Qiagen، 870121، مجموعة اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل EGFR RGQ من ثيرا سكرين (24)

لـ ٢٤ تفاعلًا: اختبار تحكم واحد، ٧ اختبارات طفرات، تحكم إيجابي، ماء، بوليميراز الحمض النووي Taq

سمات

- معتمد من إدارة الغذاء والدواء الأمريكية للاستخدام التشخيصي في المختبر مع جيلوتريف أو إيريسّا
- نظام جاهز للاستخدام مع سير عمل بسيط
- يتميز بالدقة والحساسية بفضل تقنيات ARMS و Scorpions PCR

مبدأ

مجموعة اختبار ثيرا سكرين EGFR RGQ PCR هي اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي للكشف النوعي عن حذف الإكسون 19 وطفرات الاستبدال في الإكسون 21 (L858R) لجين مستقبل عامل نمو البشرة (EGFR) في الحمض النووي المستخلص من أنسجة ورم سرطان الرئة ذي الخلايا غير الصغيرة (NSCLC) المثبتة بالفورمالين والمضمنة في البارافين (FFPE). يُستخدم هذا الاختبار لاختيار مرضى سرطان الرئة ذي الخلايا غير الصغيرة الذين يُوصى لهم باستخدام مثبطات التيروزين كيناز لمستقبل عامل نمو البشرة (EGFR) مثل جيلوتريف (أفاتينيب) أو إيريسّا (جيفيتينيب). لم يتم إثبات سلامة وفعالية جيلوتريف (أفاتينيب) لدى المرضى الذين تحتوي أورامهم على إدخالات في الإكسون 20 وطفرات T790M. لم يتم إثبات سلامة وفعالية دواء إيريسّا (جيفيتينيب) لدى المرضى الذين تحمل أورامهم طفرات L861Q، وG719X، وS768I، وإدخالات في الإكسون 20، وT790M. ويمكن الكشف عن هذه الطفرات في جين مستقبل عامل نمو البشرة (EGFR) باستخدام مجموعة اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) الخاصة بـ Therascreen EGFR RGQ.

أسلحة

يتم تحقيق التضخيم النوعي للأليل أو الطفرة باستخدام نظام الطفرات المقاومة للتضخيم (ARMS). ترتبط بادئات ARMS بشكل تفضيلي مع الحمض النووي الحامل للطفرة، مما يسمح لإنزيم بوليميراز الحمض النووي Taq ببدء تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR)، مع التمييز الفعال بين التطابق وعدم التطابق عند الطرف 3' لبادئ PCR. يتم تضخيم التسلسلات المتحولة المحددة بشكل انتقائي، حتى في العينات التي لا تحمل غالبية تسلسلاتها الطفرة. عند تطابق البادئ تمامًا، يستمر التضخيم بكفاءة كاملة. أما عند عدم تطابق القاعدة 3'، فيحدث تضخيم خلفي منخفض المستوى فقط.

العقارب

يتم الكشف عن التضخيم باستخدام جزيئات سكوربيون. سكوربيون جزيئات ثنائية الوظيفة تحتوي على بادئ تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) مرتبط تساهميًا بمسبار. تعتمد هذه التقنية على طريقة تعتمد على التألق الضوئي للإشارة إلى وجود الطفرة. يتهجن بادئ سكوربيون مع تسلسل الحمض النووي (DNA) الموجود في المنطقة المجاورة للمنطقة المستهدفة. ثم يقوم إنزيم بوليميراز الحمض النووي Taq بتمديد البادئ، فتُنسخ المنطقة المستهدفة. المنطقة المنسوخة حديثًا مكملة لمنطقة المسبار في سكوربيون. بعد ارتفاع درجة الحرارة داخل جهاز تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي، يتفكك بادئ سكوربيون الممتد. وعندما يبرد المحلول، يتهجن مسبار سكوربيون ذاتيًا. ينفصل الفلوروفور عن المثبط، فتتولد إشارة تألق ضوئي.

إجراء

استخلص عينات الحمض النووي من أنسجة أورام سرطان الرئة ذي الخلايا غير الصغيرة (NSCLC) المحفوظة في البارافين والمثبتة بالفورمالين (FFPE) والمأخوذة من مرضى سرطان الرئة ذي الخلايا غير الصغيرة باستخدام مجموعة QIAamp DSP DNA FFPE Tissue Kit، والتي تم التحقق من صحتها للاستخدام مع مجموعة therascreen EGFR RGQ PCR Kit. تعتمد مجموعة therascreen EGFR RGQ PCR Kit على إجراء من خطوتين. الخطوة الأولى هي إجراء فحص تحكم لتقييم إجمالي الحمض النووي القابل للتضخيم في العينة. أما الخطوة الثانية فهي إجراء اختبارات الطفرات للكشف عن وجود أو عدم وجود طفرات في جين EGFR.

التطبيقات

الطفرة: إكسون
عدد عمليات الحذف: 19
2235_2249del15: 6223
2236_2250del15: 6225
2239_2253del15: 6254
2239_2256del18: 6255
2240_2254del15: 12369
2240_2257del18: 12370
2239_2248TTAAGAGAAG>C: 12382
2239_2251>C: 12383
2237_2255>T: 12384
2239_2258>CA: 12387
2238_2252>GCA: 12419
2238_2248>GC: 12422
2235_2252>AAT: 13551
L858R: 21
T790M**: 20
L861Q*: 21
G719A*: 18
S768I*: 20
عدد عمليات الإدخال: 20
2310_2311insGGT: 12378

تُمكّن مجموعة أدوات ثيرا سكرين EGFR RGQ PCR من الكشف عن 21 طفرة في جين EGFR البشري باستخدام الحمض النووي المستخلص من عينات أنسجة ورم سرطان الرئة ذي الخلايا غير الصغيرة (NSCLC) المُثبتة بالفورمالين والمُضمنة في البارافين (FFPE). تُستخدم هذه المجموعة فقط للتمييز بين الأورام التي لا تحمل طفرات في جين EGFR (النمط البري) والأورام التي تحمل طفرات في هذا الجين. تشمل طفرات EGFR التي تكشف عنها مجموعة أدوات ثيرا سكرين EGFR RGQ PCR ما يلي:

*لم يتم إثبات سلامة وفعالية IRESSA (gefitinib) لهذه الطفرات.

لم يتم إثبات سلامة وفعالية GILOTRIF (أفاتينيب) و IRESSA (جيفيتينيب) لهذه الطفرات.