شركة كياجين، 387016، مجموعة كوانتيبليكس للمحققين (200)

مزيج البادئات FQ، مزيج التفاعل YQ، الحمض النووي المرجعي M1، محلول تخفيف الحمض النووي

التحديد الكمي المتزامن للحمض النووي البشري الكلي أو الحمض النووي البشري والذكري
تقييم جودة مباشر للحصول على معلومات موثوقة حول تدهور الحمض النووي المرتبط بملفات تعريف STR الخاصة بك
نتائج موثوقة بحساسية تصل إلى أقل من 1 بيكوغرام/ميكرولتر من الحمض النووي
حساسية عالية للحمض النووي الذكري في خلفية أنثوية
نظام تحكم داخلي متكامل لاختبار تضخيم أو تثبيط تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)

مجموعات Investigator Quantiplex هي عبارة عن فحوصات تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي الجاهزة للاستخدام لاختبار هوية الإنسان والتطبيقات الجنائية مع مدخلات عينة تقليدية بحجم 2 ميكرولتر أو مرنة تتراوح من 1 إلى 18 ميكرولتر (
مجموعة كوانتيبلكس برو إف إل إكس للمحقق
صُممت هذه التقنية لتوفير حساسية فائقة وسرعة تفاعل عالية، وهي تُستخدم لتحديد ما إذا كانت العينة تحتوي على كمية كافية وسليمة من الحمض النووي البشري لإجراء تحليل STR أو SNP باستخدام تقنية الفصل الكهربائي الشعيري أو تقنية التسلسل من الجيل التالي (NGS). ويُستخدم عنصر تحكم داخلي للتضخيم (IC) لاختبار نجاح عملية التضخيم وتحديد وجود مثبطات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). كما تُتيح تقنية Investigator Quantiplex Pro تقييم الجودة لتوفير معلومات موثوقة حول حالة تحلل العينة.
تتوافق مجموعات Investigator Quantiplex مع متطلبات ISO 18385.

توفر مجموعات Investigator Quantiplex Pro نتائج قياس كمي دقيقة وموثوقة مع حساسية عالية ضمن نطاق ديناميكي واسع. بالإضافة إلى الحساسية العامة، تتميز هذه المجموعات بحساسية استثنائية للحمض النووي الذكري، حتى في وجود نسبة عالية جدًا من الحمض النووي الأنثوي (تصل إلى 400,000:1).
يتضمن نظام تقييم الجودة البسيط المرفق بالمجموعات عنصر تحكم جديد في تدهور الحمض النووي (DC) وعنصر تحكم داخلي جديد (IC). يوفر عنصر التحكم الجديد في تدهور الحمض النووي كشفًا فائقًا لتدهور الحمض النووي (انظر الأشكال "
الكشف الدقيق عن تدهور الحمض النووي
" و "
الكشف الدقيق عن تحلل الحمض النووي الذكري في خليط العينة
علاوة على ذلك، يُعد اختبار Investigator Quantiplex Pro RGQ الاختبار التجاري الوحيد المتاح القادر على التمييز بين تحلل الحمض النووي البشري والذكري (انظر الشكل "
نتائج كشف دقيقة وحساسة للغاية للحمض النووي الذكري والحمض النووي البشري الكلي
"). يكشف عنصر التحكم الداخلي المصمم حديثًا عن مثبطات تفاعل البوليميراز المتسلسل المحتملة بشكل موثوق. يتميز عنصر التحكم الداخلي بحساسية أكبر للمثبطات ويرتبط بتحمل تكرارات التتابع القصيرة المترادفة، بينما تظل نتائج القياس الكمي موثوقة (انظر الشكل "
تحديد تثبيط تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)
"). علاوة على ذلك، فإن IC الخاص بمجموعات Investigator Quantiplex Pro مماثل لمستشعر الجودة الخاص بفحوصات Investigator STR QS PCR (على سبيل المثال، مجموعات Investigator 24plex QS، ومجموعات Investigator 26plex QS، ومجموعة Investigator ESSplex SE QS، ومجموعة Investigator Argus X-12 QS).

