Product Description
٥٠٠٠ وحدة من بوليميراز الحمض النووي الأول (١٠٠٠٠ وحدة/مل) ومحلول أزرق بتركيز ١٠ أضعاف. درجة حرارة التخزين: من -٢٥ درجة مئوية إلى -١٥ درجة مئوية
سمات
- يقوم بتخليق الحمض النووي في الاتجاه 5′-3′
- يمتلك نشاطي إكسونوكلياز 3′→5′ و 5′→3′
- يُمكّن من ترجمة النيك أثناء تخليق الحمض النووي
تفاصيل المنتج
إنزيم بوليميراز الحمض النووي الأول هو إنزيم بوليميراز محب للحرارة المعتدلة، يتميز بتخليق الحمض النووي من الطرف 5' إلى الطرف 3'، بالإضافة إلى نشاطه كإنزيم نوكلياز خارجي من الطرف 3' إلى الطرف 5' ومن الطرف 5' إلى الطرف 3'. ويتيح الجمع بين خصائص تخليق الحمض النووي وخصائص النوكلياز من الطرف 5' إلى الطرف 3' إمكانية حدوث عملية ترجمة الشقوق أثناء تخليق الحمض النووي.
يتم إنتاج البروتين بواسطة سلالة من بكتيريا الإشريكية القولونية المؤتلفة التي تحمل جين PolA.
يُزوَّد الإنزيم في محلول مكون من 25 ملي مولار من Tris-HCl، و0.1 ملي مولار من EDTA، و1.0 ملي مولار من دايثيوثريتول، و50% جلسرين، عند درجة حموضة 7.4 ودرجة حرارة 25 درجة مئوية. كما يُزوَّد بمحلول منظم أزرق 10X (B0110) يحتوي على: 500 ملي مولار من كلوريد الصوديوم، و100 ملي مولار من Tris-HCl، و100 ملي مولار من كلوريد المغنيسيوم، و10 ملي مولار من دايثيوثريتول، عند درجة حموضة 7.9 ودرجة حرارة 25 درجة مئوية.
أداء
الفحص: المواصفات
النقاء: >99%
النشاط النوعي: 6850 وحدة/ملغ
إنزيم إكسونيوكلياز أحادي السلسلة: وظيفي
إنزيم إكسونيوكلياز مزدوج السلسلة: وظيفي
إنزيم نوكلياز مزدوج السلسلة: 200 وحدة؛ لا يوجد تحويل
تلوث الحمض النووي لبكتيريا الإشريكية القولونية: 200 وحدة؛ أقل من 10 نسخ
مبدأ
إنزيم بوليميراز الحمض النووي الأول هو بوليميراز حمض نووي يعتمد على الحمض النووي، ويتميز بنشاطه الإكسونيوكليازي المتأصل من 3' إلى 5' ومن 5' إلى 3'. يزيل نشاط الإكسونيوكلياز من 5' إلى 3' النيوكليوتيدات من أمام سلسلة الحمض النووي المتنامية، مما يسمح بترجمة الشقوق.
إجراء
تتوفر تعليمات استخدام بوليميراز الحمض النووي الأول في بروتوكول المجموعة المقابل في الموارد أدناه.
ضبط الجودة
تم قياس نشاط الوحدة باستخدام طريقة التخفيف التسلسلي الثنائي. تم تحضير تخفيفات الإنزيم في محلول التفاعل الأزرق 1X، وأضيفت إلى تفاعلات حجمها 50 ميكرولتر تحتوي على حمض نووي من غدة التوتة العجلية، ومحلول التفاعل الأزرق 1X، و3H-dTTP، و100 ميكرومول من dNTPs. حُضنت التفاعلات لمدة 10 دقائق عند 37 درجة مئوية، ثم وُضعت على الجليد، وحُللت باستخدام طريقة الترسيب بحمض ثلاثي كلورو الأسيتيك (TCA).
تم تحديد تركيز البروتين عن طريق قياس الامتصاص عند 280 نانومتر.
تم تقييم النقاء الفيزيائي بواسطة SDS-PAGE عن طريق تحميل 2.0 ميكرولتر من محلول الإنزيم المركز على هلام Tris-Glycine بنسبة 4-20% محاط بعلامة MW واسعة النطاق و2.0 ميكرولتر من تخفيف العينة بنسبة 1:100.
تم تحديد الإكسونوكلياز أحادي السلسلة في تفاعل حجمه 50 ميكرولتر يحتوي على 15000 عد في الدقيقة من ركيزة الحمض النووي أحادي السلسلة المشعة و10 ميكرولتر من محلول الإنزيم الذي تم تحضينه لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية.
تم تحديد نشاط الإكسونوكلياز ثنائي السلسلة في تفاعل حجمه 50 ميكرولتر يحتوي على 15000 عد في الدقيقة من ركيزة الحمض النووي ثنائي السلسلة المشعة و10 ميكرولتر من محلول الإنزيم الذي تم تحضينه لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية.
تم تحديد نشاط الإندونوكلياز ثنائي السلسلة في تفاعل 50 ميكرولتر يحتوي على 1 ميكروغرام من الحمض النووي pBR322 و 10 ميكرولتر من محلول الإنزيم الذي تم تحضينه لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية.
تم تقييم التلوث ببكتيريا الإشريكية القولونية باستخدام عينات بحجم 5 ميكرولتر من محلول الإنزيم الذي تم فصله وفحصه في اختبار TaqMan qPCR للكشف عن وجود الحمض النووي الجينومي الملوث ببكتيريا الإشريكية القولونية باستخدام بادئات لموقع 16S rRNA.
التطبيقات
- وسم الحمض النووي عن طريق ترجمة النيك
- تخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) من السلسلة الثانية
هذا المنتج متوفر لتطبيقات البيولوجيا الجزيئية مثل:
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924