شركة كياجين، L6060L، إنزيم ربط الحمض النووي Taq (20000 وحدة)

إنزيم Taq DNA Ligase (40,000 وحدة/مل) ومحلول منظم لإنزيم Taq DNA Ligase بتركيز 10X

سمات

- إنزيم ربط الحمض النووي المقاوم للحرارة
- يغلق الشقوق
- يميز ضد ربط عدم التطابق

تفاصيل المنتج

يحفز إنزيم Taq DNA Ligase تكوين رابطة فوسفودايستر في الحمض النووي المزدوج الذي يحتوي على نهايات 5'-فوسفوريل و 3'-هيدروكسيل متجاورة، باستخدام NAD + كعامل مساعد (1).

متوفر في: 10 ملي مولار Tris-HCl، 50 ملي مولار KCl، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 0.1% Tween-20، 50% جلسرين (درجة الحموضة 7.5 عند 25 درجة مئوية)

المرفقات: محلول منظم لربط الحمض النووي Taq 10X (B6060): 200 ملي مولار Tris-HCl، 250 ملي مولار KCl، 100 ملي مولار MgCl2، 5 ملي مولار NAD+، 0.1% Triton X-100 (الأس الهيدروجيني 7.6 عند 25 درجة مئوية)

أداء

الاختبار: الكمية المختبرة
النقاء: غير متوفر
النشاط المحدد: غير متوفر
إكسونوكلياز أحادي السلسلة: 400 وحدة
إنزيم إكسونوكلياز مزدوج السلسلة: 400 وحدة
إنزيم نوكلياز مزدوج السلسلة: 400 وحدة
تلوث الحمض النووي لبكتيريا الإشريكية القولونية: 400 وحدة

- درجة حرارة التخزين: من -25 درجة مئوية إلى -15 درجة مئوية
- الوزن الجزيئي: 76.9 كيلو دالتون

مبدأ

يتم إنتاج الإنزيم بواسطة سلالة من بكتيريا الإشريكية القولونية المؤتلفة التي تحمل جين Taq DNA Ligase المستنسخ.

يتم تعريف الوحدة الواحدة على أنها كمية Taq DNA Ligase المطلوبة لربط 50٪ من 1 ميكروغرام من النهايات المتماسكة المكونة من 12 قاعدة من Lambda DNA المقطوعة بواسطة SmaI و SalI في 50 ميكرولتر من محلول Taq DNA Ligase Buffer 1X بعد حضانة لمدة 10 دقائق عند 45 درجة مئوية.

إجراء

المكونات: التركيز النهائي
ماء خالٍ من النيوكلياز: غير متوفر
محلول منظم لربط الحمض النووي Taq بتركيز 10X (B6060): 1X
الحمض النووي: حتى 1 ميكروغرام
إنزيم ربط الحمض النووي Taq (L6060L): 80 وحدة
الحجم الكلي = 50 ميكرولتر

- حضّر مزيج التفاعل التالي بحجم إجمالي قدره 50 ميكرولتر: المكونات التركيز النهائي الحجم ماء خالٍ من النيوكلياز N/AX ميكرولتر 10X محلول منظم لربط الحمض النووي Taq (B6060) 1X 5 ميكرولتر حمض نووي حتى 1 ميكروغرام X ميكرولتر إنزيم ربط الحمض النووي Taq (L6060L) 80 وحدة 2 ميكرولتر الحجم الإجمالي = 50 ميكرولتر
- حضّن عند درجة حرارة 45 درجة مئوية لمدة 10 دقائق.

تعليمات الاستخدام

ربط النيك في الحمض النووي المزدوج

ضبط الجودة

يُقاس نشاط الوحدة باستخدام طريقة التخفيف التسلسلي الثنائي. تم تحضير تخفيفات من دفعة الإنزيم في محلول تفاعل Taq DNA Ligase بتركيز 1X، وأُضيفت إلى تفاعلات حجمها 50 ميكرولتر تحتوي على DNA مهضوم بواسطة إنزيم λ Hind III ومحلول تفاعل Taq DNA Ligase بتركيز 1X. حُضنت التفاعلات لمدة 10 دقائق عند 45 درجة مئوية، ثم أُوقفت، وحُللت على هلام أجاروز بتركيز 0.8% مُلَوَّن ببروميد الإيثيديوم.

يتم تحديد تركيز البروتين (OD 280) عن طريق امتصاص OD 280.

يتم تقييم النقاء الفيزيائي باستخدام تقنية الفصل الكهربائي الهلامي SDS-PAGE لمحاليل الإنزيم المركزة والمخففة، متبوعةً بالكشف باستخدام صبغة الفضة. ويتم تقييم النقاء بمقارنة الكتلة الإجمالية لحزم الملوثات في العينة المركزة بكتلة حزمة البروتين المطلوب في العينة المخففة.

يتم تحديد الإكسونوكلياز أحادي السلسلة في تفاعل حجمه 50 ميكرولتر يحتوي على ركيزة DNA أحادية السلسلة موسومة إشعاعيًا و10 ميكرولتر من محلول الإنزيم الذي يتم تحضينه لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية.

يتم تحديد الإكسونوكلياز ثنائي السلسلة في تفاعل حجمه 50 ميكرولتر يحتوي على ركيزة DNA ثنائية السلسلة موسومة إشعاعيًا و10 ميكرولتر من محلول الإنزيم الذي يتم تحضينه لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية.

يتم تحديد الإندونوكلياز ثنائي السلسلة في تفاعل 50 ميكرولتر يحتوي على 0.5 ميكروغرام من الحمض النووي البلازميدي و10 ميكرولتر من محلول الإنزيم ويتم تحضينه لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية.

يتم تقييم تلوث الحمض النووي الريبوزي 16S لبكتيريا الإشريكية القولونية باستخدام عينات مكررة بحجم 5 ميكرولتر من محلول الإنزيم الذي تم فصله وفحصه في اختبار TaqMan qPCR للكشف عن وجود الحمض النووي الجينومي الملوث لبكتيريا الإشريكية القولونية باستخدام بادئات قليلة النوكليوتيدات المقابلة لموقع الحمض النووي الريبوزي 16S.

التطبيقات

- الربط بدرجة حرارة عالية
- تفاعل سلسلة الليغاز
- تفاعل الكشف عن الليغاز

- تاكاهاشي، م. وآخرون (1984). مجلة الكيمياء البيولوجية 259، 10041-10047.

هذا المنتج متوفر لتطبيقات البيولوجيا الجزيئية مثل:

مراجع