كياجين، 77023، مجموعة بدء استخدام سيروم/بلازما exoRNeasy (20)

لتنقية الحمض النووي الريبي الكلي المشتق من الإكسوسومات من المصل/البلازما؛ يتضمن 20 عمودًا من نوع exoEasy (10 أعمدة Maxi، 10 أعمدة Midi) و20 عمودًا من نوع RNeasy MinElute

سمات

- حمض نووي ريبوزي كلي عالي النقاء (بما في ذلك جزء الحمض النووي الريبوزي الصغير) من الإكسوسومات والحويصلات خارج الخلوية الأخرى (EVs)
- عزل الحمض النووي الريبوزي (RNA) حصرياً من الحويصلات الخارجية، باستثناء الحمض النووي الريبوزي من المركبات البروتينية غير الحويصلية.
- يوفر الإجراء المريح على العمود إمكانية الوصول إلى الحمض النووي الريبي في غضون ساعة واحدة فقط
- توفر مجموعة ماكسي حساسية عالية تسمح بإدخال أحجام كبيرة من العينات للكشف عن الحمض النووي الريبي منخفض الوفرة
- عزل من معظم السوائل الحيوية، بما في ذلك البول، والمصل، والبلازما، والسائل النخاعي الشوكي، ومادة مزارع الخلايا (يلزم إضافة محلول منظم XBP).

تفاصيل المنتج

تستخدم مجموعات exoRNeasy أعمدة الطرد المركزي ذات التقارب الغشائي لالتقاط الإكسوسومات وغيرها من الحويصلات خارج الخلوية بكفاءة من معظم السوائل الحيوية، بما في ذلك البول، والمصل، والبلازما، والسائل النخاعي الشوكي، ومستخلصات مزارع الخلايا. ثم تستخدم هذه المجموعات أعمدة الطرد المركزي RNeasy MinElute المثبتة فعاليتها لعزل الحمض النووي الريبوزي (RNA) من الحويصلات خارج الخلوية. يتيح تنسيق العمود المتوسط ​​معالجة أحجام عينات صغيرة بكفاءة (حتى 1 مل من المصل/البلازما أو 4 مل من البول)، بينما يسمح تنسيق العمود الكبير باستخدام أحجام عينات كبيرة، تصل إلى 4 مل من المصل/البلازما، أو 16 مل من البول، أو 32 مل من مستخلصات مزارع الخلايا، للكشف عن الحمض النووي الريبوزي منخفض الوفرة بدقة عالية. النتائج سريعة ومتسقة ومناسبة للغاية للتطبيقات الحساسة اللاحقة. يمكن أتمتة جزء عزل الحمض النووي الريبوزي من البروتوكول باستخدام مجموعات exoRNeasy على جهاز QIAcube Connect.

هل تحتاج إلى عرض سعر لمشروعك البحثي أو ترغب في مناقشة مشروعك مع فريقنا المتخصص؟ تواصل معنا فقط.

هل ترغب بتجربة هذا الحل لأول مرة؟ اطلب عرض سعر لمجموعة تجريبية.

أداء

لا يُعدّ بروتوكول تنقية الإكسوسومات والحويصلات خارج الخلوية الأخرى باستخدام exoRNeasy أسرع من الطرد المركزي الفائق فحسب، بل يُنتج أيضًا عينة أنقى. يُظهر الفحص المجهري الإلكتروني الماسح أنه على الرغم من أن كلتا التقنيتين تُنتجان حويصلات سليمة بالحجم المتوقع، إلا أن العينة المُحضّرة بالطرد المركزي الفائق تحتوي أيضًا على العديد من التراكيب الأصغر التي لا تتطابق مع الحجم أو الشكل المتوقع للحويصلات خارج الخلوية (انظر الشكل). يتم استخلاص الحويصلات السليمة من غشاء exoEasy بنقاء أعلى مقارنةً بالطرد المركزي الفائق.

علاوة على ذلك، فإن كل من exoRNeasy وطريقة الطرد المركزي الفائق التقليدية توفر أحجامًا وعوائد مماثلة من الحمض النووي الريبي الكبير والصغير، كما تم قياسها بواسطة تحليل Bioanalyzer (انظر الشكل exoRNeasy يعزل الحمض النووي الريبي الصغير والكبير من الحويصلات خارج الخلية في البلازما).

وأخيرًا، يقوم exoRNeasy بالتقاط جميع mRNAs الخالية من الخلايا في البلازما، بالإضافة إلى miRNAs المرتبطة بالحويصلات خارج الخلية، كما تم تأكيده من خلال تجارب RT-qPCR على RNAs المنقاة باستخدام بروتوكول exoRNeasy والتدفق من عمود exoEasy (انظر الشكل exoRNeasy يلتقط جميع mRNA و miRNAs الخاصة بالحويصلات في البلازما).

مبدأ

تُحسّن مجموعات exoRNeasy من طرق عزل الحويصلات الدقيقة التقليدية باستخدام الطرد المركزي الفائق، حيث تُنتج حويصلات خارج خلوية نقية في غضون 20 دقيقة فقط. تعتمد هذه المجموعات على تقنية طُوّرت بالتعاون مع شركة Exosome Diagnostics، وتستخدم عمودًا دوارًا ومحاليل مُخصصة لالتقاط الإكسوزومات من السوائل الحيوية المُرشّحة مُسبقًا؛ تصل الكمية إلى 32 مل باستخدام المجموعة الكبيرة، و4 مل باستخدام المجموعة المتوسطة. بعد ذلك، يُستخلص الحمض النووي الريبوزي الكلي (RNA) باستخدام تقنية QIAGEN miRNeasy. تستغرق العملية بأكملها، من العينة إلى الحمض النووي الريبوزي، ساعة واحدة فقط.

توفر مجموعة exoRNeasy Serum/Plasma Starter Kit أعمدة exoEasy متوسطة وكبيرة، مما يتيح التحليل بأحجام متنوعة من السوائل الحيوية المفلترة مسبقًا.

إجراء

يتضمن الإجراء الكامل لعزل الحمض النووي الريبي من الحويصلات خارج الخلية مرحلتين: تنقية الإكسوسوم وعزل الحمض النووي الريبي (انظر الشكل: سير عمل مجموعة exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit - من العينة إلى الحويصلات الدقيقة إلى الحمض النووي الريبي الكلي في ساعة واحدة فقط).

في مرحلة تنقية الإكسوسومات، تُخلط العينة المُرشّحة مسبقًا (مع استبعاد الجسيمات الأكبر من 0.8 ميكرومتر) مع محلول XBP وتُربط بعمود فصل غشائي بتقنية الطرد المركزي exoEasy. تُغسل الإكسوسومات المرتبطة بمحلول XWP، ثم تُحلل باستخدام QIAzol.

في خطوة استخلاص الحمض النووي الريبوزي (RNA)، يُضاف الكلوروفورم إلى ناتج استخلاص QIAzol، ثم تُستخلص المرحلة المائية وتُخلط مع الإيثانول. يرتبط الحمض النووي الريبوزي الكلي، بما في ذلك الحمض النووي الريبوزي الميكروي (miRNA)، بعمود الطرد المركزي، حيث يُغسل ثلاث مرات ويُستخلص.

التطبيقات

- علم النسخ
- تحليل بيانات الحمض النووي الريبوزي الميكروي (miRNA)
- تحليل الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA)
- تسلسل الحمض النووي الريبوزي

تعتبر مجموعات exoRNeasy مناسبة للغاية لعزل الحمض النووي الريبي الكلي، بما في ذلك mRNA و miRNA، من الحويصلات الدقيقة الموجودة في عينات السوائل الحيوية.

تشمل التطبيقات ما يلي: