شركة كياجين، 59203، مجموعة إيبيتكت الكاملة لتحليل البيسلفيتوم (25)

بوليميراز الحمض النووي REPLI-g Midi، ومحلول تفاعل EpiTect WBA، وماء خالٍ من النيوكلياز لـ 25 تفاعل تضخيم كامل للبيسلفيتوم

سمات

- إنتاجية عالية من الحمض النووي المحول بالبيسلفيت لإجراء تفاعلات البلمرة المتسلسلة المتعددة
- تضخيم تمثيلي من الحمض النووي المحول بالبيسلفيت
- إعداد تفاعل مريح بخطوة واحدة

تفاصيل المنتج

توفر مجموعة EpiTect Whole Bisulfitome إنزيم بوليميراز الحمض النووي، والمحاليل المنظمة، والكواشف اللازمة لتضخيم الجينوم الكامل المُحوَّل بالبيسلفيت - البيسلفيتوم - باستخدام تقنية التضخيم متعدد الإزاحة (MDA). طُوِّرت هذه المجموعة خصيصًا لتضخيم الحمض النووي بعد تحويله باستخدام مجموعات EpiTect Bisulfit. وتعتمد على تقنية REPLI-g المُثبتة، وقد تم تكييفها لتلبية المتطلبات الخاصة للحمض النووي المُحوَّل بالبيسلفيت (صغر حجم شظايا الحمض النووي وتغير تركيب النيوكليوتيدات نتيجةً للتحويل بالبيسلفيت)، مع الحفاظ على تمثيل التسلسل المُحوَّل. تتراوح كمية الحمض النووي المُستخلصة عادةً من مجموعة EpiTect Whole Bisulfitome بين 1 و3 ميكروغرام لكل تفاعل، وهي كمية كافية لإجراء ما يصل إلى 300 تحليل PCR من تفاعل بيسلفيت واحد فقط باستخدام EpiTect.

مبدأ

قد يكون تحليل مثيلة تسلسلات الحمض النووي الجينومي محدودًا بسبب صغر حجم العينة المتاحة. توفر مجموعة EpiTect Whole Bisulfitome Kit تضخيمًا متجانسًا للغاية عبر كامل الجينوم المُحوَّل بالبيسلفيت، مع تحيز تسلسلي ضئيل (انظر الشكل "تحليل EpiTYPER MALDI-TOF لحمض WBA النووي"). تعتمد هذه الطريقة على تقنية التضخيم المتساوي الحرارة متعدد الإزاحة (MDA). يحافظ بوليميراز الحمض النووي ذو الكفاءة العالية، والذي يتميز بنشاط تصحيحي خارجي من 3' إلى 5'، على دقة عالية أثناء عملية التضاعف.

تم تطوير مجموعة EpiTect Whole Bisulfitome Kit خصيصًا باستخدام تقنية REPLI-g المُثبتة، وتم تكييفها لتلبية المتطلبات الخاصة للحمض النووي المُحوّل بالبيسلفيت (صغر حجم شظايا الحمض النووي وتغير تركيب النيوكليوتيدات نتيجةً للتحويل بالبيسلفيت)، مع الحفاظ على تمثيل التسلسل المُحوّل. تُحقق أفضل النتائج عند استخدامها مع مجموعات EpiTect Plus Bisulfit Kits، التي تحتوي على نظام DNA Protect مُصمم خصيصًا. يُتيح هذا النظام فصلًا فعالًا لسلاسل الحمض النووي، وهو أمر ضروري لتحويل السيتوزين بالكامل، ويمنع التفتت المفرط للحمض النووي الذي عادةً ما يرتبط بارتفاع درجة الحرارة وانخفاض الرقم الهيدروجيني في تفاعل التحويل بالبيسلفيت. يُتيح منع تفتت الحمض النووي تضخيمًا لاحقًا لشظايا الحمض النووي الكبيرة. عادةً، يتم إنتاج ما بين 1 و3 ميكروغرام من الحمض النووي لكل تفاعل باستخدام مجموعة EpiTect Whole Bisulfitome Kit.

إجراء

تتضمن عملية تحضير التفاعل المريحة ذات الخطوة الواحدة حضانة قالب الحمض النووي المحول بالبيسلفيت مع مزيج من محلول التفاعل وإنزيم بوليميراز الحمض النووي REPLI-g. بعد تعطيل البوليميراز بالحرارة، يصبح الحمض النووي المُضخّم جاهزًا للتحليل أو التخزين (انظر الشكل "إجراء WBA").

يُعدّ الوصول إلى المعلومات فوق الجينية ذا أهمية بالغة في العديد من مجالات البحوث البيولوجية والطبية، ولا سيما علم الأورام، بالإضافة إلى أبحاث الخلايا الجذعية وعلم الأحياء النمائي. ومع ذلك، يُمثّل تحليل التغيرات في مثيلة الحمض النووي تحديًا نظرًا لقلة الطرق المعيارية لتوفير بيانات قابلة للتكرار، خاصةً مع محدودية كمية العينة. تُقدّم شركة QIAGEN، من خلال منتجات EpiTect المُستحدثة، حلولًا معيارية لما قبل التحليل والتحليل، بدءًا من جمع عينات الحمض النووي وتثبيتها وتنقيها، وصولًا إلى تحويل البيسلفيت وتحليل مثيلة الحمض النووي بتقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) في الوقت الحقيقي أو النهائي، أو التسلسل (انظر الشكل "سير العمل المعياري في علم فوق الجينات").

التطبيقات

تُعدّ مجموعة EpiTect Whole Bisulfitome Kit الأداة المثالية لتوفير كمية كافية من الحمض النووي لجميع تحليلات المَثْيَلَة اللاحقة، عندما تكون كمية الحمض النووي المُحوَّل بالبيسلفيت محدودة. ينتج تفاعل التضخيم كمية كافية من الحمض النووي لإجراء 100-300 اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي (على سبيل المثال، باستخدام مجموعات EpiTect MethyLight PCR) أو تفاعلات البوليميراز المتسلسل النهائية (على سبيل المثال، باستخدام مجموعات EpiTect MSP)، حيث يُقدَّر إنتاج الحمض النووي المُضخَّم بـ 10 نانوغرام لكل تفاعل.