كياجين، 74324، مجموعة RNeasy Protect الصغيرة لتحليل اللعاب (50)

كاشف RNAprotect اللعابي (50 مل) ومجموعة RNeasy Micro Kit (50)

سمات

- فوري في تثبيت وحماية الحمض النووي الريبي
- بيانات موثوقة عن التعبير الجيني وتوصيف الجينات
- لا حاجة إلى النيتروجين السائل أو الثلج الجاف أو الفينول
- حمض نووي ريبوزي كامل عالي الجودة وجاهز للاستخدام في دقائق
- لا توجد تدرجات في كلوريد السيزيوم، ولا ترسيب لكلوريد الليثيوم أو الإيثانول

تفاصيل المنتج

تُمكّن مجموعات RNeasy Protect Mini Kits من تثبيت الحمض النووي الريبوزي (RNA) في عينات الأنسجة، والحمض النووي الريبوزي والحمض النووي (DNA) في الخلايا المفروزة أو المستنبتة، والحمض النووي الريبوزي في عينات اللعاب البشري، والحمض النووي الريبوزي في العينات البكتيرية. تتضمن مجموعتا RNeasy Protect Mini Kit وBacteria Mini Kit أعمدة RNeasy الدوارة لتنقية ما يصل إلى 100 ميكروغرام من الحمض النووي الريبوزي عالي الجودة باستخدام تقنية غشاء السيليكا. توفر مجموعة RNeasy Protect Cell Mini Kit مجموعة RNeasy Plus Mini Kit لتنقية الحمض النووي الريبوزي الكلي. أما مجموعة RNeasy Protect Saliva Mini Kit فتتضمن مجموعة RNeasy Micro Kit، التي تُنقي وتُركز الحمض النووي الريبوزي الكلي باستخدام أعمدة RNeasy MinElute الدوارة المتخصصة.

يمكن أتمتة مجموعات RNeasy Protect Mini و RNeasy Protect Cell Mini و RNeasy Protect Bacteria Mini على QIAcube Connect.

أداء

نسيج الفأر: الكمية (ملغ)
الدماغ: 10
الكبد: 10
الرئة: 10
الطحال: 10

نتيجة التحليل: كاشف حماية الخلايا RNAprotect
كمية الحمض النووي الريبوزي (RNA) باستخدام تقنية RNeasy (ميكروغرام): 10
تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي في الوقت الحقيقي لجين abl (قيمة العتبة): 25

ظروف تخزين الخلايا: قيمة RIN للحمض النووي الريبي النقي*
30 درجة مئوية (يوم واحد): 9.8
25 درجة مئوية (7 أيام): 9.7
2-8 درجة مئوية (28 يومًا): 10
-20 درجة مئوية (28 يومًا): 9.8
-80 درجة مئوية (28 يومًا): 9.8

تمنع خصائص تثبيت الحمض النووي الريبوزي (RNA) في كاشف RNAprotect Tissue Reagent تحفيز الجينات أو تثبيطها الناتج عن معالجة العينات، مما يسمح لك بالحفاظ على ملف تعريف التعبير الجيني وتحليله. تُمكّن حزمة RNeasy وRNAprotect من عزل حمض نووي ريبوزي عالي الجودة (انظر الشكل "منع تحلل الحمض النووي الريبوزي الرسول في الأنسجة"). بالإضافة إلى ذلك، يبقى الحمض النووي الريبوزي المنقى بواسطة RNeasy من العينات المثبتة بـ RNAprotect سليمًا بعد تخزين عينات الأنسجة في ظل ظروف متنوعة (انظر الشكل "حمض نووي ريبوزي مستقر في الأنسجة"). يمكن معالجة مجموعة متنوعة من أنواع الأنسجة باستخدام مجموعة RNeasy Protect Mini Kit (انظر الجدول "إجمالي كميات الحمض النووي الريبوزي التي تم الحصول عليها باستخدام مجموعة RNeasy Protect Mini Kit").

كمية الحمض النووي الريبوزي الكلي التي تم الحصول عليها باستخدام مجموعة RNeasy Protect Mini Kit

تعتبر مجموعة RNeasy Protect Cell Mini Kit مثالية لتجارب تحليل التعبير الجيني حيث يلزم نقل الخلايا من مختبر إلى آخر (انظر الجدول "عوائد أعلى من الحمض النووي الريبي من الكريات البيضاء* المحفوظة لمدة 10 أيام في كاشف RNAprotect Cell").

زيادة إنتاج الحمض النووي الريبوزي (RNA) من الكريات البيضاء* المحفوظة لمدة 10 أيام في كاشف حماية الحمض النووي الريبوزي للخلايا

يمكن تخزين الخلايا الموجودة في كاشف RNAprotect Cell Reagent أو نقلها لمدة تصل إلى يوم واحد عند درجة حرارة 30 درجة مئوية، ولمدة تصل إلى 7 أيام في درجة حرارة الغرفة (15-25 درجة مئوية)، أو لمدة تصل إلى 4 أسابيع عند درجة حرارة 2-8 درجة مئوية، ويمكن أيضًا تخزينها على المدى الطويل عند درجة حرارة -20 درجة مئوية أو -80 درجة مئوية (انظر الجدول "RNA السليم من خلايا Jurkat المخزنة في درجة حرارة الغرفة"، والشكلين "التثبيط الفعال لتحفيز PMA" و"قياس أكثر موثوقية لنسخة CD83") مما يسمح لك بالحفاظ على ملف تعريف التعبير الجيني وتحليله.

الحمض النووي الريبوزي السليم من خلايا جركات المخزنة في درجة حرارة الغرفة

يمكن تخزين اللعاب المُثبَّت باستخدام كاشف RNAprotect Saliva Reagent أو نقله لمدة تصل إلى يوم واحد عند درجة حرارة 37 درجة مئوية، أو لمدة تصل إلى 14 يومًا في درجة حرارة الغرفة (15-25 درجة مئوية)، أو لمدة تصل إلى 4 أسابيع عند درجة حرارة 2-8 درجة مئوية، أو يمكن حفظه عند درجة حرارة -20 درجة مئوية أو -80 درجة مئوية (انظر الشكل "التثبيت الفعال لنسخة β-actin")، مما يسمح لك بالحفاظ على ملف تعريف التعبير الجيني وتحليله. يسمح الحمض النووي الريبوزي (RNA) المُنقّى من اللعاب، كبديل للدم، بتحليل المصفوفات الدقيقة لأبحاث أمراض الفم والأمراض الجهازية، وتحليل التعبير الجيني للعلامات الحيوية للحمض النووي الريبوزي (RNA) للسرطان بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي الكمي (RT-PCR) في الوقت الحقيقي (انظر الشكلين "تقليل تحلل النسخ في اللعاب" و"مستويات mRNA مستقرة للعلامات الحيوية للسرطان").

أثناء الطرق التقليدية لحصاد الخلايا وعزل الحمض النووي الريبوزي (RNA)، يؤدي التحلل الأنزيمي للحمض النووي الريبوزي إلى انخفاض أو فقدان العديد من النسخ. ويكون هذا الانخفاض ملحوظًا بشكل خاص في جزيئات الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) البكتيرية، التي تتميز بعمر نصف قصير جدًا لا يتجاوز بضع دقائق. إضافةً إلى ذلك، قد تُحفز الجينات أثناء التعامل مع العينات البكتيرية ومعالجتها، مما يؤدي إلى زيادة التعبير الجيني. يتغلب استخدام كاشف RNAprotect Bacteria على هذه المشاكل من خلال توفير استقرار فوري قبل عزل الحمض النووي الريبوزي (انظر الشكلين "كاشف RNAprotect Bacteria يمنع تحلل الحمض النووي الريبوزي الرسول" و"ملامح التعبير الجيني الدقيقة")، مما يسمح لك بالحفاظ على ملامح التعبير الجيني وتحليلها. يبلغ مردود الحمض النووي الريبوزي من بكتيريا الإشريكية القولونية (6 × 10⁸ خلية) 100 ميكروغرام، بينما يبلغ مردود الحمض النووي الريبوزي من بكتيريا العصوية الرقيقة (1 × 10⁸ خلية) 15 ميكروغرام. إن الحمض النووي الريبي الذي تم تنقيته باستخدام المجموعة يتميز بجودة عالية مع نسب A2 60 /A 280 من 1.9 إلى 2.1 (تم قياسها في 10 ملي مولار Tris·Cl، درجة الحموضة 7.5).

يتميز الحمض النووي الريبوزي (RNA) المنقى بتقنية RNeasy بنسبة امتصاص ضوئي عند 260 نانومتر إلى 280 نانومتر تتراوح بين 1.9 و2.1 (تم قياسها في محلول Tris·Cl بتركيز 10 ملي مولار، ودرجة حموضة 7.5). وبما أن تقنية RNeasy تُركز على أنواع الحمض النووي الريبوزي التي يزيد طولها عن 200 نيوكليوتيد، فإن كمية الحمض النووي الريبوزي المستخلصة لا تشمل الحمض النووي الريبوزي الريبوسومي 5S، أو الحمض النووي الريبوزي الناقل (tRNA)، أو أنواع الحمض النووي الريبوزي الأخرى ذات الوزن الجزيئي المنخفض.

مبدأ

يوفر نظام RNeasy Protect، الذي يتألف من حزمة RNeasy وRNAprotect، حلاً متكاملاً لحماية وعزل الحمض النووي الريبوزي (RNA)، بدءًا من جمع العينات وحتى الحصول على حمض نووي ريبوزي نقي، كل ذلك في مجموعة واحدة. تتيح تقنية غشاء السيليكا RNeasy المُثبتة، والمُصممة على شكل عمود طرد مركزي، بالإضافة إلى خصائص تثبيت الحمض النووي الريبوزي التي توفرها كواشف RNAprotect، تنقية حمض نووي ريبوزي عالي الجودة وسليم. بمجرد جمع العينة البيولوجية، يصبح الحمض النووي الريبوزي فيها غير مستقر للغاية (انظر الشكل "التغيرات في مستويات الحمض النووي الريبوزي الرسول"). تعمل كواشف RNAprotect المبتكرة على تثبيت نمط التعبير الجيني للحمض النووي الريبوزي وحمايته على الفور. يمكن حفظ العينات دون خطر تحلل الحمض النووي الريبوزي، حتى بعد دورات تجميد وإذابة متعددة. بعد التثبيت، تُبسط تقنية RNeasy عملية عزل الحمض النووي الريبوزي الكلي من خلال الجمع بين دقة تحلل غوانيدين إيزوثيوسيانات وسرعة ونقاء تنقية غشاء السيليكا (انظر الشكل "عمود الطرد المركزي RNeasy Mini").

إجراء

يمكن تثبيت العينات وتخزينها في محلول RNAprotect Tissue Reagent، المتوفر في مجموعات RNeasy Protect. لتنقية الحمض النووي الريبوزي (RNA)، تُحلل العينات (0.5-30 ملغ من الأنسجة) أولًا ثم تُجانس. يُضاف الإيثانول إلى المحلول المُحلل لتوفير ظروف ارتباط مثالية. بعد ذلك، يُحمّل المحلول المُحلل على غشاء السيليكا RNeasy (سعة ارتباط تصل إلى 100 ميكروغرام من الحمض النووي الريبوزي). يرتبط الحمض النووي الريبوزي، وتُغسل جميع الملوثات بكفاءة. يُستخلص الحمض النووي الريبوزي النقي والمركز في 30-100 ميكرولتر من الماء (انظر مخطط "إجراء RNeasy Protect Mini"). يمكن أتمتة عملية تنقية الحمض النووي الريبوزي باستخدام جهاز QIAcube Connect.

تُخلط الخلايا المفروزة أو المستنبتة مع كاشف RNAprotect Cell Reagent، الذي يُثبّت الحمض النووي الريبوزي (RNA) الخلوي فورًا. بعد تثبيت الحمض النووي الريبوزي، يُنقّى الحمض النووي الريبوزي الكلي باستخدام مجموعة RNeasy Plus Mini Kit (انظر مخطط "إجراء RNeasy Protect Cell"). تُفصل الخلايا في كاشف RNAprotect Cell Reagent بالطرد المركزي، ثم تُحلّل الخلايا المترسبة وتُجانس في محلول RLT Plus. يُمرّر المستخلص بعد ذلك عبر عمود gDNA Eliminator الدوار، الذي يُزيل الحمض النووي الجينومي بسرعة وفعالية. يُضاف الإيثانول إلى المستخلص، ثم يُطبّق على عمود RNeasy الدوار. بعد الطرد المركزي، يرتبط الحمض النووي الريبوزي الكلي بغشاء عمود RNeasy الدوار. تُغسل الملوثات بكفاءة، ويُستخلص الحمض النووي الريبوزي الكلي عالي الجودة في 30-50 ميكرولتر من الماء الخالي من إنزيم RNase. يتطلب تنقية الحمض النووي (DNA)، أو الحمض النووي الريبوزي والحمض النووي معًا، شراء مجموعة QIAGEN لتنقية الحمض النووي. تتوفر التفاصيل في دليل كواشف الخلايا RNAprotect.

تُجمع عينة من اللعاب (200 ميكرولتر) من المتبرع وتُخلط فورًا مع كاشف RNAprotect Saliva لتثبيت الحمض النووي الريبوزي (RNA) الموجود في اللعاب. يُستخلص الحمض النووي الريبوزي الكلي من اللعاب المُثبَّت باستخدام مجموعة RNeasy Micro Kit (انظر مخطط "إجراء RNeasy Protect Saliva"). تُخضع عينة اللعاب أولًا للطرد المركزي، ثم يُضاف محلول Buffer RLT إلى الراسب الناتج. بعد إضافة الإيثانول، تُوضع العينة على عمود RNeasy MinElute، حيث يرتبط الحمض النووي الريبوزي بالغشاء بعد الطرد المركزي. تُزال آثار الحمض النووي الجينومي (DNA) عن طريق هضم الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (DNase)، وتُغسل الملوثات في عدة خطوات غسل. ثم يُستخلص الحمض النووي الريبوزي عالي النقاء باستخدام ماء خالٍ من إنزيم RNase في حجم 14 ميكرولتر فقط. يعمل كاشف RNAprotect Saliva أيضًا على تثبيت الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (DNA). تتوفر بروتوكولات لتنقية الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (DNA)، أو الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (RNA) والحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (DNA)، من اللعاب المُثبَّت.

يُضاف حجمان من كاشف RNAprotect Bacteria مباشرةً إلى حجم واحد من مزرعة بكتيرية (≤7.5 × 10⁸ بكتيريا) قبل عزل الحمض النووي الريبوزي (RNA)، مما يوفر استقرارًا فوريًا له (انظر مخطط "إجراء كاشف RNAprotect Bacteria"). يتيح هذا الاستقرار وقتًا كافيًا لتحليل البكتيريا بكفاءة باستخدام بروتوكولات متعددة: التحليل الأنزيمي، أو التفتيت الميكانيكي، أو مزيج من الطريقتين. نوصي باستخدام جهاز TissueLyser II للتفتيت الميكانيكي الفعال. ثم يُضاف الإيثانول إلى المحلول لتوفير ظروف ربط مثالية. يُحمّل المحلول على غشاء السيليكا RNeasy (سعة الربط 100 ميكروغرام من الحمض النووي الريبوزي). بعد ربط الحمض النووي الريبوزي، تُغسل جميع الملوثات بكفاءة. يُستخلص الحمض النووي الريبوزي النقي المركز في 30-100 ميكرولتر من الماء. يمكن أتمتة مجموعة RNeasy Protect Bacteria Mini Kit على جهاز QIAcube Connect.

تختلف كميات الحمض النووي الريبوزي (RNA) المستخلصة من البكتيريا باختلاف أنواعها وظروف نموها. تُعدّ مجموعة RNeasy Protect Bacteria Mini Kit مناسبة للاستخدام مع طيف واسع من أنواع البكتيريا، سواءً كانت موجبة الغرام (مثل المكورات العنقودية الذهبية والمتفطرة الطيرية) أو سالبة الغرام (مثل الإشريكية القولونية والسالمونيلا التيفية). يمكن استخدام البكتيريا النامية في وسط غذائي بسيط أو معقد. ولأنّ إجراء RNeasy يُركّز على أنواع الحمض النووي الريبوزي التي يزيد طولها عن 200 نيوكليوتيد، فإنّ ناتج الحمض النووي الريبوزي لا يشمل الحمض النووي الريبوزي الريبوسومي 5S، أو الحمض النووي الريبوزي الناقل (tRNA)، أو أنواع الحمض النووي الريبوزي الأخرى ذات الوزن الجزيئي المنخفض. توفر مجموعات RNeasy Protect Bacteria Kits حمضًا نوويًا ريبوزيًا عالي الجودة مع الحد الأدنى من التنقية المشتركة للحمض النووي (DNA). بالنسبة لبعض تطبيقات الحمض النووي الريبوزي الحساسة لكميات ضئيلة جدًا من الحمض النووي، يمكن إزالة الكميات المتبقية من الحمض النووي باستخدام مجموعة DNase الخالية من RNase لمعالجة الحمض النووي بسهولة على العمود أثناء إجراء RNeasy.

التطبيقات

- تسلسل الحمض النووي الريبوزي
- تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي
- تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي النهائي
- التلطيخ الشمالي، والتلطيخ النقطي، والتلطيخ الشقي
- تحليل المصفوفات
- اختيار الحمض النووي الريبي متعدد الأدينين

يُعدّ الحمض النووي الريبوزي (RNA) المُنقّى بتقنية RNeasy مثاليًا للاستخدام في جميع التطبيقات. وتشمل التطبيقات اللاحقة ما يلي: