Qiagen، P7511L، VeraSeq 2.0 بوليميراز الحمض النووي عالي الدقة (500 وحدة)

500 وحدة من إنزيم VeraSeq 2.0 عالي الدقة لبوليميراز الحمض النووي (0.25 مل عند 2000 وحدة/مل) مع 5x VeraSeq Buffer II (6 × 1.5 مل) و 5x VeraSeq GC Buffer (3 × 1.5 مل)

سمات

- دقة أعلى بخمسين مرة من بوليميراز الحمض النووي Taq
- يزيد حجم الملف بمقدار 1 كيلوبايت في 15 ثانية
- نشاط تدقيق لغوي قوي (نشاط إكسونوكلياز 3'→5')
- يعمل في تركيزات Mg2+ من 1.5 إلى 3.0 ملي مولار
- تقدم شركة QIAGEN للشراكة الاستراتيجية وتصنيع المعدات الأصلية خدمات تصنيع كميات كبيرة مخصصة من هذا الإنزيم، بما في ذلك تركيبات منخفضة الجلسرين وتركيبات بدء التشغيل الساخن.

تفاصيل المنتج

إن إنزيم VeraSeq™ 2.0 عالي الدقة لتضخيم الحمض النووي هو إنزيم بوليميراز مُهندس فائق الثبات الحراري، يوفر سرعة ودقة وكفاءة رائدة في مجال تضخيم الحمض النووي بتقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). يستطيع هذا الإنزيم المبتكر إطالة تسلسل الحمض النووي بمقدار كيلوبايت واحد في 15 ثانية، وبدقة تفوق دقة إنزيم Taq DNA بوليميراز بخمسين ضعفًا.

يتم توفيره في: 20 ملي مولار Tris·HCl، 100 ملي مولار KCl، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، مثبت و 50٪ جلسرين؛ درجة الحموضة 7.4 عند 25 درجة مئوية.

المرفقات: 5x VeraSeq™ Buffer II (B7102L) و 5x VeraSeq™ GC Buffer (B7130L).

يمكنكم أيضاً أن تسألونا عن تركيبات منخفضة الجلسرين أو تركيبات بدء التشغيل الساخن.

أداء

الاختبار: الوحدات المختبرة
النقاء: غير متوفر
النشاط المحدد: غير متوفر
إنزيم نوكلياز مزدوج السلسلة: 120 وحدة
تلوث الحمض النووي لبكتيريا الإشريكية القولونية: 150 وحدة

- درجة حرارة التخزين: من -25 درجة مئوية إلى -15 درجة مئوية

خصائص البوليميراز: معدل الاستطالة: 15 ثانية لكل كيلوبايت عند 72 درجة مئوية. التدقيق اللغوي (3' → 5' exo): نعم، قوي. ترجمة الشق (5'→3' exo): لا. الدقة: أعلى بأكثر من 50 مرة من بوليميراز الحمض النووي Taq. إزاحة السلسلة: لا. الثبات الحراري: ثبات حراري عالٍ. القدرة على استطالة بادئ الحمض النووي الريبي: لا. الاستطالة من شق: لا. توليد منتجات ذات نهايات غير لاصقة: نعم. قراءة اليوراسيل: لا.

مبدأ

مصدر بروتين الإنزيم المؤتلف: يتم إنتاج البروتين بواسطة سلالة E. coli المؤتلفة التي تحمل جين VeraSeq 2.0 المهندس.

تعريف الوحدة: تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم المطلوبة لدمج 10 نانومول من dNTPs في شكل غير قابل للذوبان في الحمض عند 74 درجة مئوية في 30 دقيقة.

مصدر بروتين الإنزيم المؤتلف: يتم إنتاج البروتين بواسطة سلالة E. coli المؤتلفة التي تحمل جين VeraSeq™ 2.0 المهندس.

تعريف الوحدة: تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم المطلوبة لدمج 10 نانومول من dNTPs في شكل غير قابل للذوبان في الحمض عند 74 درجة مئوية في 30 دقيقة.

إجراء

المكون: الحجم (ميكرولتر)
الماء المعقم: متغير
5x VeraSeq™ Buffer II أو 5x VeraSeq GC Buffer: 10
مزيج dNTP بتركيز 10 ملي مولار: 1
التمهيدي 1: متغير
التمهيدي 2: متغير
قالب الحمض النووي: متغير
بوليميراز الحمض النووي VeraSeq™ 2.0: 0.5

الخطوة: درجة الحرارة
درجة حرارة التمسخ الأولية: 98 درجة مئوية
التمديد والتسخين والتسخين: 98 درجة مئوية، يختلف 72 درجة مئوية
التمديد النهائي: 72 درجة مئوية 4 درجات مئوية
قد يلزم تحسين ظروف التدوير، اعتمادًا على المنتج المضخم المطلوب.

التعقيد: مثال المصدر
منخفض: بلازميد، فيروس، BAC
مرتفع: الحمض النووي الجينومي

يُنصح باستخدام مُخزن VeraSeq™ 5X II كمُخزن افتراضي لتضخيم عالي الدقة. أما بالنسبة للقوالب الغنية بالـ GC والقوالب الصعبة، فيُرجى استخدام مُخزن VeraSeq™ GC 5X.
يتوقف إنزيم بلمرة الحمض النووي عالي الدقة VeraSeq™ 2.0 عند بقايا اليوراسيل في السلسلة القالبية، مما يمنع استمرار التمديد. لذلك، لا يُنصح باستخدام dUTP في التفاعل. في حال احتواء قوالب الحمض النووي على اليوراسيل أو الحاجة إلى دمج dUTP، يُرجى استخدام VeraSeq™ ULtra (P7520L).
- يوصى بتركيز نهائي قدره 0.2 ميكرومتر لكل بادئ، ولكن يمكن تغييره في نطاق 0.2 - 1 ميكرومتر.
- الكميات الموصى بها للقوالب: مثال على مصدر التعقيد: منخفض: بلازميد، فيروس، BAC: 1 بيكوغرام - 10 نانوغرام، عالي: الحمض النووي الجينومي: 50-250 نانوغرام
- عادةً ما تكفي وحدة واحدة لتضخيم معظم الأهداف. أما بالنسبة للأهداف الطويلة (>1 كيلوبايت)، أو القوالب الصعبة، أو لزيادة الإنتاج، فقد يكون من الضروري إضافة ما يصل إلى وحدتين من الإنزيم.
- تم تركيب كل من محلول VeraSeq™ 5X buffer II ومحلول GC buffer لتوفير تركيز نهائي 1X من كلوريد المغنيسيوم (MgCl2) مقداره 1.5 ملي مولار. في حال الحاجة إلى إضافة أيونات المغنيسيوم (Mg2+)، يتم تعديل التركيز النهائي لأيونات المغنيسيوم بزيادات قدرها 0.2 ملي مولار.
بالنسبة للقوالب الغنية بـ GC، يمكن استخدام ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) لتقليل البنية الثانوية للقوالب المعقدة. يُستخدم DMSO عادةً بتركيز نهائي 3% (حجم/حجم). في حال الحاجة إلى تحسين إضافي، يُضبط التركيز بزيادات تتراوح بين 1-2% (2-9% في التفاعل النهائي). يجب خفض درجة حرارة تلدين البادئ لمراعاة وجود المذيب.
- إن إنزيم VeraSeq™ 2.0 عالي الدقة لبوليميراز الحمض النووي متوافق أيضًا مع إضافات أخرى معززة لتفاعل البوليميراز المتسلسل، مثل BSA والبيتين.

يجب اتخاذ الاحتياطات العامة عند تحضير تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR)، بما في ذلك تحضير التفاعل على الجليد، وإضافة البوليميراز في النهاية، والتقليب اللطيف باستخدام الماصة، والخلط الجيد، والطرد المركزي السريع. يمكن استخدام الإجراء التالي كدليل إرشادي. قد يلزم تحسين التفاعلات بشكل فردي.

إعداد التفاعل (لحجم 50 ميكرولتر)

يمكن تعديل حجم التفاعل الكلي حسب الحاجة.

ظروف ركوب الدراجات النموذجية

ملاحظات الاستخدام:

تحليل مراقبة الجودة

تم قياس نشاط الوحدة باستخدام طريقة التخفيف التسلسلي الثنائي. تم تحضير تخفيفات الإنزيم في محلول منظم للتفاعل بتركيز 1x، وأُضيفت إلى تفاعلات حجمها 50 ميكرولتر تحتوي على حمض نووي منزوع من غدة التوتة العجلية؛ و25 ملي مولار من TAPS (حمض ثلاثي-[هيدروكسي ميثيل]-ميثيل-أمينو-بروبان سلفونيك، ملح الصوديوم)، عند درجة حموضة 9.3 ودرجة حرارة 25 درجة مئوية؛ و50 ملي مولار من كلوريد البوتاسيوم؛ و2 ملي مولار من كلوريد المغنيسيوم؛ و1 ملي مولار من بيتا-ميركابتوإيثانول؛ و200 ميكرومولار من كل من dATP وdGTP وdTTP؛ و100 ميكرومولار من [3H]-dCTP (0.075 كوري/ملي مول). تم خلط أوعية التفاعل وحُضنت عند درجة حرارة 74 درجة مئوية لمدة 10 دقائق.

يتم تحديد تركيز البروتين عن طريق قياس الامتصاص عند 280 نانومتر.

يتم تقييم النقاء الفيزيائي باستخدام تقنية الفصل الكهربائي الهلامي SDS-PAGE لمحاليل الإنزيم المركزة والمخففة، متبوعةً بالكشف باستخدام صبغة الفضة. ويتم تقييم النقاء بمقارنة الكتلة الإجمالية لحزم الملوثات في العينة المركزة بكتلة الحزمة المقابلة للبروتين المطلوب في العينة المخففة.

يتم تحديد نشاط الإندونوكلياز ثنائي السلسلة في تفاعل حجمه 50 ميكرولتر يحتوي على 0.5 ميكروغرام من الحمض النووي البلازميدي و10 ميكرولتر من محلول الإنزيم، ويتم تحضينه لمدة 4 ساعات عند درجة حرارة 37 درجة مئوية.

يتم تقييم تلوث الحمض النووي الريبوزي 16S لبكتيريا الإشريكية القولونية باستخدام عينات مكررة بحجم 5 ميكرولتر من محلول الإنزيم الذي يتم فصله وفحصه في اختبار TaqMan qPCR للكشف عن وجود الحمض النووي الجينومي الملوث لبكتيريا الإشريكية القولونية باستخدام بادئات قليلة النوكليوتيدات المقابلة لموقع الحمض النووي الريبوزي 16S.

التطبيقات

- تضخيم عالي الدقة
- تضخيم طويل
- الاستنساخ
- البيولوجيا التركيبية

هذا المنتج متوفر لتطبيقات البيولوجيا الجزيئية التالية: