كياجين، 74881، مجموعة RNeasy 96 العالمية للأنسجة (4)

لتحضير 4 × 96 عينة من الحمض النووي الريبوزي الكلي: 4 صفائح RNeasy 96، أنابيب تجميع دقيقة، أنابيب استخلاص دقيقة CL، أغطية، حواجز S، صفائح شريطية AirPore، كاشف التحلل QIAzol، كواشف ومحاليل خالية من RNase.

سمات

- إنتاجية عالية من الحمض النووي الريبي الكلي من جميع الأنسجة
- إزالة سريعة وغير إنزيمية للحمض النووي الجينومي
- تبسيط عملية تحلل QIAzol وتنقية RNeasy 96
- حمض نووي ريبوزي نقي وعالي الجودة خالٍ من تلوث الفينول
- حمض نووي ريبوزي عالي الأداء لجميع التطبيقات اللاحقة

تفاصيل المنتج

تجمع مجموعة RNeasy Plus Universal Mini Kit بين تنقية الحمض النووي الريبوزي (RNA) بسرعة وسهولة، والتخلص الفعال من الحمض النووي الجينومي (DNA). تُمكّن البروتوكولات المُحسّنة من تنقية الحمض النووي الريبوزي عالي الجودة من أي نوع من الأنسجة، حتى الأنسجة التي يصعب تحليلها. تتضمن المجموعة كاشف QIAzol Lysis لتحليل الأنسجة الدهنية وأنواع أخرى من الأنسجة، وأعمدة RNeasy الدوارة لتنقية الحمض النووي الريبوزي عالي الجودة. يمكن أتمتة مجموعة RNeasy Plus Universal Mini Kit على جهاز QIAcube Connect.

تتيح مجموعة RNeasy 96 Universal Tissue Kit تنقية الحمض النووي الريبوزي الكلي (RNA) من أي نسيج في صفائح ذات 96 بئرًا. يتم تحليل الأنسجة وتجانسها بكفاءة باستخدام كاشف QIAzol Lysis Reagent، ثم يُنقى الحمض النووي الريبوزي عالي الجودة باستخدام صفائح RNeasy 96 ذات غشاء السيليكا. تتم عملية التنقية اليدوية باستخدام جهاز الطرد المركزي QIAGEN 4-16KS، ويمكن استخدام جهاز QIAvac 96 Vacuum manifold كخيار إضافي. أما التنقية الآلية فتتم باستخدام مجموعة RNeasy 96 Universal Tissue 8000 Kit على نظام BioRobot Universal System. يمكن تثبيت عينات الأنسجة بسهولة باستخدام كاشف Allprotect Tissue Reagent، وتفتيتها بكفاءة باستخدام جهاز TissueLyser II. كما يمكن تثبيت الأنسجة غير الدهنية باستخدام كاشف RNAprotect Tissue Reagent.

أداء

نسيج الفأر/الجرذ (10 ملغ): كمية الحمض النووي الريبي الكلي ((ميكروغرام)
النسيج الدهني: 0.5–2.5
الدماغ: 5-20
القلب: 5-25
الأمعاء: 10-60
الكلى: 5-40
الكبد: 15-80
الرئة: 5-15
العضلات: 5-35
الجلد: 2-5
الطحال: 15-100

النسيج: كمية الحمض النووي الريبي* (ميكروغرام لكل 10 ملغ من النسيج)
الكلى: 5-40
الكبد: 15-80
الرئة: 5-15
القلب: 5-25
العضلات: 5-35
الدماغ: 5-20
النسيج الدهني: 0.5–2.5
الطحال: 15-100
الأمعاء: 10-60
الجلد: 2-5

تتيح تقنية RNeasy Plus Universal الحصول على كميات كبيرة من الحمض النووي الريبوزي (RNA) قابلة للتكرار من أي نوع من الأنسجة، بما في ذلك الأنسجة الدهنية والأنسجة التي يصعب تحليلها (انظر الجدول "الكميات النموذجية من الحمض النووي الريبوزي الكلي باستخدام مجموعة RNeasy Plus Universal Mini Kit"). قد تختلف الكميات الناتجة تبعًا لعوامل مثل نوع الكائن الحي ومرحلة نموه، وخاصةً مع الأنسجة الدهنية.

أظهر تحليل الحمض النووي الريبوزي (RNA) المنقى بتقنية RT-PCR في الوقت الحقيقي، وعلى نظام QIAxcel، جودة عالية للحمض النووي الريبوزي مع سلامة جيدة (انظر الشكل "حمض نووي ريبوزي عالي الجودة"). تعمل تقنيات gDNA Eliminator Solution وRNeasy على إزالة معظم تلوث الحمض النووي الجينومي بكفاءة دون الحاجة إلى معالجة DNase (انظر الشكل "إزالة فعالة للحمض النووي الجينومي").

بالمقارنة مع إجراءات غشاء السيليكا القياسية، يوفر نظام RNeasy 96 عوائد أعلى من الحمض النووي الريبي الكلي لجميع أنواع الأنسجة (انظر الجدول "عوائد الحمض النووي الريبي الكلي النموذجية باستخدام مجموعة RNeasy 96 العالمية للأنسجة").

كميات نموذجية من الحمض النووي الريبي الكلي باستخدام مجموعة RNeasy 96 Universal Tissue Kit

يمكن استخلاص الحمض النووي الريبوزي عالي الجودة من الأنسجة المحفوظة إما بالتجميد أو بالتثبيت باستخدام RNAprotect في درجة حرارة الغرفة (انظر الشكل "حمض نووي ريبوزي كلي عالي الجودة من أنسجة كبد وعضلات الفئران"). يُعد الحمض النووي الريبوزي السليم المُستخلص من الأنسجة الليفية والدهنية صعبة التحلل مناسبًا للتطبيقات اللاحقة (انظر الشكلين "حمض نووي ريبوزي عالي الجودة من أنسجة الجلد/الدهون/الكبد/الأمعاء" و"التحليل الفوري للحمض النووي الريبوزي عالي الجودة من دماغ الفئران").

مبدأ

تتيح تقنية RNeasy Plus Universal Mini تنقية الحمض النووي الريبوزي (RNA) من أي نوع من الأنسجة، بما في ذلك الأنسجة الدهنية أو صعبة التحلل. تجمع مجموعة RNeasy Plus Universal Mini بين تحلل العينة باستخدام الفينول/الجوانيدين وتنقية الحمض النووي الريبوزي الكلي باستخدام غشاء السيليكا. يُعد كاشف التحلل QIAzol، المضمن في المجموعة، محلولًا أحادي الطور من الفينول وثيوسيانات الجوانيدين، مصممًا لتسهيل تحلل جميع أنواع الأنسجة وتثبيط إنزيمات RNase. يُمكّن التحلل عالي الكفاءة والإزالة اللاحقة للملوثات عن طريق استخلاص الطور العضوي من استخدام كميات أكبر من الأنسجة مع أعمدة RNeasy الدوارة. يزيل محلول gDNA Eliminator تلوث الحمض النووي الجينومي بفعالية ويُحسّن بشكل كبير فصل الحمض النووي في الطور البيني.

تتيح تقنية RNeasy 96 Universal Tissue تنقية الحمض النووي الريبوزي (RNA) بكفاءة عالية من أي عينة نسيج حيواني أو بشري. وبالمقارنة مع طرق التنقية التقليدية باستخدام غشاء السيليكا، توفر مجموعة RNeasy 96 Universal Tissue Kit كميات أكبر من الحمض النووي الريبوزي الكلي لجميع أنواع الأنسجة. تعمل تقنية RNeasy على إثراء الحمض النووي الريبوزي الذي يزيد طوله عن 200 قاعدة، مما يوفر كمية من الحمض النووي الريبوزي الكلي لا تشمل الحمض النووي الريبوزي الريبوسومي 5.8S، والحمض النووي الريبوزي الناقل (tRNA)، وأنواع الحمض النووي الريبوزي الأخرى ذات الوزن الجزيئي المنخفض، والتي تشكل ما بين 15 و20% من إجمالي الحمض النووي الريبوزي الخلوي.

إجراء

يُعدّ إجراء RNeasy Plus Universal سهل التطبيق، وهو أسرع وأكثر كفاءة من استخدام الفينول/الكلوروفورم لاستخلاص الحمض النووي الريبوزي الكلي مع إجراء تنقية لاحق، كما أنه يُنتج حمضًا نوويًا ريبوزيًا نقيًا وعالي الجودة (انظر مخطط "إجراء RNeasy Plus Universal Mini"). يتم تنقية الحمض النووي الريبوزي الكلي من أنسجة يصل وزنها إلى 50 ملغ باستخدام مجموعة RNeasy Plus Universal Mini.

تُجانس عينات الأنسجة في محلول QIAzol Lysis باستخدام جهاز TissueRuptor II أو TissueLyser LT أو TissueLyser II. بعد إضافة محلول إزالة الحمض النووي الجينومي والكلوروفورم، يُفصل المُجانس إلى طورين: مائي وعضوي، عن طريق الطرد المركزي. يُجمع الطور المائي العلوي المحتوي على الحمض النووي الريبوزي (RNA)، ويُخلط مع الإيثانول، ثم يُنقى الحمض النووي الريبوزي باستخدام أعمدة RNeasy الدوارة. يرتبط الحمض النووي الريبوزي الكلي بغشاء العمود الدوار، ويُغسل الفينول والملوثات الأخرى بكفاءة. يُستخلص الحمض النووي الريبوزي عالي الجودة في ماء خالٍ من إنزيم RNase.

تُتيح هذه الطريقة إثراء الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) نظرًا لاستبعاد معظم أنواع الحمض النووي الريبوزي التي يقل طولها عن 200 نيوكليوتيد (مثل الحمض النووي الريبوزي الريبوسومي rRNA والحمض النووي الريبوزي الناقل tRNA). ويمكن تعديل طريقة RNeasy Plus Universal لتنقية الحمض النووي الريبوزي الكلي الذي يحتوي على أنواع صغيرة من الحمض النووي الريبوزي، مثل الحمض النووي الريبوزي الميكروي miRNA، من الخلايا المستنبتة.

يدمج إجراء RNeasy 96 Universal Tissue المُحسَّن معالجة TissueLyser / QIAzol مع تنقية RNeasy 96 في بروتوكول سهل الاتباع (انظر مخطط "إجراء RNeasy 96 Universal Tissue"). يوفر التفتيت الفعال عالي الإنتاجية باستخدام TissueLyser II تفتيتًا وتجانسًا متوازيين، مع تحليل ما يصل إلى 192 عينة في كاشف QIAzol Lysis Reagent. تُنفَّذ خطوات البروتوكول يدويًا باستخدام نظام الطرد المركزي QIAGEN 96-Well-Plate، مع إمكانية استخدام مشعب التفريغ QIAvac 96.

التطبيقات

يُعدّ الحمض النووي الريبوزي (RNA) المُنقّى باستخدام مجموعات RNeasy Plus Universal Kits مثاليًا للتطبيقات اللاحقة التي تتأثر بكميات ضئيلة من تلوث الحمض النووي (DNA)، مثل تسلسل الحمض النووي الريبوزي (RNA-seq) والتفاعل التسلسلي الكمي للبوليميراز العكسي في الوقت الحقيقي (RT-PCR). كما يمكن استخدام الحمض النووي الريبوزي المُنقّى في تطبيقات أخرى.

ينتج عن الجمع بين تقنيتي QIAzol وRNeasy حمض نووي ريبوزي (RNA) عالي النقاء خالٍ من آثار الفينول. يُعدّ الحمض النووي الريبوزي (RNA) المُنقّى باستخدام مجموعة RNeasy 96 Universal Tissue Kit مناسبًا لجميع التطبيقات اللاحقة، بما في ذلك تسلسل الحمض النووي الريبوزي (RNA-seq)، والتفاعل التسلسلي للبوليميراز العكسي الكمي (RT-PCR)، وتحليل المصفوفات.