مجموعة Qiagen، 80254، AllPrep PowerFecal Pro DNA/RNA

لتحضير 50 ​​عينة: 50 أنبوب PowerBead Pro، 50 عمود MB Spin، 50 عمود MB RNA Spin، 150 أنبوب تجميع (2 مل)، 100 أنبوب استخلاص (1.5 مل)، 100 أنبوب طرد مركزي دقيق (2 مل)، ماء خالٍ من RNase، كواشف ومحاليل منظمة.

سمات

- تقنية إزالة المثبطات المحسّنة من الجيل الثاني (IRT)
- يفصل الحمض النووي الريبي (RNA) والحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (DNA) من نفس العينة إلى نواتج استخلاص مختلفة في إجراء واحد
- تحسين عملية التحلل لزيادة إنتاج الحمض النووي DNA والحمض النووي الريبي RNA
- الحمض النووي الريبوزي (RNA) والحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (DNA) لتحليل الميتاجينوم والميتا ترانسكريبتوم

تفاصيل المنتج

باستخدام مجموعة AllPrep PowerFecal Pro DNA/RNA، يمكنك استخلاص الحمض النووي DNA والحمض النووي الريبوزي RNA من نفس عينة البراز أو الأمعاء، وذلك باتباع بروتوكول خاص بتقنية إزالة المثبطات المحسّنة (IRT). تُعدّ تقنية IRT من الجيل الثاني فعّالة مع العينات التي تحتوي على مواد مثبطة، مثل السكريات المتعددة ومركبات الهيم وأملاح الصفراء، والتي توجد عادةً في البراز. تتيح كيمياء التحلل المُحسّنة، بالإضافة إلى تقنية الخرز، الحصول على كميات كبيرة من الحمض النووي DNA والحمض النووي الريبوزي RNA عالي الجودة، والذي يمكن استخدامه مباشرةً في تطبيقات لاحقة، بما في ذلك تفاعل البوليميراز المتسلسل PCR، وتفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي RT-PCR، وتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي qPCR، وتقنيات التسلسل من الجيل التالي (NGS) (16S، والميتاجينوم، والميتا ترانسكريبتوم).

إذا كنت ترغب في معرفة المزيد عن حلولنا الكاملة للتثبيت والاستخلاص، تفضل بزيارة صفحة الويب الخاصة بمجموعة PowerProtect DNA/RNA.

هل ترغب بتجربة مجموعة AllPrep PowerFecal Pro DNA/RNA لأول مرة؟ اطلب عرض سعر لمجموعة تجريبية.

أداء

تتيح مجموعة AllPrep PowerFecal Pro DNA/RNA استخلاص كميات كبيرة من الأحماض النووية عالية النقاء من عينة براز واحدة (انظر الأشكال: كميات الحمض النووي الريبوزي - قياس QIAexpert، كميات الحمض النووي - قياس QIAexpert، جودة الحمض النووي الريبوزي - نسبة 260/280، جودة الحمض النووي الريبوزي - نسبة 260/230، جودة الحمض النووي - نسبة 260/280، جودة الحمض النووي - نسبة 260/230). تعمل المجموعة بكفاءة على تنقية الحمض النووي والحمض النووي الريبوزي من عينات البراز الغنية بمثبطات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) بفضل قدرتها على استنفاد المثبطات بفعالية (انظر الشكل: جودة الحمض النووي الريبوزي - تثبيط تفاعل البوليميراز المتسلسل). كما تتيح المجموعة الحصول على كميات كبيرة من الحمض النووي الريبوزي عالي الجودة (انظر الأشكال: قيمة RIN، نسبة 23S/16S). يُعدّ كلٌّ من الحمض النووي DNA والحمض النووي الريبوزي RNA مناسبين لتحليل التسلسل الجيني عالي الإنتاجية (NGS)، مثل تحليل وحدات التصنيف التشغيلي الميكروبي (OTU) أو الدراسات الميتاجينومية والميتا ترانسكريبتومية المقارنة (انظر الشكل: وحدات التصنيف التشغيلي). وقد تم إثبات وفرة الميكروبات الشاملة (انظر الشكلين: التنوع ألفا والتنوع بيتا).

