شركة كياجين، 396232، ملحق EMT-2 للكشف عن سرطان البروستاتا

مزيج البادئات لـ 12 تفاعل PCR

سمات

- عزل وكشف فعال للخلايا السرطانية المنتشرة من الدم الكامل
- التوصيف الجزيئي للخلايا السرطانية المنتشرة
- دقة وحساسية عاليتان
- التقاط الخلايا الظهارية المتوسطة والخلايا الشبيهة بالخلايا الجذعية

إجراء

الجين المستهدف: حجم قطعة تفاعل البوليميراز المتسلسل (bp)
PI3Kα: 551
AKT-2: 309
TWIST1: 201
الأكتين (عنصر تحكم داخلي في تفاعل البوليميراز المتسلسل): 120

الجين المستهدف: حجم قطعة تفاعل البوليميراز المتسلسل (bp)
ALDH1: 161

الجين المستهدف: حجم قطعة تفاعل البوليميراز المتسلسل (bp)
GA733-2: 395
CEA: 231
EGFR: 163
الأكتين (عنصر تحكم داخلي في تفاعل البوليميراز المتسلسل): 120

الجين المستهدف: حجم قطعة تفاعل البوليميراز المتسلسل (bp)
GA733-2: 395
Muc-1: 299
Her-2: 265
الأكتين (عنصر تحكم داخلي في تفاعل البوليميراز المتسلسل): 120

الجين المستهدف: حجم قطعة تفاعل البوليميراز المتسلسل (bp)
PSMA: 449
PSA: 357
EGFR: 163
الأكتين (عنصر تحكم داخلي في تفاعل البوليميراز المتسلسل): 120

يستخدم اختبار AdnaTest عملية من خطوتين (الاختيار والكشف) للحصول على النتائج في غضون 5 ساعات (انظر الشكل "سير عمل AdnaTest"). يُمكّن اختبار AdnaTest EMT-2/StemCellSelect من الإثراء المناعي المغناطيسي للخلايا السرطانية من الدم الكامل عبر مستضدات مرتبطة بالخلايا الظهارية والورمية. تُربط الأجسام المضادة ضد هذه المستضدات بخرزات مغناطيسية لوسم الخلايا السرطانية. تُستخلص الخلايا الموسومة بواسطة مُركِّز الجسيمات المغناطيسية (AdnaMag-L وAdnaMag-S)، ثم تُحلَّل، ويُنقى الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) من هذه المُستخلصات (انظر الشكل "AdnaTest Select - اختيار الخلايا المناعي المغناطيسي باستخدام أجسام مضادة متعددة مرتبطة بالورم مُوسَّمة بخرزات مغناطيسية"). في الخطوة الثانية، يُنسخ الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) المعزول إلى حمض نووي تكميلي (cDNA)، ويمكن تضخيمه باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد (انظر الشكل "AdnaTest Detect - تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد لعلامات الأورام المختلفة المرتبطة بالسرطان"). يحتوي اختبار AdnaTest EMT-2/StemCellDetect على خرزات مغلفة بـ Oligo (dT) 25 لعزل الحمض النووي الريبوزي الرسول من مستخلص خلايا الورم المُخصبة مسبقًا. ينتج عن النسخ العكسي حمض نووي تكميلي يمكن استخدامه لاحقًا كقالب للكشف عن خلايا الورم وتوصيفها بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد. يوفر تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد بيانات التعبير الجيني المرتبطة بالورم لمجموعة متنوعة من علامات أورام التحول الظهاري-الميزانشيمي (EMT).

الأهداف

تُعدّ عوامل النسخ الأساسية ذات بنية اللولب-الحلقة-اللولب (bHLH) من العوامل المؤثرة في تحديد سلالة الخلايا وتمايزها. البروتين المُشفّر بواسطة هذا الجين هو عامل نسخ bHLH، ويُظهر تشابهًا مع عامل نسخ bHLH آخر يُدعى Dermo1. يُعبّر عنه بكثرة في أنسجة المشيمة والأنسجة المُشتقة من الأديم المتوسط ​​لدى البالغين. يرتبط Twist بعناصر E-box في مُحفّز Akt2، مما يُعزز نشاطه النسخي. من المُرجّح أن يكون عامل النسخ هذا مُرتبطًا بظاهرة التحوّل الظهاري-الميزانشيمي (EMT) في الخلايا السرطانية. يُنشّط Pi3K كيناز سيرين/ثريونين Akt1 وAkt2. يُعدّ Akt المُنشّط مسؤولًا عن التكاثر وله وظيفة مُضادة للاستماتة (تثبيط نشاط كاسبيز 9). هناك العديد من الاحتمالات التي قد تُؤدي إلى اختلال تنظيم مسار إشارات Pi3K/Akt (mTOR) في السرطان. أحد الاحتمالات هو فقدان نشاط PTEN، وهو مُنظِّم لـ Pi3K، مما يؤدي إلى تنشيط دائم للمسار. وبما أن مسار Pi3K/Akt يُنشَّط أيضًا عبر كينازات التيروسين، فقد يتأثر في حالة فرط التعبير عن EGFR/طفرة فرط التعبير عن HER2. مُنشِّط آخر هو مستقبل IGF، الذي وُصِفَ في سرطان الثدي بأنه قد يُختصر اعتماد التكاثر على مستقبلات الإستروجين في حال فرط التعبير عنه. ALDH1: باستخدام أنظمة تجريبية في المختبر وفي الجسم الحي، أظهرت دراسة (Ginestier et al 2007) أن خلايا الظهارة الثديية البشرية الطبيعية والسرطانية ذات النشاط المتزايد لإنزيم نازع هيدروجين الألدهيد 1 (ALDH1) تمتلك خصائص الخلايا الجذعية/الخلايا السلفية. يرتبط فرط التعبير عن ALDH1 في أنسجة أورام الثدي الأولية ارتباطًا وثيقًا بتشخيص سيئ. في سرطانات الثدي، يؤدي ارتفاع نشاط ALDH1 إلى زيادة التجديد الذاتي وظهور أورام تُحاكي عدم تجانس الورم الأصلي. يحتوي اختبار AdnaTest EMT-2/StemCellDetect على خرزات مغلفة بـ Oligo (dT)25 لعزل الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) من مستخلص خلايا الورم المُخصبة مسبقًا. ينتج عن النسخ العكسي الحمض النووي التكميلي (cDNA)، والذي يُستخدم لاحقًا كقالب للكشف عن خلايا الورم وتوصيفها بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد (multiplex PCR). يسمح مزيج البادئات EMT-1 بتضخيم ثلاثة جينات مرتبطة بالتحول الظهاري-الميزانشيمي (EMT) وجين تحكم واحد. يُضخّم مزيج البادئات StemCell جين ALDH1، وهو مُعتمد كعلامة للخلايا الجذعية الورمية. يمكن تحديد التعبير الجيني المرتبط بسرطان الثدي باستخدام مزيج البادئات BreastDetect. تُنتج مزيجات البادئات المختلفة معًا الشظايا التالية:

يُمكن، عند الحاجة، تحليل الجينات المرتبطة بسرطان الثدي والقولون والبروستاتا والمبيض. يسمح جهاز PrimerMix Colon Detect بتضخيم ثلاثة مستضدات مرتبطة بالأورام وجين تحكم واحد. تُنتج البادئات أجزاءً بالأحجام التالية:

يُتيح مُركّب PrimerMix Breast Detect تضخيم ثلاثة مستضدات مرتبطة بالأورام وجين تحكم واحد. تُنتج البادئات أجزاءً بالأحجام التالية:

يُتيح مُركّب PrimerMix Prostate Detect تضخيم ثلاثة مستضدات مرتبطة بالأورام وجين تحكم واحد. تُنتج البادئات أجزاءً بالأحجام التالية:

والأهم من ذلك، أن AdnaTest عبارة عن منصة مفتوحة تسمح بتحديد خصائص أهداف mRNA المخصصة الإضافية لاكتشاف المؤشرات الحيوية الشاملة.

التطبيقات

- عزل الخلايا السرطانية المنتشرة من دم الإنسان الكامل
- التوصيف الجزيئي للخلايا السرطانية المنتشرة
- اكتشاف المؤشرات الحيوية
- تحليل الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA)
- الخزعة السائلة