Qiagen، 874601، مجموعة EGFR Plus RGQ PCR (24)

لـ ٢٤ تفاعلًا: مزيج T790M وL861Q، مزيج الإدخالات وG719X، مزيج L858R وC797S، مزيج الحذف وS768I، مزيج PCR الرئيسي، عنصر تحكم إيجابي EGFR، ماء خالٍ من RNase/DNase

سمات

- الكشف الدقيق والحساس عن 42 طفرة في جين EGFR في الإكسونات 18 و19 و20 و21
- الكشف المحدد عن المؤشرات الحيوية الرئيسية للمقاومة T790M و C797S
- مرونة تحليل عينات FFPE وعينات الخزعة السائلة في نفس العملية
- نظام جاهز للاستخدام مع سير عمل بسيط وقابل للأتمتة

تفاصيل المنتج

مجموعة EGFR Plus RGQ PCR هي اختبار مخصص للاستخدام البحثي فقط، يُستخدم للكشف النوعي عن الطفرات وتحديدها في الإكسونات 18 و19 و20 و21 من جين مستقبل عامل نمو البشرة (EGFR)، وذلك باستخدام الحمض النووي المستخلص من البلازما أو أنسجة الورم المثبتة بالفورمالين والمضمنة في البارافين (FFPE). كما تُستخدم المجموعة أيضًا للقياس شبه الكمي للطفرات الجسدية في الإكسونات 18 و20 و21 من جين EGFR باستخدام عينات الحمض النووي المستخلصة من البلازما. يعتمد الاختبار على تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي (PCR) باستخدام جهاز Rotor-Gene Q 5plex HRM.

مبدأ

توفر مجموعة EGFR Plus RGQ PCR Kit كواشف لتفاعلات تضخيم الحمض النووي في الوقت الحقيقي للكشف عن 42 طفرة في جين EGFR. تستخدم هذه الاختبارات تفاعلات خاصة بالطفرات تتضمن نظام ARMS (نظام الطفرات المقاومة للتضخيم) وتصميمات مشابك PCR للكشف عن الطفرات في الحمض النووي المستخلص من أنسجة الورم المثبتة بالفورمالين والمضمنة في البارافين (FFPE) وبلازما مرضى سرطان الرئة ذي الخلايا غير الصغيرة (NSCLC).

أثناء تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR)، إذا كان الهدف المراد دراسته موجودًا، فإن كلًا من البادئات الأمامية والخلفية ترتبط بالمسبار وتحيط به. يقوم نشاط الإكسونوكلياز 5'→3' لإنزيم بلمرة الحمض النووي بقطع المسبار بين الجين المُبلغ والجين المُثبط فقط في حال تهجين النيوكليوتيدات الثلاثة مع الهدف. بعد ذلك، تُفصل شظايا المسبار عن الهدف، وتستمر عملية بلمرة السلسلة. يُحجب الطرف 3' للمسبار لمنع استطالته أثناء تفاعل البلمرة المتسلسل (انظر مبدأ التفاعل). لا يُرصد ازدياد إشارة التألق إلا إذا كان تسلسل الهدف مُكملاً للبادئات والمسبار، وبالتالي يتم تضخيمه أثناء تفاعل البلمرة المتسلسل.

إجراء

تتألف مجموعة EGFR Plus RGQ PCR من أربعة اختبارات ثلاثية، يحتوي كل منها على جميع النيوكليوتيدات (البادئات، والمجسات، ومشبك النيوكليوتيدات، عند الاقتضاء) اللازمة لتضخيم طفرات EGFR المستهدفة والكشف عنها. يجب أولاً استخلاص الحمض النووي الجينومي (gDNA) يدويًا أو آليًا من أنسجة مثبتة بالفورمالين ومضمنة في البارافين (FFPE) أو من البلازما. عند البدء من أنسجة FFPE، يُجرى استخلاص الحمض النووي الجينومي يدويًا باستخدام مجموعة QIAamp DSP DNA FFPE Tissue Kit (رقم المنتج 60404). عند البدء من البلازما، يُجرى استخلاص الحمض النووي الخالي من الخلايا (cfDNA) باستخدام مجموعة QIAamp DSP Circulating Nucleic Acid Kit (رقم المنتج 61504). باستخدام جهاز QIAsymphony SP، يتم استخلاص الحمض النووي الجينومي (gDNA) آليًا من عينات الأنسجة المثبتة بالفورمالين والمضمنة في البارافين (FFPE) باستخدام مجموعة QIAsymphony DSP DNA Mini Kit (رقم المنتج 937236)، بينما يتم استخلاص الحمض النووي الخالي من الخلايا (cfDNA) آليًا من عينات البلازما باستخدام مجموعة QIAsymphony DSP Circulating DNA Kit (رقم المنتج 937556). بعد استخلاص الحمض النووي الجينومي، يتم قياس كمية الحمض النووي، ثم يُجرى تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) على جهاز Rotor-Gene Q. بعد انتهاء تفاعل البوليميراز المتسلسل، يتم إجراء التحليل وتحديد التعبير الجيني يدويًا.

التطبيقات

مجموعة EGFR Plus RGQ PCR هي اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل النوعي في الوقت الحقيقي على جهاز Rotor-Gene Q 5plex HRM، باستخدام تقنيات ARMS و clamp للكشف عن الطفرات وتحديدها (الإكسونات 18 و 19 و 20 و 21) والقياس شبه الكمي للطفرات الجسدية (الإكسونات 18 و 20 و 21) في جين EGFR.