Qiagen، P7520L، VeraSeq ULtra DNA Polymerase (500 U)

500 وحدة من إنزيم VeraSeq ULtra DNA Polymerase، و5X VeraSeq Buffer II، و5X VeraSeq GC Buffer.

سمات

- اقرأ واستخدم بقايا اليوراسيل بأقصى سرعة ودقة
- بوليميراز فائق الثبات الحراري
- دقة أعلى بـ 25 مرة من بوليميراز الحمض النووي Taq
- يعمل في تركيزات Mg2+ من 1.5 إلى 3.0 ملي مولار
- وظيفة تدقيق لغوي قوية (إنزيم نوكلياز خارجي 3'-5')
- تقدم شركة QIAGEN خدمات تصنيع كميات كبيرة من إنزيم VeraSeq ULtra DNA Polymerase بتركيبات مخصصة، بما في ذلك التركيبات منخفضة الجلسرين أو التركيبات ذات البدء الساخن.

تفاصيل المنتج

إن إنزيم VeraSeq™ ULtra DNA Polymerase هو إنزيم بوليميراز مُهندس، فائق الثبات الحراري، قادر على قراءة اليوراسيل، مصمم لزيادة سرعة ودقة وطول عملية تخليق الحمض النووي أثناء تحضير قالب التسلسل. والنتيجة هي إنزيم جديد قادر على قراءة اليوراسيل، وتمديد كيلوبايت واحد من التسلسل في 15 ثانية، وبدقة أعلى بـ 25 مرة من إنزيم Taq DNA Polymerase.

يتم توفيره في: 20 ملي مولار Tris-HCl، 100 ملي مولار KCl، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، مثبت و 50٪ جلسرين؛ درجة الحموضة 7.4 عند 25 درجة مئوية.

المرفقات: 5X VeraSeq™ Buffer II (B7102L) و 5X VeraSeq™ GC Buffer (B7130L).

يمكنكم الاستفسار منا عن تركيبات منخفضة الجلسرين أو تركيبات بدء التشغيل الساخن.

أداء

الاختبار: الوحدات المختبرة
النقاء: غير متوفر
النشاط المحدد: غير متوفر
إنزيم نوكلياز مزدوج السلسلة: 120 وحدة
تلوث الحمض النووي لبكتيريا الإشريكية القولونية: 150 وحدة

خصائص البوليميراز: معدل الاستطالة: 15 ثانية لكل كيلوبايت عند 72 درجة مئوية. التدقيق اللغوي (إكسو 3'-5'): نعم، قوي. ترجمة الشق (إكسو 5'-3'): لا. الدقة: أعلى بأكثر من 25 مرة من بوليميراز الحمض النووي Taq. إزاحة السلسلة: لا. الثبات الحراري: ثبات حراري عالٍ. القدرة على استطالة بادئ الحمض النووي الريبي: لا. الاستطالة من شق: لا. توليد نهايات غير لاصقة: نعم. قراءة اليوراسيل: نعم. درجة حرارة التخزين: من -25 درجة مئوية إلى -15 درجة مئوية.

مبدأ

مصدر بروتين الإنزيم المؤتلف: يتم إنتاج البروتين بواسطة سلالة E. coli المؤتلفة التي تحمل جين VeraSeq™ ULtra المهندس.

تعريف الوحدة: تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم المطلوبة لدمج 10 نانومول من dNTPs في شكل غير قابل للذوبان في الحمض عند 74 درجة مئوية في 30 دقيقة.

إجراء

المكون: الحجم (ميكرولتر)
الماء المعقم: متغير
محلول VeraSeq™ 5X II أو محلول VeraSeq™ GC 5X: فائق
مزيج dNTP بتركيز 10 ملي مولار: 1
التمهيدي 1: متغير
التمهيدي 2: متغير
قالب الحمض النووي: متغير
بوليميراز الحمض النووي VeraSeq™ ULtra: 0.5

الخطوة: درجة الحرارة
درجة حرارة التمسخ الأولية: 98 درجة مئوية
التمسخ والتلدين والتمديد: 98 درجة مئوية، يختلف 72 درجة مئوية
التمديد النهائي: 72 درجة مئوية 4 درجات مئوية
قد يلزم تحسين ظروف التدوير، اعتمادًا على المنتج المضخم المطلوب.

التعقيد: مثال المصدر
منخفض: بلازميد، فيروس، BAC
مرتفع: الحمض النووي الجينومي

يجب اتخاذ الاحتياطات العامة عند تحضير تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، بما في ذلك تحضير التفاعل على الجليد، وإضافة البوليميراز في النهاية، والتقليب اللطيف باستخدام الماصة، والخلط الجيد، والطرد المركزي السريع. يمكن استخدام الإجراء التالي كدليل إرشادي. قد يلزم تحسين التفاعلات بشكل فردي.

يمكن تعديل حجم التفاعل الكلي حسب الحاجة

ملاحظات الاستخدام:

1. يُنصح باستخدام محلول VeraSeq™ Buffer II بتركيز 5X كمحلول افتراضي للتضخيم عالي الدقة. بالنسبة للقوالب الغنية بالـ GC والقوالب الصعبة، استخدم محلول VeraSeq™ GC Buffer بتركيز 5X. 2. يمكن استخدام إنزيم VeraSeq™ 2.0 ULtra DNA Polymerase في تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) لإنتاج منتجات تحتوي على ديوكسي يوريدين عن طريق إضافة dUTP إلى التفاعل. إذا كان قالب الحمض النووي يحتوي على يوراسيل أو إذا كانت هناك حاجة لإضافة dUTP، فاستخدم VeraSeq Ultra (P7520L). 3. يُوصى بتركيز نهائي قدره 0.2 ميكرومولار لكل بادئ، ولكن يمكن تغييره في نطاق 0.2-1 ميكرومولار. 4. كميات القالب الموصى بها:

5. عادةً ما تكفي وحدة واحدة لتضخيم معظم الأهداف. أما بالنسبة للأهداف الطويلة (>1 كيلوبايت)، أو القوالب الصعبة، أو لزيادة الإنتاج، فقد يكون من الضروري إضافة ما يصل إلى وحدتين من الإنزيم.

٦. تم تركيب كل من محلول VeraSeq™ Buffer II بتركيز ٥X ومحلول GC لتوفير تركيز نهائي ١X من كلوريد المغنيسيوم (MgCl₂) مقداره ١.٥ ملي مولار. في حال الحاجة إلى إضافة أيونات المغنيسيوم (Mg²⁺)، يتم تعديل التركيز النهائي لأيونات المغنيسيوم (Mg²⁺) بزيادات قدرها ٠.٢ ملي مولار.

٧. بالنسبة للقوالب الغنية بـ GC، يمكن استخدام ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) لتقليل البنية الثانوية للقوالب المعقدة. يُستخدم DMSO عادةً بتركيز نهائي 3% (حجم/حجم). في حال الحاجة إلى تحسين إضافي، يُضبط التركيز بزيادات تتراوح بين 1-2% (2-9% في التفاعل النهائي). يجب خفض درجة حرارة تلدين البادئ لمراعاة وجود المذيب.

8. إن إنزيم VeraSeq™ ULtra DNA Polymerase متوافق أيضًا مع إضافات أخرى معززة لتفاعل البوليميراز المتسلسل، مثل BSA والبيتين.

تحليل مراقبة الجودة

تم قياس نشاط الوحدة باستخدام طريقة التخفيف التسلسلي الثنائي. تم تحضير تخفيفات الإنزيم في محلول منظم للتفاعل بتركيز 1X، وأُضيفت إلى تفاعلات حجمها 50 ميكرولتر تحتوي على حمض نووي منزوع من غدة التوتة العجلية؛ و25 ملي مولار من TAPS (حمض ثلاثي [هيدروكسي ميثيل]-ميثيل-أمينو-بروبان سلفونيك، ملح الصوديوم) عند درجة حموضة 9.3 ودرجة حرارة 25 درجة مئوية؛ و50 ملي مولار من كلوريد البوتاسيوم؛ و2 ملي مولار من كلوريد المغنيسيوم؛ و1 ملي مولار من بيتا-ميركابتوإيثانول؛ و200 ميكرومولار من كل من dATP وdGTP وdTTP؛ و100 ميكرومولار من [3H]-dCTP (0.075 كوري/ملي مول). تم خلط أوعية التفاعل وحُضنت عند درجة حرارة 74 درجة مئوية لمدة 10 دقائق.

يتم تحديد تركيز البروتين عن طريق قياس الامتصاص عند 280 نانومتر.

يتم تقييم النقاء الفيزيائي باستخدام تقنية الفصل الكهربائي الهلامي SDS-PAGE لمحاليل الإنزيم المركزة والمخففة، متبوعةً بالكشف باستخدام صبغة الفضة. ويتم تقييم النقاء بمقارنة الكتلة الإجمالية لحزم الملوثات في العينة المركزة بكتلة الحزمة المقابلة للبروتين المطلوب في العينة المخففة.

يتم تحديد نشاط الإندونوكلياز ثنائي السلسلة في تفاعل حجمه 50 ميكرولتر يحتوي على 0.5 ميكروغرام من الحمض النووي البلازميدي و10 ميكرولتر من محلول الإنزيم، ويتم تحضينه لمدة 4 ساعات عند درجة حرارة 37 درجة مئوية.

يتم تقييم تلوث الحمض النووي الريبوزي 16S لبكتيريا الإشريكية القولونية باستخدام عينات مكررة بحجم 5 ميكرولتر من محلول الإنزيم الذي يتم فصله وفحصه في اختبار TaqMan qPCR للكشف عن وجود الحمض النووي الجينومي الملوث لبكتيريا الإشريكية القولونية باستخدام بادئات قليلة النوكليوتيدات المقابلة لموقع الحمض النووي الريبوزي 16S.

التطبيقات

- تضخيم الحمض النووي عالي الدقة
- الاستنساخ
- البيولوجيا التركيبية

هذا المنتج متوفر لتطبيقات البيولوجيا الجزيئية مثل: