شركة كياجين، P7250L، بوليميراز الحمض النووي Taq-B (10000 وحدة)

10000 وحدة من بوليميراز Taq-B (2 مل عند 5000 وحدة/مل) و10x PCR Buffer.

سمات

- بوليميراز الحمض النووي DNA مستقر حرارياً، ومتتابع 5′→3′
- يمتلك جزءًا متأصلًا من ترجمة النيك 5′→3′
- يتفوق في تضخيم التسلسلات القصيرة (<5 كيلوبايت) من مصادر القوالب منخفضة التعقيد
- ينتج غلة وفيرة مع القليل من تحسين ظروف التفاعل أو بدونها

تفاصيل المنتج

إنزيم بوليميراز الحمض النووي Taq-B هو إنزيم بوليميراز حمض نووي مستقر حرارياً، يعمل بشكل متتابع، وينتقل من الطرف 5′ إلى الطرف 3′، وهو مستخلص من الكائن الحي المحب للحرارة Thermus aquaticus YT-1. يمتلك هذا البروتين، الذي يبلغ وزنه 94 كيلو دالتون، نشاطاً نوكليازياً خارجياً متأصلاً ينتقل من الطرف 5′ إلى الطرف 3′، ويفتقر إلى وظيفة التدقيق اللغوي من الطرف 3′ إلى الطرف 5′.

يتفوق إنزيم Taq في تضخيم التسلسلات الأقصر (<5 كيلوبايت) من مصادر القوالب ذات التعقيد المنخفض وينتج عوائد قوية مع القليل من تحسين ظروف التفاعل أو بدونها.

يتم توفير الإنزيم في محلول يحتوي على 20 ملي مولار من Tris-HCl، و100 ملي مولار من NaCl، و1 ملي مولار من DTT، و0.1 ملي مولار من EDTA، ومثبت، و50% جلسرين عند درجة حموضة 7.5 ودرجة حرارة 25 درجة مئوية.

يتم تزويده بمحلول PCR 10X (B7030) يحتوي على: 100 مليمولار Tris-HCl، 500 مليمولار KCl، 15 مليمولار MgCl2، درجة الحموضة 8.3 عند 25 درجة مئوية.

أداء

الفحص: المواصفات
النقاء: >99%
النشاط النوعي: 74,625 وحدة/ملغ
إنزيم إكسونوكلياز أحادي السلسلة: 50 وحدة؛ وظيفي
إنزيم إكسونوكلياز مزدوج السلسلة: 50 وحدة؛ فعال
إنزيم نوكلياز مزدوج السلسلة: 50 وحدة؛ لا يوجد تحويل
تلوث الحمض النووي لبكتيريا الإشريكية القولونية: 50 وحدة؛ أقل من 10 نسخ

مبدأ

يحفز الإنزيم عملية تخليق الحمض النووي من 5' إلى 3'، وليس لديه نشاط إكسونوكلياز قابل للكشف من 3' إلى 5' (التدقيق) ويمتلك نشاط إكسونوكلياز من 5' إلى 3'.

إجراء

تتوفر تعليمات استخدام بوليميراز الحمض النووي Taq-B في بروتوكول المجموعة المقابل في الموارد أدناه.

ضبط الجودة

تم قياس نشاط الوحدة باستخدام طريقة التخفيف التسلسلي الثنائي. تم تحضير تخفيفات الإنزيم في محلول منظم للتفاعل بتركيز 1X، وأُضيفت إلى تفاعلات حجمها 50 ميكرولتر تحتوي على حمض نووي من غدة التوتة العجلية، و25 ملي مولار من TAPS (الأس الهيدروجيني 9.3)، و50 ملي مولار من كلوريد البوتاسيوم، و2.0 ملي مولار من كلوريد المغنيسيوم، و1 ملي مولار من DTT، و3H-dTTP، و100 ميكرومولار من dNTPs. حُضنت التفاعلات لمدة 10 دقائق عند 75 درجة مئوية، ثم وُضعت على الجليد، وحُللت باستخدام طريقة سامبروك وراسل (الاستنساخ الجزيئي، الإصدار 3، 2001، الصفحات A8.25-A8.26).

تم تحديد تركيز البروتين عن طريق قياس الامتصاص عند 280 نانومتر.

تم تقييم النقاء الفيزيائي باستخدام تقنية الفصل الكهربائي الهلامي SDS-PAGE لمحاليل الإنزيم المركزة والمخففة، متبوعةً بالكشف باستخدام صبغة الفضة. ويتم تقييم النقاء بمقارنة الكتلة الإجمالية لحزم الملوثات في العينة المركزة بكتلة حزمة البروتين المطلوب في العينة المخففة.

تم تحديد الإكسونوكلياز أحادي السلسلة في تفاعل حجمه 50 ميكرولتر يحتوي على ركيزة DNA أحادية السلسلة موسومة إشعاعيًا و10 ميكرولتر من محلول الإنزيم الذي تم تحضينه لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية.

تم تحديد الإكسونوكلياز ثنائي السلسلة في تفاعل حجمه 50 ميكرولتر يحتوي على ركيزة DNA ثنائية السلسلة موسومة إشعاعيًا و10 ميكرولتر من محلول الإنزيم الذي تم تحضينه لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية.

تم تحديد الإندونوكلياز ثنائي السلسلة في تفاعل حجمه 50 ميكرولتر يحتوي على 0.5 ميكروغرام من الحمض النووي البلازميدي و10 ميكرولتر من محلول الإنزيم وتم تحضينه لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية.

تم تقييم التلوث ببكتيريا الإشريكية القولونية باستخدام عينات مكررة بحجم 5 ميكرولتر من محلول الإنزيم الذي تم فصله وفحصه في اختبار TaqMan qPCR للكشف عن وجود الحمض النووي الجينومي الملوث ببكتيريا الإشريكية القولونية باستخدام بادئات قليلة النوكليوتيدات المقابلة لموقع 16S rRNA.

التطبيقات

- التضخيم الروتيني لقطع الحمض النووي (DNA) باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) حتى 5 كيلوبايت
- التضخيم في المختبر
- الاستنساخ والتنميط الجيني

هذا المنتج متوفر لتطبيقات البيولوجيا الجزيئية مثل: