Green، أو 166 تفاعل PCR رقمي باستخدام صبغة EvaGreen للوحة Nanoplate 8.5k، أو 50 تفاعل PCR رقمي باستخدام صبغة EvaGreen للوحة Nanoplate 26k

سمات

- صمم بسهولة اختبارًا مخصصًا لـ miRNA المحدد الذي يهمك
- الكشف عن الإشارات الحقيقية في نطاق كشف منخفض للغاية، يصل إلى نسخة واحدة من الحمض النووي الريبوزي الميكروي (miRNA).
- سير عمل سريع وبسيط يستغرق ساعتين
- تصميم اختبار miRNA لأي miRNA جديد، أو نظير miRNA، أو متغير

تفاصيل المنتج

تُعدّ فحوصات miRCURY LNA miRNA Custom Probe PCR عبارة عن مجموعات بادئات ومجسات PCR مصممة خصيصًا لـ miRNA، تُمكّن من قياس كمية miRNA بدقة وحساسية عاليتين باستخدام نظام miRCURY LNA miRNA Probe PCR. يتميز كل من بادئ تضخيم PCR الأمامي والمجس المُوسوم بـ FAM ومُثبِّط الإضاءة الداكنة بتخصصهما لـ miRNA، وقد تم تحسينهما بتقنية LNA لتعزيز أداء الفحص. يُمكن إنشاء الفحوصات بسهولة عبر الإنترنت باستخدام نفس الخوارزمية القوية والمُحسَّنة المُستخدمة في فحوصاتنا المُصممة مسبقًا. وبالتالي، يُمكن دمج الفحوصات المُصممة مسبقًا مع الفحوصات المُخصصة، وهي مضمونة النتائج.

هل تحتاج إلى عرض سعر لمشروعك البحثي أو ترغب في مناقشة مشروعك مع فريقنا المتخصص؟ تواصل معنا الآن!

أداء

كشف عالي الحساسية للإشارات الحقيقية

تُحقق حساسية فحوصات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) باستخدام مجسات miRCURY LNA miRNA Custom Probe حساسيةً استثنائيةً بفضل الجمع بين النسخ العكسي الشامل وبادئات ومجسات مُحسَّنة بتقنية LNA، ومُعايرة بدرجة حرارة الانصهار (Tm)، ومُخصصة لـ miRNA. يُمكّن هذا المزيج من تحديد كمية miRNAs الفردية بدقة وموثوقية من كمية ضئيلة تصل إلى 1 بيكوغرام من الحمض النووي الريبي الكلي، أو حتى جزيء واحد دون الحاجة إلى تضخيم مسبق (انظر: تحديد كمية دقيق حتى مع كمية قليلة من المادة الأولية، وكفاءة استثنائية عبر نطاق ديناميكي واسع). تجعل الحساسية العالية وسرعة سير العمل النظامَ مناسبًا بشكل خاص لعينات المصل أو البلازما، وتضمن إنزيمات QuantiNova نتائج قابلة للتكرار بدرجة عالية بين النسخ التقنية والبيولوجية من المحاولة الأولى، مما يوفر كمية العينة والوقت.

بالمقارنة مع أنظمة تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) الأخرى القائمة على مجسات miRNA والتي تعتمد على المجس فقط لتحديد الخصوصية، فإن البادئ والمجس المُحسَّن بتقنية LNA في فحوصات miRCURY LNA miRNA Custom Probe Assays يتميزان بخصوصية عالية تجاه miRNA وقصر طولهما بما يكفي لمنع التداخل عند الارتباط بالهدف (انظر نظرة عامة على نظام miRCURY LNA miRNA Probe PCR System)، مما يُحسِّن حساسية الفحص وخصوصيته وكفاءته. وبفضل نسبة الإشارة إلى الضوضاء الممتازة (انظر الكشف الدقيق حتى مع وجود خلفية عالية من الحمض النووي الريبي)، تُمكِّن هذه الميزة الفريدة من التمييز بين جزيئات miRNA المتقاربة ذات الاختلافات في التسلسل التي لا تتجاوز نيوكليوتيدًا واحدًا (انظر القدرة التمييزية حتى اختلاف نيوكليوتيد واحد).

تم التحقق من صحته وتحسينه

تعتمد تصميمات المقايسات (البادئات والمجسات) للكشف عن جزيئات miRNA الجديدة على خوارزمية تصميم طورها خبراء في تقنية LNA والمقايسات. تُقيّم هذه الخوارزمية الشاملة وتُحسّن 60 مُعاملًا، يتم التحقق من صحتها حاسوبيًا وفقًا لمعايير أداء صارمة للغاية، لضمان تصميم يوفر أعلى حساسية ونوعية. والنتيجة هي مقايسات قادرة على الكشف عن نسخة واحدة من جزيء miRNA.

سريع وسهل

يوفر هذا البروتوكول سهل الاتباع، والذي يستغرق ساعتين فقط، الوقت والجهد. وباستخدام تقنية النسخ الشاملة وبروتوكولات تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR) المُحسّنة، تُصبح العملية أبسط بكثير مقارنةً بالحلول الأخرى. علاوة على ذلك، يُمكن استخدام الحمض النووي التكميلي (cDNA) المُنتج في خطوة النسخ العكسي (RT) في نظام miRCURY LNA miRNA Probe PCR، مما يُتيح لك الانتقال بسلاسة من اللوحات إلى المقايسات حسب احتياجات بحثك، مع توفير كمية العينة والوقت. كما تم تقليل عدد خطوات المعايرة إلى الحد الأدنى، مما يُقلل أيضًا من التباين التقني. وتتيح متانة المقايسة إمكانية الإعداد في درجة حرارة الغرفة وإجراء عمليات تشغيل مؤجلة لمزيد من المرونة والاستخدام في الأتمتة. إن سير العمل المُبسط هذا، بالإضافة إلى تصنيع المقايسة وفقًا لمعايير ISO، يُتيح تحقيق مستوى عالٍ للغاية من التكرارية يوميًا وبين المواقع.

مبدأ

- تحسين درجات حرارة الانصهار عن طريق تغيير توزيع LNA للبادئات والمسبار لضمان كفاءة عالية في التضخيم وخصوصية عالية.
- حسابات وتعديلات درجات التهجين الذاتي والتهجين المتبادل لتفاعلات PCR الفعالة.
- تعديلات لتجنب تكوين ثنائي البادئ المحتمل في تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR).
- تحديد المواقع الذكية لقواعد LNA في البادئات والمسبار بناءً على معرفتنا الواسعة بتصميم قليل النوكليوتيدات LNA.
- تستخدم قاعدة بيانات miRBase عمليات بحث لتحديد جزيئات miRNA المحتملة ذات التشابه التسلسلي العالي ضمن النوع نفسه. وهذا يضمن أن تكون مجموعات البادئات والمجسات عالية التخصص لجزيء RNA الصغير الذي صُممت من أجله.

عملية التصميم

تتيح لك أداة تصميم اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) باستخدام مسبار LNA المخصص لـ miRNA تصميم مجموعات بادئات ومسبارات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) عالية الحساسية والنوعية لأي miRNA غير متوفر في اختبار مُصمم مسبقًا. تُقيّم الخوارزمية المتقدمة ما يقارب 3000 تصميم لزوج من البادئات والمسبارات بناءً على أكثر من 60 معيارًا مختلفًا للعثور على البادئات والمسبارات المثلى لـ LNA لـ miRNA الخاص بك في غضون دقائق معدودة. صُممت الأداة خصيصًا لـ miRNAs، ولكن يمكن استخدامها أيضًا لأنواع أخرى من الحمض النووي الريبوزي الصغير (RNA) التي يتراوح طولها بين 14 و27 نيوكليوتيدًا.

تشمل معايير التصميم ما يلي:

نظام فريد لتحديد كمية الحمض النووي الريبوزي الميكروي (miRNA)

يُمكّن نظام miRCURY LNA miRNA Probe PCR من تحديد كمية miRNA وتصنيفها بدقة عالية وحساسية فائقة عبر تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR). يعتمد الكشف على مسبار تحلل مُوسَم بصبغة FAM ومُثبِّط إضاءة. يغطي النظام جميع خطوات تحويل miRNA إلى cDNA والكشف اللاحق عن miRNAs باستخدام qPCR. تم التحقق من صحة فحوصات miRCURY LNA miRNA Custom Probe PCR باستخدام مزيج QuantiNova Probe Master Mix؛ لذا فإن استخدام كواشف أخرى لـ qPCR سيؤثر على النتائج.

مجموعة RNA Spike-In Kit للنسخ العكسي

تتيح مجموعة RNA Spike-In Kit مراقبة جودة عزل الحمض النووي الريبوزي (RNA)، وتخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA)، وخطوات تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) لتجارب miRCURY LNA miRNA Probe PCR، مما يسمح بتحديد أي عينات رديئة الجودة في وقت مبكر من العملية وتوفير الوقت والمواد الكيميائية. تتضمن المجموعة مزيج قوالب RNA Spike-in من UniSp2 وUniSp4 وUniSp5، بالإضافة إلى قالب RNA Spike-in الخاص بـ cel-miR-39-3p.

مجموعة miRCURY LNA RT

مجموعة واحدة شاملة للنسخ العكسي لنظامي كشف. تُستخدم مجموعة miRCURY LNA RT مع كلٍ من نظام miRCURY LNA miRNA PCR الذي يستخدم صبغة SYBR Green للكشف، ونظام miRCURY LNA miRNA Probe PCR القائم على المجسات. تتضمن المجموعة محلولين منظمين للتفاعل خاصين بكل نظام، بالإضافة إلى جميع الكواشف اللازمة لإجراء عملية إضافة ذيل عديد الأدينين إلى الحمض النووي الريبوزي الميكروي (miRNA) والنسخ العكسي بسرعة وسهولة في خطوة تفاعل واحدة.

مجموعة أدوات تفاعل البوليميراز المتسلسل miRCURY Probe

صُممت هذه المجموعة خصيصًا لنظام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) الخاص بمسبار miRCURY LNA miRNA، وتحتوي على مزيج QuantiNova Probe Master Mix عالي الأداء، بالإضافة إلى البادئ العكسي الشامل لمسبار miRCURY. وباستخدامها مع اختبار مسبار miRCURY LNA miRNA أو لوحة تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) الخاصة بمسبار miRCURY LNA miRNA، تُمكّن هذه التقنية من الكشف عن الحمض النووي الريبوزي الميكروي (miRNA) عبر تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (qPCR).

فحوصات مجسات miRNA LNA miRCURY

تستخدم هذه المقايسات الأولية والمسبارية مجسات التحلل المائي الخاصة بـ miRNA وبادئات أمامية خاصة بـ miRNA مصممة للكشف عن miRNAs الناضجة باستخدام أحدث معلومات التسلسل من miRBase 22. يتم تضمين البادئ العكسي العالمي miRCURY Probe في مجموعة miRCURY Probe PCR.

لوحات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) لمجسات الحمض النووي الريبوزي الميكروي (miRNA) من نوع miRCURY LNA

لوحات PCR جاهزة للاستخدام ومصممة مسبقًا للاستخدام الفردي لتحديد خصائص miRNAs الناضجة بسرعة مع التركيز على miRNome أو مسارات محددة أو أنواع معينة من العينات مثل المصل/البلازما أو في لوحة مخصصة مصممة من قبل المستخدم.

مركز تحليل البيانات في جين جلوب

تقوم أداة التحليل المجانية هذه، والمتاحة عبر الإنترنت، بإرشادك خطوة بخطوة من خلال معالج سهل الاستخدام خلال عملية توحيد وتحليل بياناتك، كما أنها تُنشئ أشكالًا جاهزة للنشر.

إجراء

الخطوة الأولى، وهي تفاعل النسخ العكسي، سهلة التنفيذ وتُجرى في أنبوب واحد. يُستخدم الحمض النووي الريبوزي الكلي، بما في ذلك الحمض النووي الريبوزي الميكروي (miRNA)، كمادة أولية، ويُستخدم الحمض النووي التكميلي الناتج (cDNA) في تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR) باستخدام بادئات مُحسَّنة بتقنية LNA ومسبار تحلل مائي للكشف عن الحمض النووي الريبوزي الميكروي الناضج. يُمكّن هذا من تحديد كمية الحمض النووي الريبوزي الميكروي وتصنيفه بسهولة، وهو متاح لأي مختبر مزود بجهاز تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي.

التطبيقات

- الكشف عن التعبير الجيني لـ miRNA، وتحديد خصائصه، وقياس كميته
- تطوير المؤشرات الحيوية للـ miRNA - الفحص والتحديد
- تنظيم الحمض النووي الريبوزي الميكروي وتحليل المسارات
- الكشف عن الحمض النووي الريبوزي الميكروي في أنواع العينات المعقدة والعينات ذات مستويات التعبير المنخفضة عن الحمض النووي الريبوزي الميكروي (مثل الإكسوسومات، والمصل، والبلازما، والبول، وشرائح الأنسجة المثبتة بالفورمالين والمضمنة في البارافين).
- الكشف عن الحمض النووي الريبوزي النووي الصغير (snoRNA)
- التحقق من صحة تسلسل الحمض النووي الريبوزي الميكروي

تُستخدم فحوصات miRCURY LNA miRNA Custom Probe Assays كجزء من نظام miRCURY LNA miRNA Probe PCR System من أجل: