Product Description
التركيز: ≥20 وحدة/ميكرولتر. مدة الصلاحية: 36 شهرًا. درجة حرارة التخزين: -20 درجة مئوية بدون دورة إذابة الجليد.
سمات
- نشط في نطاق واسع من درجات الحرارة (10-80 درجة مئوية) ونطاق واسع من الرقم الهيدروجيني (الأمثل عند الرقم الهيدروجيني 6.0-9.0)
- نشط للغاية عند تركيزات الملح المرتفعة وغيرها من إضافات المحاليل المنظمة النموذجية
- يتطلب كاتيونات ثنائية التكافؤ (Mg 2+ و Ca 2+) لتحقيق أقصى قدر من النشاط
- يُحلل الحمض النووي المزدوج إلى أجزاء يقل طولها عن 10 نيوكليوتيدات
- النشاط تجاه الحمض النووي المزدوج أعلى بألف مرة على الأقل من النشاط تجاه الحمض النووي المفرد
تفاصيل المنتج
إنزيم dsDNase هو إنزيم نووي داخلي مُعاد التركيب، يبلغ وزنه الجزيئي 42.8 كيلو دالتون، مُستخلص من القشريات البحرية، ويُعبَّر عنه في خميرة Pichia pastoris. يتميز هذا الإنزيم بنشاط نوعي عالٍ تجاه الحمض النووي المزدوج، تاركًا الحمض النووي أحادي السلسلة أو الحمض النووي الريبي دون تلف في الظروف القياسية. كما يتميز dsDNase بنشاطه العالي في نطاق واسع من درجات الحرارة، وظروف المحاليل المنظمة، ودرجات الحموضة.
هذه الميزات تجعل dsDNase مفيدًا للغاية للتحلل السريع والآمن للحمض النووي الجينومي، حيث يكون غياب الريبونوكلياز أمرًا بالغ الأهمية للحفاظ على سلامة الحمض النووي الريبي.
يقوم الإنزيم بتحليل روابط الفوسفودايستر مما ينتج عنه قليل النوكليوتيدات مع مجموعة فوسفات 5′ ومجموعة هيدروكسيل 3′.
يتم تزويده بـ 20 ملي مولار من Tris-HCl، درجة الحموضة 8.0؛ 50 ملي مولار من KCl؛ 5 ملي مولار من MgCl2؛ 50% (حجم/حجم) من الجلسرين.
تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم التي تسبب زيادة في الامتصاص عند 260 نانومتر بمقدار 1.0 في 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية ودرجة حموضة 8.0 باستخدام الحمض النووي لحيوانات الرنجة المنوية كركيزة.
أداء
الفحص: المواصفات
نقاء البروتين: >95%
نشاط إنزيم RNase: لم يتم الكشف عن أي نشاط
نشاط البروتياز: لم يتم الكشف عن أي نشاط.
مبدأ
النشاط المحدد مشابه لـ DNase I البقري؛ ومع ذلك، يتميز dsDNase بثبات أعلى في ظروف التفاعل والتخزين الصعبة (مثل المحاليل المنظمة عالية الملح والمنظفات ودرجة الحرارة المرتفعة).
يعتمد التركيز الأمثل لإنزيم dsDNase في مزيج التفاعل النهائي على عدة عوامل (مستوى تلوث الأحماض النووية، ودرجة حرارة ومدة الحضانة، وتركيز الأملاح، والمركبات الأخرى الموجودة في مزيج التفاعل). يجب تحديد كمية إنزيم dsDNase وظروف الحضانة تجريبياً (نوصي باستخدام 35 وحدة من إنزيم dsDNase لهضم ما يصل إلى 50 ميكروغرام من الحمض النووي المزدوج عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 10-15 دقيقة).
في وجود أيونات المغنيسيوم (Mg²⁺) أو الكالسيوم (Ca²⁺)، يُظهر إنزيم dsDNase نشاطًا عاليًا في قطع الحمض النووي المزدوج (dsDNA)، بينما يبقى الحمض النووي أحادي السلسلة (ssDNA) والحمض النووي الريبي (RNA) سليمين. يزيد وجود أيونات الكالسيوم من النشاط الكلي لإنزيم dsDNase. في وجود أيونات المنغنيز (Mn²⁺)، يُظهر الإنزيم نشاطًا مرتفعًا نسبيًا في قطع الحمض النووي المزدوج، بما في ذلك نشاطه تجاه الحمض النووي أحادي السلسلة والحمض النووي الريبي. يُنصح بتجنب استخدام أيونات المنغنيز أثناء تنقية الحمض النووي الريبي أو الحمض النووي أحادي السلسلة.
يعتمد تعطيل إنزيم dsDNase على تركيز العامل المختزل، ومدة التعطيل، ودرجة الحرارة. نوصي بتعطيل هذا الإنزيم عن طريق حضانته عند درجة حرارة 85 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة بوجود عوامل مختزلة مثل DTT أو TCEP (بتركيز 1-10 ملي مولار). يتطلب الإنزيم تركيزًا يتراوح بين 1 و10 ملي مولار من DTT أو TCEP ليتم تعطيله تمامًا. بدلاً من ذلك، يمكن تعطيل إنزيم dsDNase وإزالته باستخدام عمود طرد مركزي أو استخلاص الفينول/الكلوروفورم.
إجراء
ضبط الجودة
تم تحديد تركيز البروتين بواسطة الرحلان الكهربائي SDS-PAGE باستخدام اختبار الكشف عن Coomassie Blue.
تم تحديد وجود نشاط RNase عن طريق الفصل الكهربائي الهلامي بعد حضانة 1 ميكروغرام من الحمض النووي الريبي الكلي حقيقي النواة مع 10 وحدات من الإنزيم في حجم 20 ميكرولتر لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية.
تم تحديد وجود نشاط البروتياز بواسطة SDS-PAGE مع الكشف عن Coomassie Blue بعد حضانة 1 ميكروغرام من BSA مع 100 وحدة من الإنزيم لمدة 20 ساعة عند 37 درجة مئوية.
يُحضن حجم تفاعل 1.575 مل يحتوي على حمض نووي منوي لسمك الرنجة كركيزة لمدة 30 دقيقة عند درجة حموضة 8 ودرجة حرارة 37 درجة مئوية مع إنزيم يُحلل الحمض النووي إلى قليل النوكليوتيدات القابلة للذوبان في الأحماض. وحدة واحدة من الإنزيم تُسبب زيادة في الامتصاص عند الطول الموجي 260 بمقدار 1.0.
التطبيقات
- استخلاص وتنقية الحمض النووي الريبي (RNA)
- إزالة الحمض النووي الجينومي الملوث من عينات الحمض النووي الريبوزي (RNA)
- تحلل قالب الحمض النووي في تفاعلات النسخ
- تقليل اللزوجة في العينات البيولوجية
- إزالة الحمض النووي المتبقي أثناء عزل الخلايا الجذعية الأولية، وإجراءات التصنيع الحيوي والمعالجة الحيوية
يُستخدم هذا في تطبيقات مثل:
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924