كياجين، P7390L، بوليميراز الحمض النووي Bst X (40000 وحدة)

40000 وحدة من بوليميراز الحمض النووي Bst X (1.0 مل عند 40000 وحدة/مل) و10x محلول تفاعل Xcelerator (1 × 7.0 مل) ومحلول كبريتات المغنيسيوم 100 ملي مولار (1 × 7.0 مل).

سمات

- بوليميراز الحمض النووي المقاوم للحرارة (Bst)
- لا يوجد نشاط إكسونوكلياز 5'→3'
- لا يوجد نشاط إكسونوكلياز 3'→5'
- يُظهر نشاطًا قويًا في إزاحة السلسلة لتحقيق أداء جيد في تقنيات التضخيم متساوي الحرارة LAMP
- اسأل عن تركيبات الجلسرين المنخفضة

تفاصيل المنتج

إنزيم بوليميراز الحمض النووي Bst X هو إنزيم بوليميراز حمض نووي مُعاد التركيب، مقاوم للحرارة، مُستخلص من بكتيريا Geobacillus، وهو مُتماثل مع إنزيم بوليميراز الحمض النووي المعروف من بكتيريا Bacillus stearothermophilus (Bst). يُشبه إنزيم Bst X إنزيم Bst بوليميراز في افتقاره لنشاط الإكسونوكلياز 5'→3' و3'→5'، ويُظهر نشاط إزاحة قوي للسلسلة، مما يُتيح له الأداء الجيد في تقنيات التضخيم المتساوي الحرارة LAMP. ومع ذلك، بالمقارنة مع إنزيم Bst بوليميراز، يُظهر Bst X سرعة تضخيم مُحسّنة، ومقاومة أعلى للملوحة، وحساسية أكبر للتفاعل.

يتم توفير بوليميراز الحمض النووي Bst X في 50 ملي مولار من كلوريد البوتاسيوم، 1 ملي مولار من ثنائي ثيوثريتول، 0.1 ملي مولار من حمض الإيثيلين ديامين رباعي الأسيتيك، <0.1% من تريتون X-100، 50% من الجلسرين و10 ملي مولار من Tris-HCl؛ درجة الحموضة 7.5 عند 25 درجة مئوية.

يتم توفير بوليميراز الحمض النووي Bst X مع محلول التفاعل Xcelerator 10x (B7390) ومحلول كبريتات المغنيسيوم 100 ملي مولار.

يحتوي محلول التفاعل 10x Bst X Xcelerator (B7390) على 2 ملي مول من كبريتات المغنيسيوم بتركيز 1x. قد يتطلب الأمر، حسب التطبيق، تعديل تركيز كبريتات المغنيسيوم من 2 ملي مول إلى 10 ملي مول.

استفسر عن تركيبات الجلسرين المنخفضة

أداء

الاختبار: المواصفات
النقاء: >99%
النشاط النوعي: 400,000 وحدة/ملغ
إنزيم إكسونوكلياز أحادي السلسلة: 4000 وحدة؛ أقل من 5.0% مُحرر
إنزيم إكسونوكلياز ثنائي السلسلة: 4000 وحدة؛ أقل من 1.0% مُحرر
إنزيم نوكلياز مزدوج السلسلة: 4000 وحدة؛ لا يوجد تحويل
تلوث الحمض النووي لبكتيريا الإشريكية القولونية: 4000 وحدة؛ أقل من 10 نسخ

- درجة حرارة التفاعل المثلى من 60 إلى 70 درجة مئوية.
- يتم تعطيله بالحرارة عند درجة حرارة 80 درجة مئوية بعد 10 دقائق من الحضانة.
- تحمل عالٍ للمنظفات غير الأيونية Tween-20 و Tween-80 و Triton X-100 و NP-40 (حتى تركيز نهائي 5٪).
- فعال في الملح بتركيز يتراوح بين 40 و125 ملي مولار. • درجة حرارة بديلة: حوالي 15% من النشاط عند 37 درجة مئوية. حوالي 5% من النشاط عند 25 درجة مئوية.

- درجة حرارة التخزين: من -25 درجة مئوية إلى -15 درجة مئوية
- الوزن الجزيئي: 66.5 كيلو دالتون

ملكيات

مبدأ

مصدر بروتين الإنزيم المؤتلف: يتم إنتاج البروتين بواسطة سلالة E. coli المؤتلفة التي تحمل جين بوليميراز الحمض النووي Bst X (exo-).

تعريف الوحدة: يتم تعريف الوحدة الواحدة على أنها كمية البوليميراز المطلوبة لتحويل 10 نانومول من dNTPs إلى مادة غير قابلة للذوبان في الأحماض في 30 دقيقة عند 65 درجة مئوية.

إجراء

يُقاس نشاط وحدة تحليل مراقبة الجودة باستخدام طريقة التخفيف التسلسلي الثنائي. تم تحضير تخفيفات من دفعة الإنزيم في محلول تفاعل بتركيز 1x، وأُضيفت إلى تفاعلات حجمها 50 ميكرولتر تحتوي على حمض نووي من غدة التوتة العجلية، ومحلول تفاعل البوليميراز المتسلسل 1x، و3H-dTTP، و100 ميكرومول من dNTPs. حُضنت التفاعلات لمدة 10 دقائق عند 65 درجة مئوية، ثم وُضعت على الجليد، وحُللت باستخدام طريقة سامبروك وراسل (الاستنساخ الجزيئي، المجلد 3، 2001، الصفحات A8.25-A8.26).

يتم تحديد تركيز البروتين عن طريق قياس الامتصاص عند 280 نانومتر.

يتم تقييم النقاء الفيزيائي باستخدام تقنية الفصل الكهربائي الهلامي SDS-PAGE لمحاليل الإنزيم المركزة والمخففة، متبوعةً بالكشف باستخدام صبغة الفضة. ويتم تقييم النقاء بمقارنة الكتلة الإجمالية لحزم الملوثات في العينة المركزة بكتلة الحزمة المقابلة للبروتين المطلوب في العينة المخففة.

يتم تحديد الإكسونوكلياز أحادي السلسلة في تفاعل حجمه 50 ميكرولتر يحتوي على ركيزة DNA أحادية السلسلة موسومة إشعاعيًا و10 ميكرولتر من محلول الإنزيم الذي يتم تحضينه لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية.

يتم تحديد نشاط الإكسونوكلياز ثنائي السلسلة في تفاعل حجمه 50 ميكرولتر يحتوي على ركيزة DNA ثنائية السلسلة موسومة إشعاعيًا و10 ميكرولتر من محلول الإنزيم الذي يتم تحضينه لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية.

يتم تحديد نشاط الإندونوكلياز ثنائي السلسلة في تفاعل حجمه 50 ميكرولتر يحتوي على 0.5 ميكروغرام من الحمض النووي البلازميدي و10 ميكرولتر من محلول الإنزيم، ويتم تحضينه لمدة 4 ساعات عند درجة حرارة 37 درجة مئوية.

يتم تقييم التلوث ببكتيريا الإشريكية القولونية باستخدام عينات مكررة بحجم 5 ميكرولتر من محلول الإنزيم الذي يتم فصله وفحصه في اختبار TaqMan qPCR للكشف عن وجود الحمض النووي الجينومي الملوث ببكتيريا الإشريكية القولونية باستخدام بادئات قليلة النوكليوتيدات المقابلة لموقع 16S rRNA.

التطبيقات

- التضخيم المتساوي الحرارة بتقنية LAMP
- التضخيم متساوي الحرارة

هذا المنتج مناسب لتطبيقات التحليل التالية.