Qiagen، 969261، Ni-NTA Superflow 96 BioRobot Kit (4)

لتحضير 4 عينات بروتين موسومة بـ 96 جزيء هيستيدين (6xHis): 4 صفائح QIAfilter 96، 4 صفائح TurboFilter 96، 1 × 100 مل Ni-NTA Superflow

سمات

- تنقية آلية بالكامل لما يصل إلى 2 ملغ من البروتين لكل بئر
- بروتين عالي النقاء خالٍ من التلوث المتبادل
- التنقية في ظل الظروف الطبيعية أو ظروف التشويه

تفاصيل المنتج

توفر مجموعة Ni-NTA Superflow 96 BioRobot تنقية آلية لما يصل إلى 300 ميكروغرام من البروتين المؤتلف من 96 عينة بالتوازي (بروتوكول قياسي، حجم مزرعة 5 مل لكل عينة). تتدفق مستخلصات الخلايا البكتيرية المصفاة إلى صفيحة ترشيح محملة مسبقًا بـ Ni-NTA Superflow بواسطة محطة عمل BioRobot. ترتبط وحدة كروماتوغرافيا التقارب الفريدة هذه، ذات 96 بئرًا، بقوة وانتقائية بالبروتينات الموسومة بالهيستيدين. تتوفر بروتوكولات جاهزة للتنفيذ للتنقية في الظروف الطبيعية أو ظروف التشويه.

أداء

البروتين الموسوم بالهيستيدين: إجمالي الناتج لكل بئر (ميكروغرام)*
البروتين الفلوري الأخضر: 4000
بوليميراز الحمض النووي الريبي T7: 1000
GroES: 300
أسيتيل ترانسفيراز الكلورامفينيكول: 2400
GroEL: 740
عامل نخر الورم ألفا: 1600
GroES/GroEL: 1200
Cpn-10: 170

استجابةً لاحتياجات العملاء للحصول على كميات أكبر من البروتين من خلال الإجراءات الآلية، قامت شركة QIAGEN بتطوير بروتوكول Ni-NTA Superflow 96 BioRobot لتمكين معالجة أحجام أكبر من المزارع الخلوية وتنقية ما يصل إلى 2 ملغ من البروتين الموسوم بالهيستيدين لكل بئر. يُتيح رفع كمية راتنج Ni-NTA Superflow المستخدم في الإجراء إلى 200 ميكرولتر لكل بئر، بالإضافة إلى تحسين تركيبة محلول التحلل، معالجة ما يصل إلى 25 مل (للتنقية في الظروف الطبيعية) أو 15 مل (للتنقية في ظروف التمسخ) من المزارع الخلوية (بروتوكولات عالية الإنتاجية). تُنقل المزارع الخلوية إلى كتل مكونة من 24 بئراً للمعالجة. تُؤدي الزيادة المُقابلة في الكتلة الحيوية إلى زيادة إنتاجية البروتين النقي الموسوم بالهيستيدين لكل بئر (انظر الجدول والشكل: كميات البروتين الموسوم بالهيستيدين بالمليغرام لكل بئر)، مما يسمح بإجراء تحليلات متعددة على نفس دفعة البروتين وتقليل العدد الإجمالي لتحضيرات البروتين المطلوبة، انظر أيضاً الشكل: فحص استنساخ التعبير الآلي. توفر عملية التنقية أحادية الخطوة بروتينات عالية النقاء على نطاق واسع من العوائد، كما أن تنقية المركبات البروتينية الكبيرة أمر ممكن.

مبدأ

يعتمد نظام تنقية البروتينات QIA express Ni-NTA، بما في ذلك مجموعة Ni-NTA Superflow 96 BioRobot، على الانتقائية الفائقة لراتنج Ni-NTA (حمض النيتريلوترياسيتيك النيكل) الحاصل على براءة اختراع، وذلك للبروتينات التي تحتوي على علامة تقارب مكونة من ستة بقايا هيستيدين أو أكثر - علامة His. تتيح هذه التقنية تنقية أي بروتين موسوم بعلامة His تقريبًا بخطوة واحدة من أي نظام تعبير، سواء في الظروف الطبيعية أو ظروف التشويه. يتميز راتنج NTA، الذي يحتوي على أربعة مواقع استخلاب لأيونات النيكل، بقدرته على الارتباط بالنيكل بقوة أكبر من أنظمة التنقية التي تعتمد على استخلاب المعادن، والتي لا تحتوي إلا على ثلاثة مواقع متاحة للتفاعل مع أيونات المعادن. يمنع موقع الاستخلاب الإضافي تسرب أيونات النيكل، مما ينتج عنه قدرة ارتباط أكبر وتحضيرات بروتينية ذات نقاء أعلى من تلك التي يتم الحصول عليها باستخدام أنظمة التنقية الأخرى التي تعتمد على استخلاب المعادن. يمكن استخدام نظام QIA express لتنقية البروتينات الموسومة بعلامة His من أي نظام تعبير، بما في ذلك الفيروسات الباكولية، وخلايا الثدييات، والخميرة، والبكتيريا. (انظر الشكل تنقية البروتين باستخدام نظام تنقية البروتين Ni-NTA).

إجراء

المواد المسببة لتغير لون المنظفات
6 مولار غوانيدين هيدروكلوريد: 2% تريتون إكس-100
8 مولار يوريا: 2% توين 20
1% CHAPS: 20 ملي مول TCEP

تتألف عملية تنقية البروتينات الموسومة بالهيستيدين من أربع مراحل: تحلل الخلايا، والارتباط، والغسل، والإذابة، وهي أساس مجموعة Ni-NTA Superflow BioRobot (انظر الشكل Ni-NTA Superflow 96 BioRobot Kit). لا تعتمد تنقية البروتينات المؤتلفة باستخدام نظام QIA express على البنية ثلاثية الأبعاد للبروتين أو وسم 6xHis. يتيح ذلك تنقية البروتين بخطوة واحدة في ظروف طبيعية أو ظروف مُفسِّخة، من محاليل مخففة ومستخلصات خام. يمكن استخدام عوامل مُفسِّخة قوية ومنظفات لإذابة وتنقية المستقبلات، والبروتينات الغشائية، والبروتينات التي تُشكِّل أجسامًا مُتضمنة بكفاءة. يمكن إضافة كواشف تسمح بإزالة الملوثات المرتبطة بشكل غير نوعي بكفاءة إلى محاليل الغسل (انظر الجدول). تُستخلص البروتينات المنقاة في ظروف معتدلة بإضافة 100-250 ملي مول من الإيميدازول كمُنافس أو عن طريق خفض الرقم الهيدروجيني.

مجموعة Ni-NTA Superflow 96 BioRobot مخصصة للاستخدام مع محطات عمل BioRobot 3000 أو 8000 أو 9600.

التطبيقات

- دراسات هيكلية ووظيفية
- التبلور لتحديد البنية ثلاثية الأبعاد
- فحوصات تتضمن تفاعلات البروتين مع البروتين وتفاعلات البروتين مع الحمض النووي
- التحصين لإنتاج الأجسام المضادة

يوفر نظام تنقية البروتين QIA express Ni-NTA تنقية موثوقة للبروتينات في خطوة واحدة، وهو مناسب للعديد من التطبيقات، بما في ذلك: