شركة كياجين، L6030-WL، إنزيم ربط WGS (24 تفاعلًا)

144,000 وحدة من إنزيم T4 DNA Ligase (600,000 وحدة/مل) ومحلول الربط السريع 5X

سمات

- محلول منظم مصمم خصيصًا لربط محولات NGS
- يربط الأطراف غير الحادة والمتماسكة بكفاءة
- يُصلح الشقوق أحادية السلسلة في الحمض النووي المزدوج، والحمض النووي الريبي، والهجائن بين الحمض النووي والحمض النووي الريبي

تفاصيل المنتج

تم تحسين إنزيم WGS Ligase لربط الحمض النووي بعد تجزئة WGS. يحفز هذا الإنزيم تكوين رابطة فوسفودايستر بين مجموعة الفوسفات الطرفية 5' ومجموعة الهيدروكسيل 3' في الحمض النووي المزدوج (DNA أو RNA). يربط الإنزيم بكفاءة النهايات غير المتداخلة والمتماسكة، ويصلح الشقوق أحادية السلسلة في الحمض النووي المزدوج (RNA) أو الحمض النووي (RNA) أو الحمض النووي الهجين (DNA/RNA).

متوفر في: 10 ملي مولار من Tris-HCl، 50 ملي مولار من KCl، 1 ملي مولار من ثنائي ثيوتريتول، 0.1 ملي مولار من EDTA، 50% جلسرين، درجة الحموضة 7.5 عند 25 درجة مئوية

مُرفق مع المنتج: 5x محلول ربط سريع (B9020): 330 ملي مولار Tris-HCl، 50 ملي مولار MgCl2، 5 ملي مولار DTT، 5 ملي مولار ATP، 30% PEG 6000، درجة الحموضة 7.6 عند 25 درجة مئوية

أداء

الاختبار: المواصفات
نقاء SDS: >99%
النشاط النوعي: 300,000 وحدة/ملغ
إنزيم إكسونوكلياز أحادي السلسلة: أقل من 1.0% مُحرر
إنزيم إكسونوكلياز مزدوج السلسلة: أقل من 1.0% مُحرر
إنزيم نوكلياز مزدوج السلسلة: لا يوجد تحويل
تلوث الحمض النووي لبكتيريا الإشريكية القولونية: أقل من 10 نسخ

ملكيات:

درجة حرارة التخزين: من -25 درجة مئوية إلى -15 درجة مئوية، الوزن الجزيئي: 55292 دالتون

مبدأ

مصدر البروتين: سلالة من بكتيريا الإشريكية القولونية المُعاد تركيبها تحمل جين T4 DNA Ligase المُستنسخ

تعريف الوحدة: تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية إنزيم ربط الحمض النووي (DNA Ligase) اللازمة لربط 50% من 100 نانوغرام من شظايا الحمض النووي ذات النهايات المتماسكة في 50 ميكرولتر من محلول منظم إنزيم ربط الحمض النووي (1X DNA Ligase Buffer) بعد حضانة لمدة 30 دقيقة عند درجة حرارة 23 درجة مئوية.

إجراء

راجع الدليل في قسم الموارد.

تحليل مراقبة الجودة:

يُقاس نشاط الوحدة باستخدام طريقة التخفيف التسلسلي الثنائي. تم تحضير تخفيفات دفعة الإنزيم في محلول منظم لتفاعل ربط الحمض النووي (1X DNA Ligase Reaction Buffer)، وأُضيفت إلى تفاعلات حجمها 20 ميكرولتر تحتوي على شظايا الحمض النووي المزدوجة ومحلول منظم لتفاعل ربط الحمض النووي (1X DNA Ligase Reaction Buffer). حُضنت التفاعلات لمدة 30 دقيقة عند درجة حرارة 23 درجة مئوية، ثم أُوقفت، وحُللت على هلام أجاروز بنسبة 1% مُلَوَّن ببروميد الإيثيديوم.

يتم تحديد تركيز البروتين عن طريق قياس الامتصاص عند 280 نانومتر.

يتم تقييم النقاء الفيزيائي باستخدام تقنية الفصل الكهربائي الهلامي SDS-PAGE لمحاليل الإنزيم المركزة والمخففة، متبوعةً بالكشف باستخدام صبغة الفضة. ويتم تقييم النقاء بمقارنة الكتلة الإجمالية لحزم الملوثات في العينة المركزة بكتلة حزمة البروتين المطلوب في العينة المخففة.

يتم تحديد الإكسونوكلياز أحادي السلسلة في تفاعل حجمه 50 ميكرولتر يحتوي على ركيزة DNA أحادية السلسلة موسومة إشعاعيًا و10 ميكرولتر من محلول الإنزيم الذي يتم تحضينه لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية.

يتم تحديد الإكسونوكلياز ثنائي السلسلة في تفاعل حجمه 50 ميكرولتر يحتوي على ركيزة DNA ثنائية السلسلة موسومة إشعاعيًا و10 ميكرولتر من محلول الإنزيم الذي يتم تحضينه لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية.

يتم تحديد الإندونوكلياز ذو السلسلة المزدوجة في تفاعل 50 ميكرولتر يحتوي على 0.5 ميكروغرام من الحمض النووي البلازميدي و10 ميكرولتر من محلول الإنزيم الذي يتم تحضينه لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية.

يتم تقييم تلوث E.coli 16S rDNA باستخدام عينات مكررة بحجم 5 ميكرولتر من محلول الإنزيم الذي تم فصله وفحصه في اختبار TaqMan qPCR للكشف عن وجود الحمض النووي الجينومي الملوث لـ E.coli باستخدام بادئات قليلة النوكليوتيدات المقابلة لموقع 16S rRNA.

التطبيقات

- ربط محول NGS

يُستخدم إنزيم WGS Ligase في تطبيقات البيولوجيا الجزيئية مثل: