كياجين، 74704، مجموعة RNeasy المصغرة للأنسجة الليفية (50)

٥٠ عمودًا صغيرًا من نوع RNeasy، أنابيب تجميع (١٫٥ مل و ٢ مل)، بروتينيز K، ديوكسي ريبونيوكلياز I خالي من الريبونيوكلياز، كواشف ومحاليل منظمة خالية من الريبونيوكلياز

سمات

- بروتوكولات مُحسّنة للأنسجة الليفية
- إنتاجية عالية من الحمض النووي الريبي الكلي
- حمض نووي ريبوزي عالي الجودة لجميع التطبيقات اللاحقة
- إزالة الحمض النووي الجينومي باستخدام إنزيم ديوكسي ريبونيوكلياز الأول (DNase I)

تفاصيل المنتج

تتضمن مجموعة RNeasy Fibrous Tissue Mini Kit بروتينيز K لإزالة البروتينات الزائدة من عينات الأنسجة الغنية بالألياف، وأعمدة RNeasy الدوارة لتنقية ما يصل إلى 100 ميكروغرام من الحمض النووي الريبي عالي الجودة. يمكن أتمتة المجموعة على جهاز QIAcube Connect. يمكن تثبيت عينات الأنسجة الليفية بسهولة باستخدام كاشف RNAprotect Tissue Reagent أو كاشف Allprotect Tissue Reagent، وتفتيتها بكفاءة باستخدام نظام TissueRuptor أو TissueLyser. بالنسبة للعينات الأكبر حجمًا، تتوفر أيضًا مجموعة RNeasy Fibrous Tissue Midi Kit (بسعة ربط تصل إلى 1 ملغ من الحمض النووي الريبي في العمود الدوار).

أداء

نسيج الفئران (10 ملغ): كمية الحمض النووي الريبي* (ميكروغرام) باستخدام مجموعة RNeasy Fibrous Tissue Mini Kit
القلب: 8.2
العضلات: 5.3
المظهر: 6.0
المريء: 13.9

صُممت مجموعات RNeasy Fibrous Tissue خصيصًا للاستخدام مع الأنسجة الغنية بالألياف، وتضمن طريقة RNeasy Fibrous Tissue عزلًا سهلًا وفعالًا للحمض النووي الريبوزي الكلي عالي الجودة (انظر الشكل "حمض نووي ريبوزي عالي الجودة من الأنسجة الغنية بالألياف")، وهو مناسب لأي تطبيق لاحق، بما في ذلك تحليل المصفوفات وتفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي الكمي (RT-PCR) في الوقت الحقيقي (انظر الشكلين "تحليل التعبير الجيني في الوقت الحقيقي في مجموعة متنوعة من الأنسجة الليفية" و"تحليل LightCycler للحمض النووي الريبوزي عالي الجودة من القلب"). تضمن مجموعة RNeasy Fibrous Tissue Mini Kit إنتاجية أعلى من الحمض النووي الريبوزي من الأنسجة الغنية بالألياف مقارنةً بالطرق الأخرى القائمة على السيليكا (انظر الجدول).

مبدأ

تُسهّل تقنية RNeasy عملية استخلاص الحمض النووي الريبوزي الكلي (RNA) من خلال الجمع بين دقة تحلل غوانيدين إيزوثيوسيانات وسرعة ونقاء تنقية غشاء السيليكا. صُممت مجموعات RNeasy للأنسجة الليفية خصيصًا للاستخدام مع الأنسجة الغنية بالألياف، مثل العضلات الهيكلية والقلب والشريان الأورطي، وهي أنسجة يصعب تحليلها نظرًا لغناها بالبروتينات الانقباضية والنسيج الضام والكولاجين. يدمج بروتوكول RNeasy للأنسجة الليفية خطوات هضم البروتينيز K وهضم DNase الخالي من RNase أثناء استخلاص الحمض النووي الريبوزي (RNA) لتفكيك البروتينات والحمض النووي الجينومي (DNA) للحصول على كميات أكبر من الحمض النووي الريبوزي الكلي عالي الجودة. ولأن إجراءات RNeasy تُثري الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) وأنواع الحمض النووي الريبوزي الأخرى التي يزيد طولها عن 200 نيوكليوتيد، فإن كمية الحمض النووي الريبوزي الكلي المستخلص لا تشمل الحمض النووي الريبوزي الريبوسومي 5S (5S rRNA) والحمض النووي الريبوزي الناقل (tRNA) وأنواع الحمض النووي الريبوزي الأخرى ذات الوزن الجزيئي المنخفض، والتي تُشكل ما بين 15 و20% من إجمالي الحمض النووي الريبوزي الخلوي.

إجراء

تُحلل عينات من الأنسجة الليفية بوزن 0.5-30 ملغ في محلول منظم من غوانيدين إيزوثيوسيانات. بعد تخفيف المحلول، تُعالج العينة ببروتياز K. تُفصل الرواسب بالطرد المركزي. ثم يُضاف الإيثانول إلى المحلول الصافي، ويرتبط الحمض النووي الريبوزي (RNA) بغشاء السيليكا RNeasy. تُزال آثار الحمض النووي (DNA) التي قد تتخلل العينة بمعالجة باستخدام إنزيم DNase على عمود الدوران RNeasy. يُغسل إنزيم DNase وأي ملوثات أخرى، ويُستخلص ما يصل إلى 100 ميكروغرام من الحمض النووي الريبوزي الكلي عالي الجودة في 30-100 ميكرولتر من الماء الخالي من إنزيم RNase (انظر الشكل "إجراء RNeasy المصغر للأنسجة الليفية").

التطبيقات

توفر مجموعات RNeasy Fibrous Tissue Kits حمض نووي ريبوزي كلي عالي الجودة من عينات غنية بالألياف وهو مناسب لأي تطبيق لاحق، بما في ذلك تحليل المصفوفات و RT-PCR في الوقت الحقيقي.