Qiagen، 931306، مجموعة QIAsymphony Bisulfite LyseAll (192)

لـ 192 عينة. مجموعة EpiTect Fast LyseAll Lysis Kit: 4 × 25 مل من محلول EL، 4 × 0.8 مل من محلول FTB، 4 × 0.65 مل من بروتينيز K؛ مجموعة QIAsymphony Bisulfite Kit: 12 × 1.5 مل من محلول البيسلفيت، 4 × 1.9 مل من محلول DNA Protect Buffer، خرطوشتا كاشف، حاملا إنزيم، غطاءا ثقب، 20 مل من محلول ATE، 310 ميكروغرام من الحمض النووي الريبي الحامل، مجموعتا ختم قابلتان لإعادة الاستخدام
عرض المزيد

سمات

- تحويل البيسلفيت وتنقية الحمض النووي بشكل سريع ومبسط
- عزل الحمض النووي النقي المحول بالبيسلفيت مباشرة دون خطوات وسيطة
- ينتج حمض نووي عالي الجودة مُحوَّل بالبيسلفيت، مناسب لتطبيقات التسلسل الناري، أو تفاعل البوليميراز المتسلسل، أو التسلسل من الجيل التالي
- معدلات تحويل عالية للسيتوزين تتجاوز 99%

تفاصيل المنتج

توفر مجموعات QIAsymphony Bisulfite إجراءً سريعًا ومبسطًا لتحويل وتنقية الحمض النووي (DNA) بكفاءة عالية باستخدام البيسلفيت، وذلك من عينات مثبتة بالفورمالين ومضمنة في البارافين (FFPE)، أو عينات دم، أو خلايا، أو أنسجة. تُمكّن هذه المجموعات من تحويل السيتوزينات غير المُمَثْيَلة إلى يوراسيل بكفاءة عالية في غضون 30 دقيقة فقط، مع توفير مرونة فائقة في اختيار المادة الأولية. باستخدام جهاز QIAsymphony SP، يُمكن عزل حمض نووي جينومي عالي الجودة، مناسب للاستخدام المباشر في تطبيقات لاحقة، مثل التسلسل الناري (Pyrosequencing)، أو تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، أو تقنيات التسلسل من الجيل التالي (NGS)، أو لتخزينه لاستخدامه لاحقًا.

أداء

تحويل البيسلفيت بكفاءة عالية

يُمكن تحديد حالة مثيلة تسلسل الحمض النووي (DNA) على أفضل وجه باستخدام تحويل البيسلفيت. يؤدي معالجة الحمض النووي المستهدف بالبيسلفيت إلى تحويل بقايا السيتوزين غير المثيلة إلى يوراسيل، بينما تبقى بقايا السيتوزين المثيلة دون تغيير. لذلك، ينتج عن معالجة البيسلفيت تسلسلات حمض نووي مختلفة للحمض النووي المثيل وغير المثيل. تُعد معالجة الحمض النووي بالبيسلفيت الخطوة الأكثر أهمية في تحليل المثيلة، حيث تؤثر كفاءة التفاعل بشكل كبير على موثوقية التحليلات اللاحقة. تحتوي مجموعات QIAsymphony Bisulfite على محلول بيسلفيت مبتكر، يُتيح تحويل البيسلفيت فائق السرعة وعالي الكفاءة.

انخفاض تفتت الحمض النووي

تؤدي الظروف القاسية اللازمة لتحويل البيسلفيت بشكل كامل عادةً إلى تفتت كبير في الحمض النووي وفقدان العينة، مما ينتج عنه انخفاض في كمية الحمض النووي، وتفتت شديد فيه، وعدم ثبات معدلات التحويل. يمنع محلول حماية الحمض النووي الفريد من نوعه من QIAGEN تحلل الحمض النووي، مما ينتج عنه حمض نووي مُحوَّل بالكامل بأحجام شظايا أكبر بكثير.

نطاق واسع لقبول العينات وتطبيقها

على الرغم من استخدام بروتوكولات مختلفة لشرائح الأنسجة المثبتة بالفورمالين والمضمنة في البارافين (FFPE)، والدم الكامل، ومزارع الخلايا أو الأنسجة، فإن هذه البروتوكولات تحقق معدلات تحويل السيتوزين نفسها وتؤدي إلى استخلاص كميات متساوية من الحمض النووي بعد تنقية الحمض النووي المحول، بغض النظر عن كميات الحمض النووي الأولية. الحمض النووي المنقى جاهز للاستخدام في التطبيقات اللاحقة. الحمض النووي المُستخلص والمُحول بالبيسلفيت مناسب لجميع التقنيات المستخدمة حاليًا لتحليل مثيلة الحمض النووي، بما في ذلك تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، وتفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي (real-time PCR)، وتفاعل البوليميراز المتسلسل الخاص بالمثيلة (methylation-specific PCR)، وتسلسل البيسلفيت (المباشر والاستنساخ)، وتقنية COBRA، وتقنية التسلسل الناري (Pyrosequencing)، وتطبيقات التسلسل من الجيل التالي (NGS).

مبدأ

يُعدّ التحويل السريع والكامل للحمض النووي (DNA) باستخدام البيسلفيت ضروريًا لتحليل مثيلة الحمض النووي بدقة. تتضمن مجموعات QIAsymphony Bisulfite محلول بيسلفيت مبتكرًا يُتيح تحويلًا عالي الكفاءة في غضون 30 دقيقة فقط. كما تُسهّل بروتوكولات تحليل وتحويل العينات المُبسّطة تنقية الحمض النووي وتحويله باستخدام البيسلفيت بكفاءة، بينما تُقلّل تقنية DNA Protect الفريدة من تفتت الحمض النووي أثناء المعالجة بالبيسلفيت. تتكامل مجموعات QIAsymphony Bisulfite الثلاث معًا، لتُشكّل نظامًا متكاملًا من المحاليل لتحويل الحمض النووي مباشرةً باستخدام البيسلفيت من مجموعة واسعة من المواد الأولية.

تحويل سريع للبيسلفيت

توفر مجموعات QIAsymphony Bisulfite إجراءً سريعًا ومبسطًا لتحويل وتنقية الحمض النووي (DNA) بكفاءة عالية، سواءً كان مستخلصًا من الحمض النووي الجينومي، أو عينات الأنسجة المثبتة بالفورمالين والمضمنة في البارافين (FFPE)، أو الدم، أو الخلايا، أو الأنسجة. تحتوي هذه المجموعات على محلول بيسلفيت عالي التركيز، مما يقلل الوقت اللازم لتحويل بقايا السيتوزين غير الممثيلة إلى يوراسيل من عدة ساعات إلى 30 دقيقة فقط، بالإضافة إلى محاليل تحضيرية تغني عن عزل الحمض النووي قبل معالجته بالبيسلفيت. علاوة على ذلك، يوفر برنامج التدوير الحراري للبيسلفيت سلسلة مُحسَّنة من خطوات الحضانة اللازمة لتمسخ الحمض النووي حراريًا، ثم إضافة مجموعة السلفون وإزالة مجموعة الأمين من السيتوزين، مما يُتيح معدلات تحويل عالية للسيتوزين تتجاوز 99%. تتم إزالة مجموعة السلفون، وهي الخطوة الأخيرة في التحويل الكيميائي للسيتوزين، من خلال خطوة سهلة على الخرزات، مُضمنة في إجراء التنقية على جهاز QIAsymphony SP.

مخزن حماية الحمض النووي

يُعدّ التحويل السريع والكامل للحمض النووي (DNA) باستخدام البيسلفيت الخطوةَ الأهمّ لتحديد نمط المثيلة بدقة. ويتحقق ذلك بحضانة الحمض النووي في محاليل عالية التركيز من أملاح البيسلفيت عند درجة حرارة مرتفعة ودرجة حموضة منخفضة. غالبًا ما تؤدي هذه الظروف القاسية إلى تفتت الحمض النووي وفقدانه أثناء التنقية. تتطلب إجراءات البيسلفيت الشائعة كميات كبيرة من الحمض النووي المُدخل لتعويض تدهوره أثناء التحويل وفقدانه أثناء التنقية، مما يؤدي في كثير من الأحيان إلى انخفاض كمية الحمض النووي المُستخلص، وتفتته بشكل كبير، وعدم ثبات معدلات التحويل. مع مجموعات QIAsymphony Bisulfite، يُمنع تفتت الحمض النووي أثناء التحويل باستخدام محلول DNA Protect Buffer الفريد، المصمم خصيصًا لمنع التفتت الذي عادةً ما يصاحب معالجة الحمض النووي بالبيسلفيت عند درجات حرارة مرتفعة وقيم حموضة منخفضة. كما يوفر هذا المحلول فصلًا فعالًا لسلسلة الحمض النووي، مما ينتج عنه حمض نووي أحادي السلسلة ضروري لتحويل السيتوزين بشكل كامل. يحتوي محلول DNA Protect Buffer أيضًا على صبغة مؤشر حموضة ملائمة للتحكم في المزج، مما يسمح بتأكيد درجة الحموضة الصحيحة لتحويل السيتوزين.

إجراء QIAsymphony

تُسهّل مجموعة QIAsymphony Bisulfite Kit عملية تحضير العينات وعزلها بعد تحويلها بالبيسلفيت باستخدام جهاز QIAsymphony SP (انظر الشكل "مخطط مبدأ عمل QIAsymphony SP"). يوفر لك جهاز QIAsymphony SP الوقت من خلال معالجة ما بين 1 إلى 96 عينة - على دفعات من 24 عينة. تجمع تقنية QIAsymphony بين سرعة وكفاءة التنقية القائمة على السيليكا وسهولة استخدام الجسيمات المغناطيسية.

إزالة البارافين من عينات FFPE

تتمثل الخطوة الأولى في استخلاص الحمض النووي من عينات FFPE في إزالة البارافين، حيث يُذاب البارافين أولاً ثم يُزال، مما يُعرّض العينات للمعالجة اللاحقة بمحلول التحلل وإنزيم البروتينيز K. باستخدام مجموعة QIAsymphony Bisulfite FFPE، يتم تحسين إزالة البارافين والتحلل وفك الارتباط لشرائح FFPE باستخدام محلول إزالة البارافين، وهو تركيبة كيميائية مبتكرة تُسهّل إزالة البارافين بأقل قدر من التعامل. يُساهم محلول إزالة البارافين في ارتفاع معدلات استخلاص الحمض النووي، حيث يبقى على العينة أثناء عملية هضم البروتينيز K. وبفضل عدم الحاجة إلى ترسيب عينة FFPE أو إزالة السائل الطافي المحتوي على البارافين، يتم تجنب خطر فقدان العينة أثناء عملية إزالة البارافين.

إجراء

تُبسط عملية مجموعة QIAsymphony Bisulfite Kit تحضير العينات وعزلها بعد تحويلها باستخدام البيسلفيت بواسطة جهاز QIAsymphony SP (انظر الشكل "مخطط مبدأ عمل QIAsymphony SP"). تتضمن هذه العملية بضع خطوات بسيطة: تحضير الحمض النووي من العينة، وتحويل السيتوزينات غير المُمَثْيَلة بواسطة البيسلفيت (انظر الشكل "إعداد تفاعل البيسلفيت")، ونقل العينة إلى وحدة QIAsymphony SP، والربط التلقائي للحمض النووي أحادي السلسلة المُحَوَّل بالخرز المغناطيسي، والغسل، وإزالة مجموعة السلفون من الحمض النووي المرتبط بالخرز، وغسل الحمض النووي المرتبط بالخرز لإزالة عامل إزالة السلفون، واستخلاص الحمض النووي النقي المُحَوَّل من الخرز (انظر الشكل "التحويل التلقائي للبيسلفيت على جهاز QIAsymphony SP").

تختلف طريقة تحضير العينات باختلاف نوع العينة: شرائح الأنسجة المثبتة بالفورمالين والمضمنة في البارافين، والدم الكامل، ومزارع الخلايا، والأنسجة، بينما تبقى عملية تحويل الحمض النووي المستخلص باستخدام البيسلفيت واحدة لجميع أنواع العينات. تحقق جميع البروتوكولات معدلات تحويل السيتوزين نفسها، وتؤدي إلى استخلاص كميات متساوية من الحمض النووي بعد تنقيته، بغض النظر عن كمية الحمض النووي الأولية.

مجموعة بيسلفيت QIAsymphony

تتضمن مجموعة QIAsymphony Bisulfite Kit محاليل ومواد كيميائية مُصممة بعناية لتوفير تحويل فعال وسلس للحمض النووي الجينومي باستخدام البيسلفيت، بالإضافة إلى تنقية الحمض النووي المُحوّل. يُمكّن محلول البيسلفيت المبتكر من إتمام عملية التحويل في غضون 30 دقيقة فقط، بينما تتيح تقنية DNA Protect إنتاج حمض نووي مُحوّل بالكامل مع الحد الأدنى من التحلل. يمكن استخدام مجموعة QIAsymphony Bisulfite Kit لتحويل 1 نانوغرام إلى 2 ميكروغرام من الحمض النووي في حجم يصل إلى 20 ميكرولتر، أو 1 إلى 500 نانوغرام في حجم أقصى يبلغ 40 ميكرولتر.

مجموعة QIAsymphony Bisulfite FFPE

تُعالج الأنسجة المثبتة بالفورمالين والمضمنة في البارافين (FFPE) باستخدام مجموعة QIAsymphony Bisulfite FFPE Kit، التي تتكون من مجموعة EpiTect Fast FFPE Lysis Kit، التي تحتوي على محاليل متخصصة لإزالة البارافين وتحليل شرائح أنسجة FFPE بكفاءة، ومجموعة QIAsymphony Bisulfite Kit لتحويل الحمض النووي المستخلص بسرعة وفعالية باستخدام البيسلفيت. يتضمن البروتوكول خطوة مُحسّنة لتسهيل ارتباط الحمض النووي، ويمكن استخدامه مع شرائح مفردة من أنسجة FFPE (بسماكة 10 ميكرومتر). يتفاقم تفتت الحمض النووي، الذي يحدث حتمًا عند استخلاصه من أنسجة FFPE، بسبب الظروف القاسية للمعالجة اللاحقة بالبيسلفيت. تعمل تقنية DNA Protect الموثوقة من QIAGEN على تقليل التفتت أثناء تفاعل التحويل، مما ينتج عنه كميات أكبر من الحمض النووي المُحوّل بالبيسلفيت.

مجموعة QIAsymphony Bisulfite LyseAll

تُعالج عينات الدم الكامل أو الخلايا المستنبتة أو الأنسجة باستخدام مجموعة QIAsymphony Bisulfite LyseAll Kit، التي تتكون من مجموعة EpiTect Fast LyseAll Lysis Kit المزودة بمحلول تحلل مبتكر، ومجموعة QIAsymphony Bisulfite Kit لتحويل الحمض النووي المستخلص باستخدام البيسلفيت. يتضمن البروتوكول خطوة مُحسّنة لتسهيل ارتباط الحمض النووي، بالإضافة إلى محاليل تحلل مُصممة خصيصًا لتبسيط عملية استخلاص الحمض النووي من العينات. يمكن استخدام هذه المجموعة مع 0.5-20 ميكرولتر من الدم أو 10-10⁵ خلية (بكمية لا تقل عن 60 بيكوغرام من الحمض النووي).

التطبيقات

- تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR): نقطة النهاية، والوقت الحقيقي، والخاص بالمثيلة
- تسلسل البيسلفيت (المباشر والاستنساخ)
- NGS
- التسلسل الناري
- COBRA (تحليل التقييد بالبيسلفيت المدمج)

توفر مجموعات QIAsymphony Bisulfite تحويلًا سريعًا وفعالًا للحمض النووي باستخدام البيسلفيت من مواد أولية متنوعة، وهي مناسبة للغاية لجميع التقنيات المستخدمة حاليًا لتحليل مثيلة الحمض النووي، بما في ذلك: