Qiagen، 59110، EpiTect 96 مجموعة بيسلفيت (2)

لوحتا EpiTect Bisulfite ذوات 96 بئراً، مزيج التفاعل، محلول حماية الحمض النووي، الحمض النووي الريبي الحامل، محاليل منظمة

سمات

- إجراء مبسط لنتائج سريعة وموثوقة
- تحويل السيتوزين الكامل
- نظام فريد لحماية الحمض النووي لتحليل عالي الحساسية
- بروتوكولات محسّنة، بما في ذلك التحويل من الحمض النووي المستخلص من عينات الأنسجة المثبتة بالفورمالين والمضمنة في البارافين
- تنسيقات الأعمدة الدوارة وألواح 96 بئراً للإنتاجية العالية

تفاصيل المنتج

تُمكّن مجموعات EpiTect Bisulfite من التحويل الكامل للسيتوزينات غير المُمَثْيَلة إلى يوراسيل، ومن ثمّ تنقيتها خلال 6 ساعات. أما إجراء EpiTect 96 Bisulfite فيستغرق أقل من 7 ساعات. تعتمد هذه الطريقة عالية الحساسية على تقنية حماية مبتكرة ضد تحلل الحمض النووي، مما يضمن نتائج دقيقة حتى مع 1 نانوغرام من الحمض النووي، ويضمن معدلات تحويل عالية تتجاوز 99%. بفضل تقنية DNA Protect الفريدة، يُعدّ الحمض النووي المُحوَّل بواسطة EpiTect Bisulfite مناسبًا جدًا لتضخيم البيسلفيتوم الكامل باستخدام مجموعات EpiTect Whole Bisulfiteome. وهذا يُتيح تضخيمًا موثوقًا للحمض النووي في الحالات التي يكون فيها الحمض النووي المُحوَّل بالبيسلفيت محدودًا. تتضمن مجموعات EpiTect Bisulfite إجراءً باستخدام عمود طرد مركزي أو لوحة 96 بئرًا، ويمكن معالجتها باستخدام جهاز طرد مركزي أو مشعب تفريغ. بالإضافة إلى ذلك، يمكن أتمتة مجموعة EpiTect Bisulfite بالكامل على جهاز QIAcube Connect.

أداء

إجراء EpiTect: إجراء تقليدي
تحضير الكواشف: 10 دقائق؛ محاليل مُقسّمة مسبقاً
تفاعل البيسلفيت: 5 ساعات
التنقية: 30-45 دقيقة؛ أعمدة وألواح EpiTect الدوارة

نتائج سريعة

تستغرق عملية الطرد المركزي أو التفريغ الكاملة باستخدام مجموعة EpiTect Bisulfite Kit - من الحمض النووي إلى حمض نووي نقي مُحوّل بالبيسلفيت وجاهز للتحليل - 6 ساعات فقط. أما عملية EpiTect 96 Bisulfite فتستغرق أقل من 7 ساعات. في حين أن عمليات تحويل البيسلفيت التقليدية قد تستغرق أكثر من 18 ساعة وتتطلب تدخلاً مكثفاً من المستخدم (انظر الجدول "تحويل البيسلفيت السريع والسهل" والشكل "إجراء موفر للوقت"). توفر مجموعة EpiTect Bisulfite Kit كل ما يلزم لإتمام عملية تحويل البيسلفيت بنجاح وتنظيف الحمض النووي.

تحويل كامل للحمض النووي

يحوّل كل تفاعل باستخدام مجموعة EpiTect Bisulfite Kit من 1 نانوغرام إلى 2 ميكروغرام من الحمض النووي بكفاءة متساوية. تُمكّن هذه الطريقة المبتكرة والمحاليل المُحسّنة من استخلاص كميات كبيرة من الحمض النووي المُحوّل. ويتضح التحويل الفعال للسيتوزين من خلال قيم العتبة المنخفضة (CT) المُسجلة عند تضخيم الحمض النووي المُحوّل باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (انظر الشكل "التحويل الكامل للسيتوزين"). يُظهر تحليل الحمض النووي المُحوّل باستخدام مجموعة EpiTect Bisulfite Kit تحويلًا لأكثر من 99% من السيتوزينات غير المُمَثْيَلة (انظر الشكل "التحويل الفعال للسيتوزين"). يوفر معدل التحويل العالي هذا تحليلًا لاحقًا قابلًا للتكرار وموثوقًا.

مبدأ

تحويل البيسلفيت للعينات الصعبة

نظراً لمحدودية كمية الحمض النووي المتاحة، يُعدّ تحديد أنماط المثيلة في الحمض النووي المستخلص من عينات ثمينة ومحدودة (مثل الأنسجة المثبتة بالفورمالين والمضمنة في البارافين أو الأنسجة المُستأصلة مجهرياً) أمراً بالغ الصعوبة. مع ذلك، تُعدّ هذه الأنواع من العينات ذات أهمية خاصة لتحديد المؤشرات الحيوية القيّمة التي تتنبأ بالأمراض. تعالج مجموعات EpiTect Bisulfite هذه التحديات من خلال بروتوكولات مُحسّنة لهذه الأنواع من العينات (انظر الشكل "الكشف عن المثيلة من عينات الأنسجة المثبتة بالفورمالين والمضمنة في البارافين"). جميع المحاليل والكواشف اللازمة متوفرة، ولا يتطلب الأمر سوى الحد الأدنى من المعالجة.

لتحويل الحمض النووي مباشرة باستخدام البيسلفيت من عينات FFPE والخلايا والدم والأنسجة دون عزل الحمض النووي مسبقًا، نوصي باستخدام مجموعات EpiTect Plus FFPE Bisulfite ومجموعات EpiTect Plus LyseAll Bisulfite.

منع تفتت الحمض النووي

تم تصميم محلول حماية الحمض النووي (DNA Protect Buffer) بتركيبة فريدة لمنع تفتت الحمض النووي (الذي يحدث عادةً عند معالجة الحمض النووي بالبيسلفيت في درجات حرارة عالية وقيم أس هيدروجيني منخفضة)، ولتوفير فصل فعال لسلاسل الحمض النووي، مما ينتج عنه حمض نووي أحادي السلسلة ضروري لتحويل السيتوزين بشكل كامل (انظر "محلول حماية الحمض النووي الفريد ونظام مؤشر الأس الهيدروجيني"). يُمكّن منع التفتت من تضخيم وتحليل أجزاء الحمض النووي الكبيرة الناتجة عن تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) لاحقًا (انظر الشكل "تحويل البيسلفيت السريع والسهل"). يحتوي محلول حماية الحمض النووي أيضًا على صبغة مؤشر الأس الهيدروجيني، مما يسمح بتأكيد الأس الهيدروجيني الصحيح لتحويل السيتوزين. تتيح عملية تنظيف الحمض النووي المتكاملة والفعالة تخزين الحمض النووي المُحوّل لمدة 12 شهرًا على الأقل دون التأثير على جودته (انظر الشكل "تخزين الحمض النووي طويل الأمد").

إجراء

تتألف عملية EpiTect من بضع خطوات بسيطة، تعتمد على نظام QIAGEN المباشر للربط والغسل والإذابة (انظر مخطط "إجراء التحويل"). بعد التمسخ الحراري وتحويل الحمض النووي باستخدام بيسلفيت الصوديوم، يُوضع الحمض النووي على عمود أو صفيحة EpiTect الدوارة، حيث يُغسل باستخدام محاليل منظمة مُحسّنة وجهاز طرد مركزي دقيق قياسي أو جهاز شفط، لإزالة جميع آثار بيسلفيت الصوديوم، ثم يُذاب. يمكن استخدام الحمض النووي المذاب في جميع التطبيقات اللاحقة، بما في ذلك تفاعل البوليميراز المتسلسل الخاص بالمثيلة، وتحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي، وتسلسل البيسلفيت، وتقنية COBRA، وتقنية التسلسل الناري.

يُعدّ الوصول إلى المعلومات فوق الجينية ذا أهمية بالغة في العديد من مجالات البحوث البيولوجية والطبية، ولا سيما علم الأورام، بالإضافة إلى أبحاث الخلايا الجذعية وعلم الأحياء النمائي. ومع ذلك، يُمثّل تحليل التغيرات في مثيلة الحمض النووي تحديًا نظرًا لقلة الطرق المعيارية لتوفير بيانات قابلة للتكرار، خاصةً مع محدودية كمية العينة. من خلال حلول EpiTect المُستحدثة، تُتيح QIAGEN حلولًا معيارية لما قبل التحليل والتحليل: بدءًا من جمع عينات الحمض النووي، وتثبيتها، وتنقيها، وصولًا إلى تحويلها بالبيسلفيت، وتحليل مثيلة الحمض النووي بتقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) في الوقت الحقيقي أو النهائي، أو التسلسل (انظر الشكل "سير العمل المعياري في علم فوق الجينات").

التطبيقات

- تفاعل البوليميراز المتسلسل الخاص بالمثيلة، تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي
- كوبرا
- التسلسل/التسلسل الناري/تقنية التسلسل من الجيل التالي
- انصهار عالي الدقة
- مصفوفات المثيلة

يُعد الحمض النووي الذي تم تحويله وتنقيته باستخدام مجموعة EpiTect Bisulfite Kit مناسبًا للاستخدام في مجموعة من التطبيقات اللاحقة، بما في ذلك: