كياجين، 74134، مجموعة RNeasy Plus المصغرة (50)

لـ 50 تحضيرًا مصغرًا: أعمدة RNeasy Mini Spin، وأعمدة gDNA Eliminator Spin، وأنابيب تجميع، وماء خالٍ من RNase، ومحاليل منظمة.

سمات

- إزالة فعالة للحمض النووي الجينومي باستخدام أعمدة أو صفائح فريدة لإزالة الحمض النووي الجينومي (لا حاجة إلى إنزيم ديوكسي ريبونيوكلياز).
- الحصول على الحمض النووي الريبي الكلي عالي الجودة في دقائق باستخدام بروتوكولات استخلاص سريعة وبسيطة
- عزل الحمض النووي الريبي الخالي من الفينول
- معالجة عالية الإنتاجية بتنسيق 96 بئراً
- مثالي للتطبيقات الحساسة مثل تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي في الوقت الحقيقي وتسلسل الحمض النووي الريبي

تفاصيل المنتج

تُعدّ مجموعات RNeasy Plus الجيل الجديد من مجموعات استخلاص الحمض النووي الريبوزي (RNA) من QIAGEN، حيث تجمع بين تنقية الحمض النووي الريبوزي عالية الجودة وإزالة الحمض النووي الجينومي (gDNA) بكفاءة عالية باستخدام أعمدة أو صفائح gDNA Eliminator الفريدة. يتم الحصول على الحمض النووي الريبوزي الكلي عالي النقاء والإنتاجية من مجموعة واسعة من الخلايا المستنبتة والأنسجة سهلة التحلل. صُممت مجموعة RNeasy Plus Micro Kit خصيصًا لكميات محدودة من العينات، حيث تعزل ما يصل إلى 45 ميكروغرامًا من الحمض النووي الريبوزي الكلي النقي. أما مجموعة RNeasy Plus Mini Kit، فتُنقي ما يصل إلى 100 ميكروغرام من الحمض النووي الريبوزي الكلي (>200 نيوكليوتيد) من عملية استخلاص واحدة مع إزالة فعّالة للحمض النووي الجينومي. يمكن أتمتة كلتا المجموعتين على جهاز QIAcube Connect، كما يمكن تثبيت العينات بسهولة باستخدام كاشف RNAprotect Tissue Reagent أو كاشف Allprotect Tissue Reagent، وتفتيتها بكفاءة باستخدام نظام TissueRuptor II أو TissueLyser II أو LT (متوفرة بشكل منفصل). مجموعة RNeasy Plus 96 مخصصة لتنقية الحمض النووي الريبي الكلي من الخلايا المزروعة في أطباق 96 بئراً.

أداء

يُتيح استخلاص الحمض النووي الريبوزي (RNA) من الخلايا والأنسجة باستخدام مجموعات RNeasy Plus Micro و Mini الحصول على كميات كبيرة من الحمض النووي الريبوزي (RNA) قابلة للتكرار، بالإضافة إلى إزالة فعّالة للحمض النووي الجينومي (DNA) للتطبيقات الحساسة (انظر الأشكال "إزالة فعّالة للحمض النووي الجينومي من الخلايا"، و"إزالة فعّالة للحمض النووي الجينومي من الأنسجة"، و"كميات كبيرة من الحمض النووي الريبوزي (RNA) قابلة للتكرار"، و"حمض نووي ريبوزي (RNA) جاهز للتحليل"). ويتم الحصول بشكل روتيني على الحمض النووي الريبوزي الكلي (RNA) ذي قيم Agilent RIN تقارب 10 من الأنسجة والخلايا المستنبتة.

توفر مجموعتا RNeasy Plus Micro و Mini أيضًا إثراءً للـ mRNA نظرًا لاستبعاد معظم جزيئات RNA التي يقل طولها عن 200 نيوكليوتيد (مثل rRNA و tRNA). لعزل RNA الكلي الذي يحتوي على جزيئات RNA صغيرة (مثل miRNA) من الخلايا المستنبتة، تتوفر بروتوكولات عزل RNA إضافية موصوفة في دليل RNeasy Plus Micro وكبروتوكول تكميلي منفصل لمجموعة RNeasy Plus Mini. تتوافق مجموعة RNeasy Plus 96 مع نطاق واسع من خطوط الخلايا، وتوفر تنقية لـ RNA عالي الجودة بقيم Agilent RIN تقارب 10 (انظر الشكل "RNA عالي الجودة"). يُمكّن الإزالة الكاملة للحمض النووي الجينومي بواسطة المجموعة (انظر الشكل "إزالة فعالة للحمض النووي الجينومي") من الكشف عن نسخ محددة في تطبيقات عالية الحساسية، مثل التحليل الكمي بتقنية RT-PCR في الوقت الحقيقي للأهداف منخفضة الوفرة. بالإضافة إلى ذلك، فإن تنقية الحمض النووي الريبي الموثوقة من 10 2 إلى 10 6 خلايا تسمح بالقياس الكمي في الوقت الحقيقي RT-PCR على نطاق ديناميكي واسع (انظر الشكل "تنقية الحمض النووي الريبي الموثوقة").

مبدأ

- تصنيع
- الإدارة المسؤولة للمواد الكيميائية
- محتوى مستدام ضمن المنتجات ومواد التعبئة والتغليف
- التخلص من العبوة في نهاية عمرها الافتراضي

تدمج تقنية RNeasy Plus تقنية QIAGEN المبتكرة للربط الانتقائي للحمض النووي المزدوج مع تقنية RNeasy الراسخة. وتضمن هذه التقنية تنقية فعالة للحمض النووي الريبوزي (RNA) عالي الجودة، دون الحاجة إلى هضم إضافي باستخدام إنزيم DNase. الحمض النووي الريبوزي المنقى جاهز للاستخدام، وهو مثالي للتطبيقات اللاحقة التي تتأثر بكميات ضئيلة من تلوث الحمض النووي، مثل تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (RT-PCR).

تُحلل الخلايا والأنسجة سهلة التحلل وتُجانس أولاً في محلول RLT Plus عالي التمسخ المحتوي على غوانيدين إيزوثيوسيانات، والذي يُعطل إنزيمات RNase فوراً لضمان عزل الحمض النووي الريبي (RNA) السليم. ثم يُمرر المستخلص عبر عمود طرد مركزي gDNA Eliminator أو صفيحة gDNA Eliminator ذات 96 بئراً، والتي تعمل، بالاشتراك مع المحلول عالي الملوحة، على إزالة الحمض النووي الجينومي (DNA) بشكل انتقائي وفعال. يُضاف الإيثانول لتوفير ظروف ارتباط مناسبة للحمض النووي الريبي، وتُطبق العينة على عمود طرد مركزي RNeasy أو صفيحة ذات 96 بئراً. تحتوي هذه الأعمدة والصفائح المتخصصة ذات 96 بئراً على غشاء سيليكا يرتبط تحديداً بالحمض النووي الريبي من الخلايا المحللة. بالنسبة للأنسجة الدهنية والتي يصعب تحليلها، يُوصى باستخدام مجموعات RNeasy Plus Universal. لعزل الحمض النووي الريبي الكلي، بما في ذلك الحمض النووي الريبي الميكروي (miRNA)، من أنواع العينات الأخرى، نوصي باستخدام مجموعات miRNeasy.

مجموعة QIAwave RNA Plus Mini Kit هي نسخة صديقة للبيئة من مجموعة RNeasy Plus Mini Kit القياسية. تقلل هذه النسخة من استخدام البلاستيك والكرتون بنسبة تصل إلى 47% و42% على التوالي، وتتضمن أنابيب تجميع النفايات مصنوعة من بلاستيك معاد تدويره بنسبة 100%، ويمكن إعادة استخدامها أثناء العملية. تُقدم محاليل QIAwave المركزة، مما يقلل من استخدام البلاستيك بنسبة تصل إلى 90% لكل زجاجة. وعلى الرغم من الاختلافات الظاهرية، تظل مجموعة QIAwave سهلة الاستخدام، مع تطابق التركيب الكيميائي والأداء مع المجموعة القياسية.

بالتعاون مع مختبر ماي جرين لاب، قمنا أيضًا بتقييم الأثر البيئي لمجموعة RNeasy Plus Mini Kit (50/250) ومجموعة QIAwave RNA Plus Mini Kit (50/250). صُممت ملصقات عامل الأثر البيئي الخاصة بمختبر ماي جرين لاب (المساءلة، والاتساق، والشفافية) لتقييم المنتجات وتصنيفها وفقًا لمعايير استدامة متعددة، تشمل ما يلي:

تُقيّم المنتجات من 1 إلى 10 باستثناء استهلاك الطاقة والمياه، حيث يُقيّم كل منهما بنقطة واحدة لكل كيلوواط ساعة أو جالون على التوالي. تشير الدرجة المنخفضة إلى تأثير بيئي أقل (انظر الأشكال "ملصق عامل التأثير البيئي لمجموعات RNA Plus Mini Kits ACT في الولايات المتحدة (50/250)، والاتحاد الأوروبي (50/250)، والمملكة المتحدة (50/250)").

إجراء

تُنقي مجموعة RNeasy Plus Micro Kit الحمض النووي الريبوزي الكلي من خلايا يصل عددها إلى 5 × 10⁵ أو من 5 ملغ من الأنسجة، بينما تعزل مجموعة RNeasy Plus Mini Kit الحمض النووي الريبوزي الكلي من خلايا يصل عددها إلى 10⁷ أو من 30 ملغ من الأنسجة. تتيح آلية عمل مختصرة عزل الحمض النووي الريبوزي مع إزالة الحمض النووي الجينومي في أقل من 25 دقيقة (انظر مخطط إجراءات RNeasy Plus). تُحلل العينات أولاً وتُجانس. يُمرر المستخلص عبر عمود طرد مركزي لإزالة الحمض النووي الجينومي، ويُضاف الإيثانول إلى السائل المار، ثم تُوضع العينة على عمود طرد مركزي RNeasy. يرتبط الحمض النووي الريبوزي بالغشاء وتُغسل الملوثات. يُستخلص الحمض النووي الريبوزي عالي الجودة في كمية قليلة من الماء تصل إلى 14 ميكرولتر باستخدام مجموعة RNeasy Plus Micro Kit أو 30 ميكرولتر باستخدام مجموعة RNeasy Plus Mini Kit.

تتوفر بروتوكولات مختلفة للمواد الأولية المختلفة. وتختلف هذه البروتوكولات بشكل رئيسي في عملية تحلل العينة وتجانسها. وبمجرد تطبيق العينة على عمود الطرد المركزي لفصل الحمض النووي الجينومي (gDNA Eliminator)، تصبح البروتوكولات متشابهة. يوفر هذا الإجراء تركيزًا أعلى للحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) نظرًا لاستبعاد معظم أنواع الحمض النووي الريبوزي التي يقل طولها عن 200 نيوكليوتيد (مثل الحمض النووي الريبوزي الريبوسومي rRNA والحمض النووي الريبوزي الناقل tRNA).

عند تفتيت الأنسجة وتجانسها في محلول RLT Plus (المرفق مع مجموعة RNeasy Plus Mini Kit)، قد يحدث تكوّن رغوة زائدة. يمكن تقليل هذه الرغوة بشكل ملحوظ بإضافة كاشف DX (المرفق بشكل منفصل) إلى محلول RLT Plus قبل بدء عملية التفتيت والتجانس. تم اختبار كاشف DX بعناية مع المجموعة، وهو لا يؤثر على نقاء العينة A أو على التطبيقات اللاحقة.

يُمكن تنقية الحمض النووي الريبوزي (RNA) بكفاءة عالية باستخدام صفائح RNeasy 96. قبل وضع مستخلصات الخلايا على صفيحة RNeasy 96، تُمرر أولاً عبر صفيحة gDNA Eliminator 96 (انظر الشكل "إجراء RNeasy Plus 96"). تُعالج صفائح gDNA Eliminator 96 بسهولة باستخدام جهاز طرد مركزي (Centrifuge 4-16). تتم عملية تنقية الحمض النووي الريبوزي (RNA) باستخدام صفائح RNeasy 96 يدويًا، وتتألف من 3 خطوات بسيطة: الربط، والغسل، والإذابة. تُعالج الصفائح بسرعة وسهولة إما باستخدام جهاز طرد مركزي (Centrifuge 4-16 و Plate Rotor 2 x 96) أو باستخدام مزيج من جهاز التفريغ (QIAvac 96) وجهاز الطرد المركزي. يُمكن استخدام ما يصل إلى 2 × 10⁶ خلية كمادة أولية عند معالجة الصفائح باستخدام جهاز الطرد المركزي، بينما يُمكن استخدام ما يصل إلى 1 × 10⁶ خلية عند معالجة الصفائح باستخدام جهاز التفريغ وجهاز الطرد المركزي. تُتيح هذه الطريقة إثراء الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) نظرًا لاستبعاد معظم أنواع الحمض النووي الريبوزي التي يقل طولها عن 200 نيوكليوتيد (مثل الحمض النووي الريبوزي الريبوسومي rRNA والحمض النووي الريبوزي الناقل tRNA). ويمكن تعديل طريقة RNeasy Plus لتنقية الحمض النووي الريبوزي الكلي الذي يحتوي على أنواع صغيرة من الحمض النووي الريبوزي، مثل الحمض النووي الريبوزي الميكروي miRNA، من الخلايا المستنبتة.

يمكن أيضًا تنفيذ بروتوكولات RNeasy Plus Mini القياسية باستخدام نظام TRACKMAN Connected، المقترن بماصات PIPETMAN M Connected، وكلاهما من شركة Gilson. يرشد نظام TRACKMAN Connected الباحثين خلال بروتوكولات RNeasy Plus Mini مع ضبط إعدادات ماصة PIPETMAN M Connected المزودة بتقنية Bluetooth تلقائيًا. يتم تسجيل كل خطوة من خطوات تنفيذ البروتوكول لتسريع عملية إعداد التقارير من خلال إنشاء تقرير تشغيل شامل. حمّل المزيد من المعلومات.

التطبيقات

- مقاطع مجمدة تم تشريحها مجهرياً بالليزر
- شفط بالإبرة الدقيقة

- اكتشاف الأدوية
- البحوث الطبية الحيوية

يُعدّ الحمض النووي الريبوزي (RNA) المُنقّى باستخدام مجموعات RNeasy Plus مثاليًا للتطبيقات اللاحقة التي تتأثر بكميات ضئيلة من تلوث الحمض النووي (DNA)، مثل تسلسل الحمض النووي الريبوزي (RNA-seq) والتفاعل التسلسلي الكمي للبوليميراز العكسي في الوقت الحقيقي (RT-PCR). كما يمكن استخدام الحمض النووي الريبوزي المُنقّى في تطبيقات أخرى.

تُعدّ مجموعة RNeasy Plus Micro Kit مناسبة للعينات الصغيرة، بما في ذلك:

إن سهولة تنقية الحمض النووي الريبي (RNA) في شكل 96 بئراً تجعل مجموعة RNeasy Plus 96 مناسبة تمامًا لتحليل التعبير الجيني عالي الإنتاجية في مجالات مثل: