كياجين، EN31-005، dsDNase HL (500 وحدة)

التركيز: ≥2 وحدة/ميكرولتر. مدة الصلاحية: 36 شهرًا. درجة حرارة التخزين: -20 درجة مئوية بدون دورة إذابة. للتخزين طويل الأمد، يُحفظ في درجة حرارة -80 درجة مئوية.

سمات

- نشط للغاية في نطاق واسع من درجات الحرارة (10-47 درجة مئوية)
- يوفر نشاطًا في درجات الحرارة المنخفضة لحماية الحمض النووي الريبي أو البروتينات
- يتميز بنشاطه العالي في تركيبات المحاليل المنظمة النموذجية، وله نطاق واسع من الرقم الهيدروجيني مع درجة حموضة مثالية تتراوح بين 7.0 و 8.0
- يتطلب ما لا يقل عن 2 ملي مول من أيونات المغنيسيوم (Mg2+) لتحقيق النشاط الأمثل
- يمتلك تعطيلًا لا رجعة فيه عند درجة حرارة منخفضة (15 دقيقة عند 52 درجة مئوية، 1 ملي مول من DTT)

تفاصيل المنتج

إنزيم dsDNase HL (500 وحدة) هو إنزيم نووي داخلي مُعاد التركيب، حساس للحرارة، بوزن جزيئي 43.3 كيلو دالتون، مُستخلص من كائن حقيقي النواة يعيش في المياه الباردة، ويُعبَّر عنه في خميرة Pichia pastoris. يتميز هذا الإنزيم بنشاط نوعي عالٍ تجاه الحمض النووي المزدوج، تاركًا الحمض النووي أحادي السلسلة أو الحمض النووي الريبي دون تلف في الظروف القياسية.

يتم تزويده بـ 20 ملي مولار من Tris-HCl، درجة الحموضة 8.0؛ 20 ملي مولار من NaCl؛ 2 ملي مولار من MgCl2؛ 1 ملي مولار من CaCl2؛ 50% (حجم/حجم) من الجلسرين.

تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم التي تسبب زيادة في الامتصاص عند 260 نانومتر بمقدار 1.0 في 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية في محلول منظم Tris-HCl بتركيز 50 ملي مولار، ودرجة حموضة 8.0 (25 درجة مئوية) مضافًا إليه 5 ملي مولار من MgCl2، و0.1 مليغرام/مل من BSA، و0.5 مليغرام/مل من DNA الحيوانات المنوية للرنجة كركيزة.

أداء

الفحص: المواصفات
نقاء البروتين: >90%
نشاط إنزيم RNase: لم يتم الكشف عن أي نشاط
النشاط البروتيني: لم يتم الكشف عن أي نشاط

مبدأ

يمكن تعطيل إنزيم dsDNase HL بسرعة عن طريق المعالجة الحرارية في درجات حرارة معتدلة. وهو مُصمم للاستخدام في التطبيقات التي يؤثر فيها وجود الحمض النووي المزدوج (dsDNA) على نتائج التجارب الحساسة للحرارة. كما أنه مفيد لتنقية عينات الحمض النووي الريبوزي (RNA) أو البروتين بسرعة وأمان من الحمض النووي الملوث.

يقوم الإنزيم بتحليل روابط الفوسفودايستر مما ينتج عنه قليل النوكليوتيدات مع مجموعة فوسفات 5′ ومجموعة هيدروكسيل 3′.

إجراء

ضبط الجودة

تم تحديد تركيز البروتين عن طريق قياس الكثافة الضوئية للرحلان الكهربائي SDS-PAGE باستخدام اختبار الكشف عن Coomassie Blue.

تم تحديد وجود نشاط RNase بعد حضانة 5 وحدات من dsDNase HL مع 1 ميكروغرام من الحمض النووي الريبي الكلي حقيقي النواة في حجم 20 ميكرولتر لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية.

تم تحديد وجود النشاط البروتيني بواسطة SDS-PAGE مع الكشف عن Coomassie Blue بعد حضانة 1 ميكروغرام من BSA مع 100 وحدة من الإنزيم لمدة 20 ساعة عند 37 درجة مئوية.

يُحضن حجم تفاعل 1.575 مل يحتوي على حمض نووي منوي لسمك الرنجة كركيزة لمدة 30 دقيقة عند درجة حموضة 8 ودرجة حرارة 37 درجة مئوية مع إنزيم يُحلل الحمض النووي إلى قليل النوكليوتيدات القابلة للذوبان في الأحماض. وحدة واحدة من الإنزيم تُسبب زيادة في الامتصاص عند الطول الموجي 260 بمقدار 1.0.

التطبيقات

- هضم الحمض النووي المزدوج (dsDNA) للبلازميد والحمض النووي الجينومي
- تنقية سريعة لعينات الحمض النووي الريبي والبروتين
- تطهير مزيج تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) ومزيج تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR) وغيرها من الكواشف التشخيصية
- تحلل قالب الحمض النووي في تفاعلات النسخ

يُستخدم هذا في تطبيقات مثل: