Qiagen، 396052، AdnaTest LungCancerDetect

لعزل 12 mRNA من الخلايا السرطانية المنتشرة، والنسخ العكسي والكشف اللاحق عن التعبير الجيني المرتبط بسرطان الرئة بالتحول الظهاري-الميزانشيمي (EMT) باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل النهائي.

سمات

- عزل وكشف فعال للخلايا السرطانية المنتشرة من الدم الكامل
- التوصيف الجزيئي للخلايا السرطانية المنتشرة
- دقة وحساسية عاليتان
- قلل من تحيز الكريات البيضاء باستخدام مُخفِّض الكريات البيضاء من أدناواش

أداء

ALDH1: GA733-2
عينات المتبرعين الأصحاء غير المضاف إليها مواد محظورة: 0/20
الخصوصية: 100%
عينات متبرعين أصحاء مدعمة: 20/20
نسبة التعافي: 100%

يُعدّ اختبار AdnaTest LungCancer نظامًا عالي التخصص لاختيار الخلايا المناعية المغناطيسية، يُستخدم لإثراء الخلايا السرطانية المنتشرة في الدم المحيطي، ويتضمن تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR) عالي الحساسية للكشف عن مؤشرات mRNA المرتبطة بسرطان الرئة. تبلغ خصوصية الكشف في اختبار AdnaTest LungCancer 95%. وباستخدام مؤشرات الأورام الخاصة بسرطان الرئة في تجارب الإضافة، تم الكشف عن 30 خلية سرطانية في 5 مل من الدم بمعدل استرداد 100% (الجدول أدناه: خصوصية واسترداد اختبار AdnaTest LungCancer).

في حوالي 80% من جميع الخلايا السرطانية المنتشرة (CTCs) المأخوذة من عينات سرطان الرئة، يمكن ملاحظة التحول الظهاري-الميزانشيمي (EMT) واستقلاب الخلايا الجذعية السرطانية. وقد أظهرت الخلايا السرطانية المنتشرة التي تم تحليلها نتائج إيجابية لواحد على الأقل من مؤشرات التحول الظهاري-الميزانشيمي: Twist1 وAkt2 وPI3KCA. يوفر اختبار AdnaTest LungCancer - بالإضافة إلى الأجسام المضادة لـ EpCam - أجسامًا مضادة لـ Her2 وEGFR، مما يؤدي إلى زيادة كبيرة في الأداء (انظر "زيادة الحساسية في سرطان الرئة"). ولتغطية مؤشرات الورم المذكورة، يحتوي اختبار AdnaTest LungCancer على مزيج من البادئات للكشف عن كل من التحول الظهاري-الميزانشيمي ومؤشرات سرطان الرئة. وقد بلغت نسبة النتائج الإيجابية لأنظمة الكشف التي تعتمد فقط على EpCam كهدف للالتقاط 15% فقط، بينما يستخدم اختبار AdnaTest CTC-Select مزيجًا من الأجسام المضادة لـ EpCam وHer2 وEGFR. ويتيح تحليل التعبير عن EpCam التمييز بين الخلايا الشبيهة بالخلايا الظهارية، والخلايا الشبيهة بالتحول الظهاري-الميزانشيمي، والخلايا ذات خصائص الخلايا الجذعية السرطانية.

يُعد تقليل عدد الكريات البيضاء أمراً بالغ الأهمية لتقليل تحيز الكريات البيضاء.

يتطلب الكشف عن مؤشرات الخلايا الجذعية السرطانية، مثل ALDH1، أو مؤشرات التحول الظهاري-الميزانشيمي، مثل Twist1 وAkt2 وPI3KCα، نقاءً أعلى بكثير للتخلص من التحيز الناتج عن تلوث الخلايا البيضاء. يُعدّ AdnaWash Leukocyte Reducer محلولًا منظمًا خاصًا مصممًا لتقليل محتوى الخلايا البيضاء أثناء إثراء الخلايا السرطانية المنتشرة. يُظهر استخدام اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) لنقطة نهاية CD45 بوضوح انخفاضًا كبيرًا في عدد الخلايا البيضاء عند استخدام AdnaWash في عملية التقاط الخلايا بدلًا من محلول الفوسفات الملحي (PBS) (انظر "تقليل عدد الخلايا البيضاء باستخدام AdnaWash").

إجراء

الجين المستهدف: حجم القطعة
PI3Kα: 551 زوج قاعدي
Akt-2: 309 bp
TWIST1: 201 bp
أكتين: 120 زوج قاعدي (عنصر تحكم داخلي في تفاعل البوليميراز المتسلسل)

الجين المستهدف: حجم قطعة تفاعل البوليميراز المتسلسل
EpCam (GA733-2): 395 bp
ALDH1: 161 زوج قاعدي

يستخدم اختبار AdnaTest عملية من خطوتين (الاختيار والكشف) للحصول على النتائج في غضون 5 ساعات (انظر "AdnaTest CTC-Select: اختيار الخلايا المناعي المغناطيسي باستخدام أجسام مضادة متعددة مرتبطة بالأورام" و"AdnaTest LungCancerDetect لتحليل مختلف مؤشرات الأورام المرتبطة بالسرطان"). يُمكّن اختبار AdnaTest CTC-Select من الإثراء المناعي المغناطيسي للخلايا السرطانية من الدم الكامل عبر مستضدات مرتبطة بالخلايا الظهارية والورمية. تُربط الأجسام المضادة ضد المستضدات المرتبطة بالخلايا الظهارية والورمية بخرزات مغناطيسية لوسم الخلايا السرطانية. تُستخلص الخلايا الموسومة بواسطة مُركِّز الجسيمات المغناطيسية (AdnaMag-L وAdnaMag-S)، ثم تُحلَّل لاحقًا (انظر "AdnaTest Select: اختيار الخلايا المناعي المغناطيسي باستخدام أجسام مضادة متعددة مرتبطة بالأورام موسومة بخرزات مغناطيسية"). يُستخدم مستخلص الخلية بعد ذلك في اختبار AdnaTest LungCancerDetect، الخطوة الثانية من الإجراء، لعزل الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA). يحتوي اختبار AdnaTest LungCancerDetect على خرزات مغلفة بـ Oligo (dT) 25 لعزل mRNA من مستخلص خلايا الورم المُخصبة مسبقًا. ينتج عن النسخ العكسي الحمض النووي التكميلي (cDNA) الذي يمكن استخدامه لاحقًا كقالب للكشف عن خلايا الورم وتوصيفها بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد (انظر "اختبار AdnaTest LungCancerDetect لتحليل مختلف مؤشرات الأورام المرتبطة بالسرطان"). يوفر تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد بيانات التعبير الجيني المرتبطة بالورم لمجموعة متنوعة من مؤشرات الأورام ذات الصلة لضمان أن الخلايا المختارة هي خلايا سرطانية (انظر "نتائج اختبار AdnaTest LungCancerDetect للعينات باستخدام جهاز Agilent 2100 Bioanalyzer"). تحتوي المجموعة على مزيج بادئات واحد لتضخيم أجزاء الحمض النووي المكمل (cDNA) المستهدفة لجينات Twist وPI3Kα وAkt2، بالإضافة إلى جين مرجعي (الأكتين) كعنصر تحكم (انظر "خصوصية واستعادة اختبار AdnaTest LungCancer"). يُضخّم مزيج البادئات LungDetect جيني ALDH1 وEpCam (GA733-2) (المذكورين أدناه). تُنتج البادئات أجزاءً بالأحجام التالية:

والأهم من ذلك، أن AdnaTest عبارة عن منصة مفتوحة تسمح بتحديد خصائص أهداف mRNA المخصصة الإضافية لاكتشاف المؤشرات الحيوية الشاملة.

التطبيقات

- عزل الخلايا السرطانية المنتشرة من دم الإنسان الكامل
- التوصيف الجزيئي للخلايا السرطانية المنتشرة
- اكتشاف المؤشرات الحيوية
- تحليل الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA)
- الخزعة السائلة
- أبحاث السرطان