يجب تقييم الحمض النووي البشري المعزول من مصادر مختلفة من حيث الكمية والجودة والسلامة قبل إجراء تحليلات STR. تُعدّ تحليلات STR المتعددة أنظمة معقدة تتطلب نطاقًا دقيقًا من الحمض النووي المدخل وجودة القالب لضمان دقة النتائج. ولأنّ تحديد كمية الحمض النووي هو الخطوة الوحيدة التي تسبق تفاعل STR PCR، فمن الضروري استخلاص أكبر قدر ممكن من المعلومات من هذا التفاعل للمساعدة في إعداد تفاعلات STR بشكل صحيح.
تُعدّ مجموعات Investigator Quantiplex Pro نظامًا جاهزًا للاستخدام للكشف عن الحمض النووي البشري والذكري، وتقييم تدهور الحمض النووي بالتوازي باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي. توفر هذه المجموعات قياسًا سريعًا ودقيقًا للحمض النووي البشري من قواعد بيانات الطب الشرعي وعينات القضايا.
يتم الكشف عن التضخيم باستخدام مجسات TaqMan وتقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل السريع (PCR). تحتوي المجسات ثنائية التسمية على مُخبِر فلوري ومُثبِّط فلوري عند طرفيها 5' و3' على التوالي. خلال مرحلة التمديد في تفاعل البوليميراز المتسلسل، يقوم نشاط الإكسونوكلياز 5' و3' لإنزيم بوليميراز الحمض النووي بفصل المُخبِر الفلوري عن المُثبِّط. ينتج عن ذلك فلورة قابلة للكشف تتناسب مع كمية ناتج تفاعل البوليميراز المتسلسل المتراكم. تُلخَّص معلومات حول الأهداف، وأطوال المُضخَّمات، والقنوات، ومستوى الصبغيات، وعدد النسخ في الجدول "الأهداف، وأطوال المُضخَّمات، والقنوات لمجموعات Investigator Quantiplex".
الأهداف، وأطوال الأمبليكون، والقنوات الخاصة بمجموعات Investigator Quantiplex
عدة
هدف
طول الأمبليكون
قناة
التعدد الصبغي
رقم النسخة
كوانتيبلكس
هدف بشري
146 نقطة أساس
عائلة
ثنائي الصبغيات
نسخ متعددة
عنصر تحكم داخلي لتفاعل البوليميراز المتسلسل
200 نقطة أساس
فيكتوريا
غير متوفر
جزء اصطناعي
كوانتيبلكس برو
كوانتيبلكس برو إف إل إكس
هدف بشري، سيارات صغيرة.
91 نقطة أساسية
عائلة
ثنائي الصبغيات
نسخ متعددة
هدف بشري، سيارات كبيرة.
353 نقطة أساس
تامرا/أتو550
ثنائي الصبغيات
نسخ متعددة
هدف بشري ذكر
81 نقطة أساسية
CY5/Atto647N
أحادي الصيغة الصبغية
نسخ متعددة
عنصر تحكم داخلي لتفاعل البوليميراز المتسلسل
434 نقطة أساسية
جو
غير متوفر
جزء اصطناعي
كوانتيبلكس برو آر جي كيو
هدف بشري، سيارات صغيرة.
91 نقطة أساسية
أصفر
ثنائي الصبغيات
نسخ متعددة
هدف بشري، سيارات كبيرة.
353 نقطة أساس
أحمر
ثنائي الصبغيات
نسخ متعددة
ذكر بشري، حرف Y صغير
81 نقطة أساسية
أخضر
أحادي الصيغة الصبغية
نسخ متعددة
ذكر بشري، حرف Y كبير
359 نقطة أساسية
البرتقالي
أحادي الصيغة الصبغية
نسخ متعددة
عنصر تحكم داخلي لتفاعل البوليميراز المتسلسل
434 نقطة أساسية
قرمزي
غير متوفر
جزء اصطناعي
غير قابل للتطبيق = NA

تُعدّ هذه المجموعات نظامًا جاهزًا للاستخدام للكشف عن الحمض النووي البشري وتحديد كميته باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي (PCR). راجع جدول "المواصفات الفنية" لمزيد من المعلومات. ولتبسيط عملية إعداد الجهاز وتحليل النتائج، طوّرت شركة QIAGEN مجموعة من ملفات القوالب. حمّل ملفات القوالب من صفحة موارد المنتج.
عند استخدام أنظمة تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي Applied Biosystems 7500 أو QuantStudio 5 مع مجموعة Investigator Quantiplex Pro، يلزم إجراء معايرة مخصصة للأصباغ FAM وJOE وATTO 550 وROX وATTO 647N. ولتحقيق الأداء الأمثل، يُنصح بالمعايرة باستخدام مجموعة Investigator Quantiplex Pro Calibration Kit.

تُستخدم مجموعات Investigator Quantiplex لتحديد كمية الحمض النووي البشري والذكري، ولتحديد ما إذا كانت هناك مثبطات لتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) أو تدهور في الحمض النووي، وما إذا كانت هناك حاجة إلى مزيد من تنقية العينة. وهي مناسبة لما يلي:
نماذج من قواعد البيانات الجنائية وقضايا التحقيق
عينات اختبار الأبوة
عينات من الاعتداء الجنسي
تحديد هوية ضحايا الكوارث والعمل الأنثروبولوجي
تطبيقات أخرى لاختبار هوية الإنسان

المواصفات الفنية
جميع الأهداف هي أهداف متعددة النسخ.
سمات
مجموعة كوانتيبلكس برو للمحقق
المحقق كوانتيبلكس برو إف إل إكس
مجموعة كوانتيبلكس برو آر جي كيو للمحقق
مجموعة كوانتيبلكس للمحقق
الحجم لكل تفاعل PCR
20 ميكرولتر
20 ميكرولتر
20 ميكرولتر
25 ميكرولتر
حجم إدخال الحمض النووي القالب
2 ميكرولتر
1-18 ميكرولتر
2 ميكرولتر
2 ميكرولتر
هدف بشري، صغير جسمي
91 نقطة أساسية
91 نقطة أساسية
91 نقطة أساسية
146 نقطة أساس
هدف بشري، جسمي كبير
353 نقطة أساس
353 نقطة أساس
353 نقطة أساس
-
هدف ذكر بشري، حرف Y صغير
81 نقطة أساسية
81 نقطة أساسية
81 نقطة أساسية
-
هدف ذكر بشري، حرف Y كبير
-
-
359 نقطة أساسية
-
المجسات
تاكمان
تاكمان
تاكمان
العقارب
راكبو الدراجات في الوقت الفعلي
أنظمة Applied Biosystems 7500 للتحليل في الوقت الحقيقي أو أنظمة QuantStudio 5 للتحليل في الوقت الحقيقي
نظام Applied Biosystems 7500 Real-Time أو أنظمة QuantStudio5
Rotor-Gene Q، خماسي أو سداسي فقط
Rotor-Gene Q، 5plex أو 6plex، أنظمة Applied Biosystems 7500 للتحليل الفوري

تم تقطيع الحمض النووي الجينومي الذكري باستخدام جهاز Covaris S220 Focused-ultrasonicator للحصول على أحجام شظايا متوسطة تبلغ 1500 زوج قاعدي، و500 زوج قاعدي، و400 زوج قاعدي، و300 زوج قاعدي، و200 زوج قاعدي، و150 زوج قاعدي.
أ
تم اختبار كل حجم من أحجام الشظايا (4.6 نانوغرام) باستخدام مجموعة Investigator Quantiplex Pro RGQ. ويُبين الشكل [ أداء مجموعتين تجاريتين أخريين متوفرتين في ظل نفس ظروف الاختبار.
ب
] و [
ج
تم إعداد جميع التفاعلات وتشغيلها وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة. لوحظ ارتفاع في قيمة العتبة (CT) لجزء L البشري من QIAGEN مقارنةً بمجموعات من موردين آخرين، مما يشير إلى تقييم أكثر دقة لجودة الحمض النووي في العينة. (البيانات من إنتاج قسم البحث والتطوير في QIAGEN).

تستغرق عملية تشغيل جهاز Investigator Quantiplex Pro أو Quantiplex Pro RGQ المكونة من 40 دورة حوالي 60 دقيقة.
بالنسبة لتقنية Investigator Quantiplex على جهاز Rotor-Gene Q، تستغرق دورة مكونة من 40 دورة حوالي 55 دقيقة. أما على نظام Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR، فتستغرق دورة مكونة من 40 دورة حوالي 57 دقيقة.