Qiagen، 873001، مجموعة IDH1/2 RGQ PCR (20)

لـ 20 تفاعلًا: 9 خلطات بادئات ومجسات، عينة تحكم من النوع البري، عينة تحكم موجبة، مزيج رئيسي، ماء خالٍ من النيوكلياز

سمات

- الكشف الدقيق عن 7 طفرات في جين IDH1 و5 طفرات في جين IDH2 باستخدام تقنية تثبيت تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR clamping).
- تحديد حساس لثلاث طفرات باستخدام تقنية ARMS PCR
- اختبار معياري مع محاليل جاهزة للاستخدام
- سير عمل سهل مع جهاز Rotor-Gene Q

مبدأ

الجين: الطفرة
IDH1: Arg132His
Arg132Cys: 394C>T
Arg132Ser: 394C>A
Arg132Gly: 394 C>G
Arg132Leu: 395G>T
Arg132Val: 394_395 CG>GT
Arg100Gln: 299G>A
IDH2: Arg172Lys
Arg172Met: 515G>T
Arg172Trp: 514A>T
Arg172Ser: 516G>T
Arg172Gly: 514A>G

- 3 تفاعلات تضخيم إجمالية للكودونات 132 و100 من جين IDH1 وللكودون 172 من جين IDH2
- 3 تفاعلات تضخيم الطفرات للكودونات 132 و100 من جين IDH1 وللكودون 172 من جين IDH2
- 3 تفاعلات تضخيم خاصة بالطفرات IDH1 R132H و IDH1 R132C و IDH2 R172K

توفر مجموعة IDH1/2 RGQ PCR Kit الكواشف اللازمة لإجراء 9 تفاعلات تضخيم منفصلة للكشف عن 12 طفرة:

مزيج التفاعل الكلي

تستخدم مزيجات البادئات والمجسات الكلية (PPM-Total) البادئات والمجسات لتضخيم كل من التسلسلات المستهدفة المتحولة والنمط البري.

مزيج تفاعلات الكشف عن الطفرات

تجمع بادئات الكشف عن الطفرات ومخاليط المجسات بين البادئات والمجسات، لتضخيم كل من التسلسلات المستهدفة المتحولة والنمط البري، بالإضافة إلى قليل النوكليوتيدات، 3' محجوب بإضافة مجموعة فوسفات لمنع الاستطالة (تثبيت PCR)، وهو خاص بالتسلسل المستهدف من النمط البري.

عندما يحتوي قالب تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) على التسلسل الأصلي، فإنّ الأوليغونوكليوتيد الفوسفاتي في الطرف 3' سيتغلب على ارتباط بادئات تفاعل البوليميراز المتسلسل نظرًا لارتفاع ألفته. وبالتالي، لا يحدث تمدد أو يحدث تمدد ضعيف بواسطة بوليميراز الحمض النووي، ولا يُلاحظ تضخيم أو يُلاحظ تضخيم ضعيف.

عند وجود تسلسل متحور، فإن ارتباط بادئ تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) سيطغى على ارتباط قليل النوكليوتيدات الفوسفاتية 3' وسيستمر التضخيم.

مزيج تفاعلات تحديد الطفرات

يتم تحقيق التضخيم الخاص بالأليل بواسطة نظام الطفرات المقاومة للتضخيم (ARMS)، والذي يستغل قدرة بوليميراز الحمض النووي على التمييز بين التطابق وعدم التطابق في الطرف 3' من بادئ تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR).

عندما يكون بادئ تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) متطابقًا تمامًا، تتم عملية التضخيم بكفاءة كاملة. أما عندما يكون هناك عدم تطابق في القاعدة 3'، فلا يحدث سوى تضخيم خلفي منخفض المستوى.