مبدأ

صُممت مجموعة AllPrep PowerFecal Pro DNA/RNA لتنقية الحمض النووي DNA والحمض النووي الريبي RNA من عينات البراز في آنٍ واحد. يتم استخلاص الأحماض النووية من العينة بأكملها خلال نفس العملية (انظر الشكل: إجراء AllPrep PowerFecal Pro DNA/RNA). تجمع مجموعة AllPrep PowerFecal Pro DNA/RNA بين ثلاث تقنيات من QIAGEN لاستخلاص الحمض النووي DNA والحمض النووي الريبي RNA بكفاءة عالية: تقنية IRT في عملية التحلل الأولي، والربط الانتقائي للحمض النووي DNA ثنائي السلسلة، وتقنية RNeasy® لعزل الحمض النووي الريبي RNA مع الحد الأدنى من التنقية المشتركة للحمض النووي DNA.

للحفاظ على سلامة الأحماض النووية، نوصي بحفظ عينة البراز في أسرع وقت ممكن بعد جمعها. مع منتج PowerProtect DNA/RNA للتخزين والتثبيت، نوفر حلاً شاملاً (انظر الشكل: تثبيت العينة واستخلاص الحمض النووي DNA/RNA)، بدءًا من جمع العينة وحتى استخلاص الحمض النووي.

إجراء

ننصحك بالبدء بـ 50-200 ملغ من البراز. قم بتجانس كل عينة في أنبوب خلط خرز سعة 2 مل يحتوي على مزيج من خرز التحلل. يساهم الجمع بين الخلط الميكانيكي للخرز وكيمياء التحلل المُثبتة في تحلل مثالي للخلايا المضيفة والميكروبية. أزل المثبطات الشائعة الموجودة في عينات البراز، والتي تتداخل مع تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) والتطبيقات اللاحقة الأخرى باستخدام الجيل الثاني من تقنية IRT. مرر المستخلص عبر عمود MB Spin Column مع محلول ملحي عالي التركيز، للسماح بربط الحمض النووي الجينومي بشكل انتقائي وفعال. اغسل الحمض النووي واستخلصه. يصبح جاهزًا لتحليل PCR والتطبيقات اللاحقة الأخرى، بما في ذلك qPCR وNGS.

أضف الإيثانول إلى السائل الخارج من عمود MB Spin Column لتهيئة الظروف المناسبة لربط الحمض النووي الريبي (RNA). انقل العينة إلى عمود MB RNA Spin Column لربط الحمض النووي الريبي الكلي بالغشاء. اغسل الحمض النووي الريبي وأزله في ماء خالٍ من إنزيم RNase. أصبح الآن جاهزًا للتطبيقات اللاحقة، بما في ذلك تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR) وتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR) وتسلسل الجيل التالي (NGS).

تخزين العينات وتثبيتها وحفظها: يُعدّ الوقت الفاصل بين جمع العينة وحفظها من أهم العوامل المؤثرة على كمية وسلامة الأحماض النووية المستخلصة من الميكروبات في عينات البراز، إلى جانب حالة الجهاز الهضمي والنظام الغذائي للفرد. نوصي بمعالجة العينة بأسرع وقت ممكن بعد جمعها لتحسين جودة الأحماض النووية المستخلصة من البراز. يُمكّن كاشف PowerProtect DNA/RNA من تثبيت عينات البراز في درجة حرارة الغرفة.

التطبيقات

تتيح مجموعة AllPrep PowerFecal Pro DNA/RNA استخلاص الحمض النووي DNA والحمض النووي الريبوزي RNA بجودة عالية في آنٍ واحد. يمكن استخدام الحمض النووي DNA مباشرةً في تحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وتطبيقات أخرى لاحقة، بما في ذلك تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR) وتقنية التسلسل من الجيل التالي (NGS). أما الحمض النووي الريبوزي RNA، فيمكن استخدامه في تطبيقات لاحقة، مثل تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR)، وتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR)، وتفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي (digital PCR)، وتقنية التسلسل من الجيل التالي (مثل تسلسل الحمض النووي الريبوزي RNA-seq أو الميتا ترانسكريبتوم).