شركة كياجين، 767134، مجموعة PAXgene لتحليل الحمض النووي من الأنسجة (50)

لتحضير 50 ​​عينة من الحمض النووي: أعمدة PAXgene DNA Mini Spin، وأنابيب المعالجة، وأنابيب الطرد المركزي الدقيقة، وحمض RNA الحامل، والمحاليل المنظمة؛ لاستخدامها مع حاويات PAXgene للأنسجة

سمات

- التثبيت والتثبيت والتنقية المتكاملة
- حمض نووي عالي الجودة من الأنسجة
- الحفاظ على مورفولوجيا الأنسجة
- التنقية الآلية على جهاز QIAcube

تفاصيل المنتج

يمكن تضمين عينات الأنسجة المثبتة والمخزنة في حاويات PAXgene Tissue Containers في البارافين واستخدامها في الدراسات المرضية، بالإضافة إلى تنقية الحمض النووي DNA، والحمض النووي الريبوزي RNA، و/أو الحمض النووي الريبوزي الميكروي miRNA لاحقًا. توفر مجموعة PAXgene Tissue DNA Kit تنقية الحمض النووي DNA من الأنسجة المثبتة والمستقرة في حاويات PAXgene Tissue Containers. تتم عملية التنقية باستخدام تقنية تنقية الحمض النووي DNA القائمة على السيليكا في عمود طرد مركزي. عند استخدامها مع الحاويات، توفر المجموعة حلاً تحليليًا أوليًا متكاملاً لجمع العينات وتثبيتها واستقرارها وصولاً إلى تنقية الحمض النووي DNA عالي الجودة للتحليل الجزيئي. يمكن أتمتة هذه الإجراءات بالكامل على جهاز QIAcube Connect.

أداء

يتميز الحمض النووي الكلي المستخلص باستخدام مجموعة PAXgene Tissue DNA Kit بنقائه العالي. تبلغ نسبة امتصاصه عند 260 نانومتر إلى امتصاصه عند 280 نانومتر 1.7-1.9، وتُظهر مسوحات الامتصاص ذروة متناظرة عند 260 نانومتر، مما يؤكد نقاء الحمض النووي الجينومي. يتم تقليل التلوث إلى أدنى حد، ويكون الحمض النووي المنقى جاهزًا للاستخدام في التطبيقات اللاحقة دون أي تثبيط ملحوظ لتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). يوفر كل من الحاوية والمجموعة حلاً تحليليًا متكاملاً لجمع الأنسجة وتثبيتها واستقرارها، وتنقية الحمض النووي عالي الجودة للتحليل الجزيئي (انظر الشكل "حمض نووي عالي الجودة من أنواع أنسجة مختلفة مثبت ومستقر في حاويات PAXgene Tissue").

مبدأ

تُعدّ طرق تثبيت الأنسجة الحالية المستخدمة في علم الأنسجة التقليدي محدودة الفائدة في التحليل الجزيئي. تعمل المثبتات التي تحتوي على الفورمالديهايد على ربط الجزيئات الحيوية وتعديل الأحماض النووية والبروتينات. أثناء تثبيت الأنسجة وتخزينها ومعالجتها، تؤدي هذه الروابط إلى تحلل الأحماض النووية. ولأن هذه الروابط لا يمكن إزالتها تمامًا، فإن التعديلات الكيميائية الناتجة قد تُعيق التطبيقات الحساسة اللاحقة، مثل تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR) أو تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR). ولتمكين إجراء كلٍ من الاختبارات الجزيئية واختبارات علم الأمراض التقليدية على العينة نفسها، يلزم وجود طريقة لتثبيت المحتوى الجزيئي والحفاظ على الشكل المورفولوجي.

طورت شركة PreAnalytiX نظام PAXgene Tissue System لتلبية هذه الاحتياجات. يتألف النظام من جهاز لجمع الأنسجة (حاوية PAXgene Tissue Container لجمع عينات الأنسجة البشرية وتثبيتها وتخزينها ونقلها) ومجموعات لتنقية الحمض النووي DNA أو الحمض النووي الريبوزي الكلي RNA أو الحمض النووي الريبوزي الميكروي miRNA. توفر حاويات PAXgene Tissue Container تثبيتًا للأنسجة لدراسات علم الأنسجة المرضية، وتتيح تنقية الأحماض النووية عالية الجودة من نفس العينة للتحليل الجزيئي. تحافظ طريقة التثبيت والترميم على مورفولوجيا الأنسجة وسلامة الأحماض النووية دون حدوث التشابك والتلف المدمر الذي يحدث في الأنسجة المثبتة بالفورمالين.

لعزل الحمض النووي الجينومي، يتطلب النظام استخدام حاويات PAXgene Tissue لجمع الأنسجة وتثبيتها، يلي ذلك عزل الحمض النووي وتنقيته باستخدام مجموعة PAXgene Tissue DNA Kit.

إجراء

حاويات PAXgene للأنسجة عبارة عن حاويات ثنائية الحجرات مملوءة مسبقًا بمادتين كيميائيتين. يعمل محلول PAXgene Tissue Fix على اختراق الأنسجة وتثبيتها بسرعة. بعد التثبيت، تُزال الأنسجة من محلول PAXgene Tissue Fix وتُنقل إلى محلول PAXgene Tissue Stabilizer في الحجرة الثانية من الحاوية نفسها. عند تخزين الأنسجة في محلول PAXgene Tissue Stabilizer، تبقى الأحماض النووية وبنية عينة الأنسجة مستقرة لمدة تتراوح بين 3 و7 أيام في درجة حرارة الغرفة، أو لمدة تصل إلى 8 أسابيع عند درجة حرارة تتراوح بين 2 و8 درجات مئوية، وذلك حسب نوع النسيج. كما يُمكن تخزينها عند درجة حرارة تتراوح بين -15 و-30 درجة مئوية لمدة لا تقل عن 26 شهرًا دون أي تأثير سلبي على بنية الأنسجة أو سلامة الأحماض النووية.

يمكن تضمين العينات المُثبَّتة في البارافين لإجراء الدراسات النسيجية. ويمكن استخلاص الأحماض النووية من عينات PAXgene المثبتة والمضمنة في البارافين (PFPE) إما قبل أو بعد تضمينها في البارافين.

توفر مجموعة PAXgene Tissue DNA Kit ثلاثة بروتوكولات لتنقية الحمض النووي الجينومي من الأنسجة المثبتة والمستقرة في حاويات PAXgene Tissue Containers.

تُجرى عملية تحلل عينة الأنسجة في محلول التحلل TD1، باستخدام إنزيم البروتينيز K. تُضبط ظروف التخزين المؤقت باستخدام محلول الربط TD2 والإيثانول لتوفير ظروف مثالية لربط الحمض النووي، ثم يُحمّل المستخلص على عمود PAXgene DNA الدوار. أثناء الطرد المركزي، يرتبط الحمض النووي بشكل انتقائي بغشاء السيليكا، بينما تمر الملوثات. تُزال الملوثات المتبقية ومثبطات الإنزيم في خطوتين فعالتين للغسل باستخدام محلولي الغسل TD3 وTD4، ثم يُستخلص الحمض النووي في محلول الاستخلاص منخفض الملوحة TD5، ليصبح جاهزًا للاستخدام (انظر الشكل "إجراء PAXgene Tissue DNA").

التطبيقات

- تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي
- التهجين الجنوبي
- دراسات علم الصيدلة الجينية
- اكتشاف تعدد أشكال النوكليوتيدات المفردة (SNP) وتحديد النمط الجيني لتعدد أشكال النوكليوتيدات المفردة