شركة كياجين، 766134، مجموعة PAXgene Tissue RNA/miRNA (50) icon_0368_ls_gen_eco_friendly-s

لتحضير 50 ​​عينة من الحمض النووي الريبوزي (RNA): أعمدة PAXgene RNA MinElute الدوارة، وأعمدة PAXgene Shredder الدوارة، وأنابيب المعالجة، وأنابيب الطرد المركزي الدقيقة، والحمض النووي الريبوزي الحامل، وإنزيم DNase الخالي من RNase، والمحاليل المنظمة الخالية من RNase؛ لاستخدامها مع حاويات PAXgene للأنسجة.

سمات

- التثبيت والتثبيت والتنقية المتكاملة
- تنقية فعالة للـ miRNA والـ RNA الكلي
- جزيئات miRNA عالية الجودة من الأنسجة
- الحفاظ على مورفولوجيا الأنسجة

تفاصيل المنتج

يمكن تضمين عينات الأنسجة المثبتة والمخزنة في حاويات PAXgene Tissue Containers في البارافين واستخدامها في الدراسات المرضية، بالإضافة إلى تنقية الحمض النووي الريبوزي الميكروي (miRNA) والحمض النووي الريبوزي (RNA) والحمض النووي (DNA) لاحقًا. توفر مجموعة PAXgene Tissue miRNA Kit تنقية الحمض النووي الريبوزي الكلي، بما في ذلك الحمض النووي الريبوزي المكون من حوالي 18 نيوكليوتيدًا، من الأنسجة المثبتة والمُستقرة في حاويات PAXgene Tissue Containers. تتم عملية التنقية باستخدام تقنية تنقية الحمض النووي الريبوزي القائمة على السيليكا في عمود طرد مركزي. عند استخدامها مع الحاويات، توفر المجموعة حلاً تحليليًا متكاملاً لما قبل التحليل، بدءًا من جمع العينات وتثبيتها واستقرارها، وصولاً إلى تنقية الحمض النووي الريبوزي الميكروي والحمض النووي الريبوزي الكلي عالي الجودة للتحليل الجزيئي.

أداء

يوفر كل من الحاوية والمجموعة معًا حلاً كاملاً لما قبل التحليل لجمع الأنسجة وتثبيتها واستقرارها، ولتنقية الحمض النووي الريبي عالي الجودة، بما في ذلك الحمض النووي الريبي الميكروي، للتحليل الجزيئي (انظر الشكل "التنقية الفعالة للحمض النووي الريبي الميكروي من الأنسجة المثبتة المخزنة في حاويات أنسجة PAXgene").

يتميز الحمض النووي الريبوزي الكلي المستخلص باستخدام مجموعة PAXgene Tissue miRNA Kit بنقائه العالي. يتم تقليل تلوث الحمض النووي الجينومي إلى أدنى حد، ويكون الحمض النووي الريبوزي المنقى جاهزًا للاستخدام في التطبيقات اللاحقة دون أي تثبيط ملحوظ لتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). يتم تنقية جميع جزيئات الحمض النووي الريبوزي التي يزيد طولها عن 18 نيوكليوتيدًا.

مبدأ

تُعدّ طرق تثبيت الأنسجة الحالية المستخدمة في علم الأنسجة التقليدي محدودة الفائدة في التحليل الجزيئي. تعمل المثبتات التي تحتوي على الفورمالديهايد على ربط الجزيئات الحيوية وتعديل الأحماض النووية والبروتينات. أثناء تثبيت الأنسجة وتخزينها ومعالجتها، تؤدي هذه الروابط إلى تحلل الأحماض النووية. ولأن هذه الروابط لا يمكن إزالتها تمامًا، فإن التعديلات الكيميائية الناتجة قد تُعيق التطبيقات الحساسة اللاحقة، مثل تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR) أو تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR). ولتمكين إجراء كلٍ من الاختبارات الجزيئية واختبارات علم الأمراض التقليدية على العينة نفسها، يلزم وجود طريقة لتثبيت المحتوى الجزيئي والحفاظ على الشكل المورفولوجي.

طورت شركة PreAnalytiX نظام PAXgene Tissue System لتلبية هذه الاحتياجات. يتألف النظام من جهاز لجمع الأنسجة (حاوية PAXgene Tissue Container لجمع عينات الأنسجة البشرية وتثبيتها وتخزينها ونقلها) ومجموعات لتنقية الحمض النووي الريبوزي الميكروي (miRNA) أو الحمض النووي الريبوزي الكلي (RNA) أو الحمض النووي (DNA). توفر حاويات PAXgene Tissue Container تثبيتًا للأنسجة لدراسات علم الأنسجة المرضية، وتتيح تنقية الأحماض النووية عالية الجودة من نفس العينة للتحليل الجزيئي. تحافظ طريقة التثبيت والترميم على مورفولوجيا الأنسجة وسلامة الأحماض النووية دون حدوث التشابك والتلف المدمر الذي يحدث في الأنسجة المثبتة بالفورمالين.

إجراء

حاويات PAXgene للأنسجة عبارة عن حاويات ثنائية الحجرات مملوءة مسبقًا بمادتين كيميائيتين. يعمل محلول PAXgene Tissue Fix على اختراق الأنسجة وتثبيتها بسرعة. بعد التثبيت، تُزال الأنسجة من محلول PAXgene Tissue Fix وتُنقل إلى محلول PAXgene Tissue Stabilizer في الحجرة الثانية من الحاوية نفسها. عند تخزين الأنسجة في محلول PAXgene Tissue Stabilizer، تبقى الأحماض النووية وبنية عينة الأنسجة مستقرة لمدة تتراوح بين 3 و7 أيام في درجة حرارة الغرفة، أو لمدة تصل إلى 8 أسابيع عند درجة حرارة تتراوح بين 2 و8 درجات مئوية، وذلك حسب نوع النسيج. كما يُمكن تخزينها عند درجة حرارة تتراوح بين -15 و-30 درجة مئوية لمدة لا تقل عن 26 شهرًا دون أي تأثير سلبي على بنية الأنسجة أو سلامة الأحماض النووية.

يمكن تضمين العينات المُثبَّتة في البارافين لإجراء الدراسات النسيجية. ويمكن استخلاص الأحماض النووية من عينات PAXgene المثبتة والمضمنة في البارافين (PFPE) إما قبل أو بعد تضمينها في البارافين.

توفر مجموعة PAXgene Tissue miRNA ثلاثة بروتوكولات لتنقية الحمض النووي الريبوزي الكلي من الأنسجة المثبتة والمُعتنى بها في حاويات PAXgene Tissue، بما في ذلك جزيئات الحمض النووي الريبوزي التي يقل حجمها عن 200 نيوكليوتيد، مثل 5.8S rRNA و5S rRNA وtRNA وmiRNA. تضمن ظروف الربط والغسل المُحسّنة تنقية جزيئات الحمض النووي الريبوزي التي يصل حجمها إلى 18 نيوكليوتيد. كشرط أساسي، يجب تثبيت الأنسجة وتعقيمها في حاويات PAXgene Tissue.

يتم تفتيت عينة الأنسجة وتجانسها في محلول الربط، Buffer TM1. بعد عملية طرد مركزي لإزالة بقايا الخلايا، يُضاف الإيثانول إلى المستخلص لتوفير ظروف ربط مناسبة لجميع جزيئات الحمض النووي الريبوزي (RNA) التي يبلغ طولها 18 نيوكليوتيدًا أو أكثر. ثم تُوضع العينة على عمود PAXgene RNA MinElute الدوار، حيث يرتبط الحمض النووي الريبوزي الكلي بالغشاء وتُغسل الملوثات بكفاءة. بين خطوتي الغسل الأولى والثانية، يُعالج الغشاء بإنزيم DNase I لإزالة آثار الحمض النووي المرتبط. بعد خطوات الغسل، يُستخلص الحمض النووي الريبوزي، بما في ذلك الحمض النووي الريبوزي الميكروي (miRNA)، في محلول استخلاص منخفض الملوحة ويُسخّن حتى يصبح غير متجانس (انظر الشكل "إجراء PAXgene Tissue miRNA").

تم تحديد مواصفات ظروف التثبيت والتخزين في PAXgene Tissue Fix و PAXgene Tissue Stabilizer باستخدام أنسجة حيوانية.

التطبيقات

- تحليل نورثرن بلوت
- تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR) وتفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي الكمي في الوقت الحقيقي
- تحليل المصفوفات الدقيقة

إن جزيئات miRNA النقية والحمض النووي الريبي الكلي جاهزة للاستخدام في مجموعة واسعة من التطبيقات اللاحقة، بما في ذلك: