Qiagen، 967152، RNeasy 96 BioRobot 8000 Kit (12)

لتحضير 12 عينة من الحمض النووي الريبوزي الكلي (96 عينة) باستخدام نظام BioRobot 8000 أو BioRobot Universal: 12 لوحة RNeasy 96، أنابيب دقيقة للاستخلاص، أغطية، حواجز S، كواشف خالية من إنزيم RNase، ومحاليل منظمة.

سمات

- إنتاجية عالية من الحمض النووي الريبي الكلي من الخلايا وجميع الأنسجة
- معالجة العينات بسرعة وسهولة
- حمض نووي ريبوزي نقي وعالي الجودة خالٍ من تلوث الفينول
- حمض نووي ريبوزي عالي الأداء لجميع التطبيقات اللاحقة

تفاصيل المنتج

تُمكّن مجموعات RNeasy 96 BioRobot من تنقية الحمض النووي الريبوزي الكلي (RNA) في أطباق 96 بئرًا لأجهزة BioRobot من عينات الخلايا المستنبتة وأي نسيج. يتم تحليل الأنسجة وتجانسها بكفاءة باستخدام كاشف QIAzol Lysis Reagent، بينما تُحلل الخلايا باستخدام محلول RLT. يُنقى الحمض النووي الريبوزي عالي الجودة من الأنسجة والخلايا باستخدام أطباق RNeasy 96 ذات غشاء السيليكا. تتم عملية التنقية الآلية باستخدام نظام BioRobot Universal System، الذي يُعالج ما يصل إلى 96 أو 192 عينة في كل دورة، متبوعًا بإعداد تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي الكمي (RT-PCR). يمكن تثبيت عينات الأنسجة بسهولة باستخدام كاشف Allprotect Tissue Reagent، وتفتيتها بكفاءة باستخدام جهاز TissueLyser II. كما يمكن تثبيت الأنسجة غير الدهنية باستخدام كاشف RNAprotect Tissue Reagent.

أداء

النسيج: كمية الحمض النووي الريبي* ((ميكروغرام لكل 10 ملغ من النسيج)
الكلى: 5-40
الكبد: 15-80
الرئة: 5-15
القلب: 5-25
العضلات: 5-35
الدماغ: 5-20
النسيج الدهني: 0.5–2.5
الطحال: 15-100
الأمعاء: 10-60
الجلد: 2-5

يوفر نظام RNeasy 96 تنقية سريعة وقابلة للتكرار للحمض النووي الريبوزي الكلي (RNA) في صيغة 96 بئرًا لأجهزة BioRobot، وذلك لتحليل التعبير الجيني عالي الإنتاجية. يُعدّ الحمض النووي الريبوزي الناتج مناسبًا للتطبيقات الحساسة، مثل تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (RT-PCR) وتحليل المصفوفات الدقيقة (انظر الشكل "حمض نووي ريبوزي عالي الجودة لتحليل دقيق لنسخة منخفضة النسخ"). تتراوح أحجام العينات من 10 إلى 5 × 10⁵ خلية (انظر الشكل "تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي للحمض النووي الريبوزي من 100 خلية فقط")، ويمكن تنقية حمض نووي ريبوزي عالي الجودة من أعداد كبيرة من العينات (انظر الشكل "عوائد قابلة للتكرار من حمض نووي ريبوزي عالي الجودة"). تكون الاختلافات الفردية منخفضة طوال عملية التنقية؛ ويمكن الوصول بسهولة إلى قيم عتبة دورة TaqMan® في نهاية العملية بمعامل تباين (CV) أقل من 3% باستخدام مجموعة QuantiTect Probe RT-PCR (انظر الشكل "قابلية تكرار تنقية الحمض النووي الريبوزي المؤتمتة بالكامل").

بالمقارنة مع إجراءات غشاء السيليكا القياسية، يوفر نظام RNeasy 96 عوائد أعلى من الحمض النووي الريبي الكلي لجميع أنواع الأنسجة (انظر الجدول "عوائد الحمض النووي الريبي الكلي النموذجية باستخدام مجموعة RNeasy 96 العالمية للأنسجة").

كميات نموذجية من الحمض النووي الريبي الكلي باستخدام مجموعة RNeasy 96 Universal Tissue Kit

يمكن استخلاص الحمض النووي الريبوزي عالي الجودة من الأنسجة المحفوظة إما بالتجميد أو بالتثبيت باستخدام RNAprotect في درجة حرارة الغرفة (انظر الشكل "حمض نووي ريبوزي كلي عالي الجودة من أنسجة كبد وعضلات الفئران"). يُعد الحمض النووي الريبوزي السليم المُستخلص من الأنسجة الليفية والدهنية صعبة التحلل مناسبًا للتطبيقات اللاحقة (انظر الشكلين "حمض نووي ريبوزي عالي الجودة من أنسجة الجلد/الدهون/الكبد/الأمعاء" و"التحليل الفوري للحمض النووي الريبوزي عالي الجودة من دماغ الفئران").

مبدأ

المواصفات: التفاصيل
التنسيق: صفائح RNeasy ذات 96 بئرًا مع أنابيب تجميع دقيقة سعة 1.2 مل
مصدر العينة: خلايا حيوانية أو بشرية
حجم العينة: 10-5 × 10⁵ خلية
سعة الارتباط: تصل إلى 100 ميكروغرام من الحمض النووي الريبي لكل بئر
الناتج* من 1 × 10⁵ خلية: هيلا: 1.6 ميكروغرام، إل إم إتش: 1.3 ميكروغرام، سي أو إس-7: 3.1 ميكروغرام، هوه7: 2.0 ميكروغرام، جركات: 1.4 ميكروغرام
حجم الإذابة: 45-140 ميكرولتر

توفر مجموعة RNeasy 96 BioRobot 8000 طريقةً موحدةً وسريعةً وموثوقةً لعزل الحمض النووي الريبوزي (RNA) عالي الجودة من عدد كبير من العينات (انظر جدول "مواصفات مجموعة RNeasy 96 BioRobot 8000"). يُعدّ الإجراء البسيط أساسيًا لسرعة وكفاءة تقنية RNeasy 96. يمكن زراعة الخلايا وتحليلها مباشرةً في أطباق زراعة الخلايا ذات 96 بئرًا. بعد نقل المستخلصات إلى آبار صفيحة RNeasy 96 (انظر الشكل "صفيحة RNeasy ذات 96 بئرًا")، يرتبط الحمض النووي الريبوزي (RNA) بغشاء السيليكا في كل بئر، وتُغسل الملوثات. ثم يُستخلص الحمض النووي الريبوزي (RNA) النقي في ماء خالٍ من إنزيم RNase في أنابيب تجميع فردية مناسبة للتخزين طويل الأمد، ويكون جاهزًا للاستخدام في أي تجربة. بما أن إجراء RNeasy يثري أنواع الحمض النووي الريبي التي يزيد طولها عن 200 نيوكليوتيد، فإن إنتاج الحمض النووي الريبي لا يشمل الحمض النووي الريبي الريبوسومي 5S أو الحمض النووي الريبي الناقل أو أنواع الحمض النووي الريبي الأخرى ذات الوزن الجزيئي المنخفض.

مواصفات مجموعة RNeasy 96 BioRobot 8000

إجراء

يتم عزل الحمض النووي الريبوزي الكلي (RNA) بشكل آلي بالكامل باستخدام مجموعة RNeasy 96 BioRobot 8000 على محطة عمل BioRobot 8000 أو نظام BioRobot Universal. تتميز محطة عمل BioRobot بقدرتها على تنقية الحمض النووي الريبوزي من 192 عينة في دورة واحدة. وبفضل بروتوكول اللوحة الواحدة، يُمكن للنظام إجراء كلٍ من تنقية الحمض النووي الريبوزي وإعداد التفاعل في دورة واحدة - بدءًا من مزارع الخلايا الحية في لوحات 96 بئرًا وصولًا إلى مخاليط تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR)، الجاهزة للاستخدام في تحليل التعبير الجيني في الوقت الحقيقي. تمنع رؤوس الترشيح التلوث المتبادل، وتوفر المعالجة الآلية الدقيقة أقل قدر من التباين بين الآبار وقابلية تكرار عالية. كما يُمكن إجراء تنقية الحمض النووي الريبوزي يدويًا على مشعب التفريغ QIAvac 96 و/أو نظام الطرد المركزي للوحات 96 بئرًا باستخدام مجموعة RNeasy 96.

تجمع مجموعة RNeasy 96 Universal Tissue 8000 بين التحلل الفعال القائم على الفينول/الجوانيدين والتنقية باستخدام غشاء السيليكا مع سرعة المعالجة بالتفريغ. بعد التجنيس وفصل الطور، توفر محطة عمل BioRobot 8000 أو نظام BioRobot Universal أتمتة كاملة للإجراء، لتنقية الحمض النووي الريبوزي الكلي من جميع أنواع الأنسجة الحيوانية (انظر مخطط التدفق "إجراء RNeasy 96 Universal Tissue 8000").

تُحلل الأنسجة بكفاءة عالية باستخدام كاشف QIAzol Lysis Reagent وجهاز TissueLyser II. يوفر هذا تفتيتًا سريعًا ومتوازيًا للأنسجة وتعطيلًا لإنزيمات RNase لضمان تنقية الحمض النووي الريبي (RNA) السليم. بعد فصل الطورين بالطرد المركزي، تزيل محطة عمل BioRobot الطور المائي وتضيف الإيثانول لتوفير ظروف ارتباط مناسبة. ثم تضع المحطة العينة في آبار صفيحة RNeasy 96 Universal Tissue، حيث يرتبط الحمض النووي الريبي الكلي وتُغسل الملوثات بكفاءة. بعد ذلك، يُستخلص الحمض النووي الريبي عالي الأداء في كمية صغيرة من الماء، جاهزًا للاستخدام في أي تطبيق لاحق.

التطبيقات

- تطبيقات الحمض النووي الريبوزي عالية الإنتاجية في تحليل التعبير الجيني
- تطبيقات حساسة مثل تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (RT-PCR)
- البحوث الدوائية والسمية

توفر مجموعة RNeasy 96 BioRobot 8000 باستمرار أعلى جودة من الحمض النووي الريبي (RNA) لـ:

ينتج عن الجمع بين تقنيتي QIAzol وRNeasy حمض نووي ريبوزي (RNA) عالي النقاء خالٍ من آثار الفينول. يُعدّ الحمض النووي الريبوزي (RNA) المُنقّى باستخدام مجموعة RNeasy 96 Universal Tissue 8000 مناسبًا لجميع التطبيقات اللاحقة، بما في ذلك تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي الكمي (RT-PCR).