Product Description
١٠٠ ميكرولتر من إنزيم T4 DNA Ligase بتركيز ٥ وحدات/ميكرولتر، ٢٠٠ ميكرولتر من محلول T4 Ligation Buffer بتركيز ١٠x، ٨٠ ميكرولتر من محلول ATP (٢٥ ملي مولار)، ٢٠٠ ميكرولتر من محلول PEG بتركيز ٥٠٪. درجة حرارة التخزين: يُحفظ في درجة حرارة -٢٠ درجة مئوية.
سمات
- يحفز تكوين رابطة فوسفودايستر بين طرفي 5′-فوسفات و3′-هيدروكسيل المتجاورين
- يتميز بربط سريع وفعال للغاية لقطع الحمض النووي ذات النهايات المتماسكة أو غير المتماسكة المتوافقة.
تفاصيل المنتج
إنزيم T4 DNA Ligase MBG هو إنزيم مُعاد التركيب يعتمد على ATP، تم عزله من سلالة بكتيريا الإشريكية القولونية، ويُستخدم لاستنساخ الحمض النووي. يحفز هذا الإنزيم تكوين رابطة فوسفاتية ثنائية الإستر بين طرفي 5′-فوسفات و3′-هيدروكسيل المتجاورين في الحمض النووي المزدوج (DNA أو RNA). يقوم هذا الإنزيم بربط كلٍ من شظايا الحمض النووي المقيدة ذات النهايات غير المتداخلة والمتداخلة، كما يُصلح الشقوق أحادية السلسلة في الحمض النووي المزدوج (DNA أو RNA) أو هجائن الحمض النووي/الحمض النووي.
يتم تزويده بـ 10 ملي مولار من Tris-HCl (الأس الهيدروجيني 7.4)، و0.1 ملي مولار من EDTA، و50 ملي مولار من KCl، و1 ملي مولار من DTT، و50% (حجم/حجم) من الجلسرين.
تحفز وحدة واحدة (وايس) من إنزيم T4 DNA Ligase تحويل 1 نانومول من 32P من البيروفوسفات إلى مادة قابلة للامتصاص بواسطة نوريت في 30 دقيقة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. وحدة وايس الواحدة تعادل حوالي 200 وحدة طرفية متماسكة.
أداء
الفحص: المواصفات
تلوث بإنزيم ديوكسي ريبونيوكلياز: لم يتم الكشف عن أي تلوث
نشاط الإكسونوكلياز: لم يتم الكشف عن أي نشاط.
نشاط الإندونوكلياز: لم يتم الكشف عن أي نشاط.
مبدأ
- يجب إذابة محلول الربط 10x ومحلول ATP وإعادة تعليقهما في درجة حرارة الغرفة.
- بالنسبة لعمليات الربط ذات النهايات غير المتداخلة، استخدم كميات أكبر من كل من الناقل والحمض النووي المُدخل.
- بالنسبة لعمليات الربط ذات النهايات المتماسكة اللزجة، نوصي بتسخين كل من الناقل والحمض النووي المُدخل قبل الربط.
- يمكن تحسين كفاءة التحويل الكهربائي عن طريق تعطيل إنزيم T4 DNA Ligase MBG بالحرارة وتنقية الحمض النووي من خلال طريقة تنقية عمود الدوران.
- نوصي باستخدام فائض مولاري من الحمض النووي المُدخل بمقدار 3-10 مولار مقارنة بالحمض النووي الناقل.
- يتم تثبيط الإنزيم بتركيزات تزيد عن 200 ملي مولار من كلوريد الصوديوم أو كلوريد البوتاسيوم.
- قم بتعطيل الإنزيم عند درجة حرارة 65 درجة مئوية لمدة 10 دقائق أو عند درجة حرارة 70 درجة مئوية لمدة 5 دقائق.
يحفز إنزيم T4 DNA Ligase تكوين رابطة فوسفاتية ثنائية الإستر بين نهايتي 5′-فوسفات و3′-هيدروكسيل المتجاورتين في الحمض النووي المزدوج (DNA أو RNA). ويقوم هذا الإنزيم بربط كل من شظايا الحمض النووي المقيدة ذات النهايات غير المتداخلة والنهايات المتداخلة، كما يُصلح الشقوق أحادية السلسلة في الحمض النووي المزدوج (DNA) أو الحمض النووي الريبي (RNA) أو هجائن الحمض النووي/الحمض النووي الريبي (DNA/RNA).
إجراء
ضبط الجودة
يُقاس نشاط إنزيم T4 DNA ligase في تفاعل يحتوي على 1 ميكروغرام من الحمض النووي لفيروس لامدا البكتيري المهضوم بواسطة إنزيم HindIII، ومحلول T4 Ligation Buffer بتركيز 1x، وكميات متفاوتة من الإنزيم، لمدة 20 دقيقة عند درجة حرارة 16 درجة مئوية. تُحلل النتائج باستخدام الرحلان الكهربائي على هلام الأغاروز. المنتج خالٍ من النيوكليازات غير المتخصصة بالحمض النووي.
تم تقييم أنشطة الإكسونوكلياز والإندونوكلياز عن طريق الفصل الكهربائي الهلامي بعد حضانة 1 ميكروغرام من الحمض النووي مع الإنزيم في حجم 50 ميكرولتر لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية.
التطبيقات
- الاستنساخ الجزيئي لمنتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل أو أجزاء التقييد
- الطفرات الموجهة للموقع
- إصلاح الشقوق في الحمض النووي المزدوج، أو الحمض النووي الريبي، أو هجائن الحمض النووي/الحمض النووي الريبي
- التدوير الذاتي للحمض النووي الخطي
- طرق تفاعل البوليميراز المتسلسل المعتمد على الربط (LM PCR)
يُستخدم هذا في تطبيقات مثل:
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924