شركة كياجين، 80234، مجموعة AllPrep DNA/RNA FFPE (50)

٥٠ عمود دوران RNeasy MinElute، ٥٠ عمود دوران QIAamp MinElute، أنابيب تجميع، كواشف خالية من RNase، ومحاليل منظمة

سمات

- أقصى إنتاجية بأقل استهلاك للعينات
- يطلق الحمض النووي DNA/RNA دون المساس بسلامته
- يفصل الحمض النووي الريبي (RNA) والحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (DNA) بشكل فعال
- تحليل شامل للحمض النووي DNA والحمض النووي الريبي RNA لنفس عينة FFPE

تفاصيل المنتج

لإجراء مقارنة موثوقة بين بيانات الجينوم والترانسكريبتوم، يُعدّ تنقية الحمض النووي DNA والحمض النووي الريبوزي RNA من العينة نفسها أمرًا بالغ الأهمية. تستخدم مجموعة AllPrep DNA/RNA FFPE طريقة إذابة حاصلة على براءة اختراع لتنقية الحمض النووي DNA والحمض النووي الريبوزي RNA من مقاطع الأنسجة المثبتة بالفورمالين والمضمنة في البارافين (FFPE). تُعدّ المواد المُنقّاة مناسبة للاستخدام في تطبيقات مثل تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (PCR) وتقنية التسلسل الناري (Pyrosequencing). يمكن أتمتة المجموعة باستخدام جهاز QIAcube Connect.

مبدأ

صُممت مجموعة AllPrep DNA/RNA FFPE خصيصًا لتنقية الحمض النووي الجينومي والحمض النووي الريبوزي الكلي من مقاطع الأنسجة المثبتة بالفورمالين والمضمنة في البارافين (FFPE) في آنٍ واحد. يتم الحصول على الحمض النووي والحمض النووي الريبوزي النقيين من العينة بأكملها، على عكس الطرق الأخرى التي تُقسم فيها العينة البيولوجية إلى قسمين قبل معالجتها بشكل منفصل. إن تقسيم العينة إلى نصفين لإجراءات تنقية منفصلة للحمض النووي والحمض النووي الريبوزي يؤدي إلى تنقية الحمض النووي والحمض النووي الريبوزي من مجموعات مختلفة من الخلايا، والتي قد تختلف في خصائصها. كما أن تنقية الحمض النووي والحمض النووي الريبوزي من نفس العينة تُساعد على الحد من الهدر، نظرًا لأن عينات FFPE ثمينة، وغالبًا ما يصعب الحصول عليها، وكميتها محدودة.

بسبب ظروف التثبيت والتضمين، عادةً ما تكون الأحماض النووية في عينات FFPE مجزأة بشدة، وغالبًا ما يكون وزنها الجزيئي أقل من تلك المستخلصة من العينات الطازجة أو المجمدة. يُعدّ قصر الحمض النووي المجزأ، وكونه أحادي السلسلة جزئيًا، عائقًا رئيسيًا أمام عزل الحمض النووي DNA والحمض النووي RNA من نفس عينة FFPE، مما يجعله أقرب شبهًا إلى الحمض النووي RNA منه إلى الحمض النووي DNA السليم. هذه الخاصية تجعل الفصل الفيزيائي بين الحمض النووي DNA والحمض النووي RNA صعبًا. تستخدم مجموعة AllPrep DNA/RNA FFPE Kit طريقة إذابة حاصلة على براءة اختراع (قيد الانتظار) لتحرير الحمض النووي DNA والحمض النووي RNA بشكل منفصل من عينة FFPE واحدة.

تخضع الأحماض النووية في عينات FFPE لتعديل كيميائي بواسطة الفورمالديهايد. ورغم أن تعديل الفورمالديهايد لا يمكن الكشف عنه في فحوصات مراقبة الجودة القياسية، مثل الترحيل الكهربائي الهلامي أو تحليل المختبر على رقاقة، إلا أنه يؤثر بشدة على التحليلات الإنزيمية. وقد صُممت مجموعة AllPrep DNA/RNA FFPE Kit خصيصًا لعكس أكبر قدر ممكن من تعديل الفورمالديهايد دون مزيد من التحلل للحمض النووي DNA والحمض النووي الريبي RNA.

التطبيقات

تم تحسين مجموعة AllPrep DNA/RNA FFPE لعكس أكبر قدر ممكن من تعديل الفورمالديهايد دون مزيد من تحلل الحمض النووي DNA والحمض النووي الريبي RNA؛ ومع ذلك، لا ينبغي استخدام الأحماض النووية المنقاة من عينات FFPE في التطبيقات اللاحقة التي تتطلب حمضًا نوويًا DNA عالي الوزن الجزيئي أو حمضًا نوويًا RNA كامل الطول. قد تتطلب بعض التطبيقات تعديلات للسماح باستخدام الأحماض النووية المجزأة (مثل تصميم مضخمات صغيرة لتفاعل البوليميراز المتسلسل PCR وتفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي RT-PCR). لتخليق الحمض النووي التكميلي cDNA، يجب استخدام بادئات خاصة بالجينات بدلًا من بادئات أوليجو-dT. إذا تعذر استخدام بادئات خاصة بالجينات، فيجب استخدام بادئات عشوائية.