Product Description
لـ 250 تفاعلًا: مزيج إنزيم StableScript™ 10X (0.5 مل) ومحلول تفاعل StableScript™ 4X (2 × 1.5 مل)
سمات
- القدرة على إجراء عمليات متعددة مع الحفاظ على الحساسية والنوعية
- مُصاغ باستخدام إنزيم النسخ العكسي StableScript™ مع تحسين الثبات الحراري، والقدرة على المعالجة، ومقاومة المثبطات
- يكشف عن كميات ضئيلة تصل إلى 0.1 بيكوغرام من الحمض النووي الريبي في اختبار رباعي متعدد
- اتساق ممتاز بين الدفعات
تفاصيل المنتج
مزيج StableScript™ One-Step RT-qPCR هو تركيبة عالية الكفاءة والحساسية للكشف عن الحمض النووي DNA والحمض النووي الريبي RNA باستخدام مجسات التحلل المائي. يحتوي مزيج الإنزيمات بتركيز 10X على مزيج من إنزيم النسخ العكسي الجديد الخالي من RNAse H، والذي يتميز بثبات حراري ومقاومة عالية للمثبطات (StableScript™)، وإنزيم بوليميراز الحمض النووي DNA سريع التنشيط (Phoenix™)، ومُحسِّنات مُحددة لزيادة الحساسية ومقاومة المثبطات.
يتم تزويد مزيج StableScript™ One-Step RT-qPCR بمحلول التفاعل StableScript™ 4X B7720L، الذي يحتوي على dNTPs والمغنيسيوم.
أداء
- تركيبة تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR) للكشف باستخدام مجسات التحلل المائي
- مقاومة قوية للمثبطات
- القدرة على إجراء عمليات متعددة مع الحفاظ على الحساسية والنوعية
- يكشف عن كميات ضئيلة تصل إلى 0.1 بيكوغرام من الحمض النووي الريبي في اختبار رباعي متعدد
- زيادة الثبات الحراري مع تخليق مثالي للحمض النووي التكميلي (cDNA) من 50 درجة مئوية إلى 65 درجة مئوية
- مستقر على سطح الطاولة طوال الليل
- نطاق ديناميكي ممتاز على مجموعة متنوعة من أنظمة التحليل
- اتساق استثنائي بين الدفعات
- درجة حرارة التخزين: من -25 درجة مئوية إلى -15 درجة مئوية
مزيج StableScript™ One-Step RT-qPCR هو مزيج من إنزيم النسخ العكسي StableScript™ وإنزيم بوليميراز الحمض النووي Taq Hot Start Phoenix™. تم تصميم إنزيم النسخ العكسي StableScript™ لزيادة ثباته الحراري. يمكن أن تساعد زيادة درجة حرارة تخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) في التغلب على صعوبة استهداف الحمض النووي الريبوزي (RNA)، لأن درجات الحرارة المرتفعة تساعد على فك بنية الحمض النووي الريبوزي، مما يقلل من احتمالية إعاقة النسخ العكسي.
إن إنزيم Phoenix™ Polymerase هو بوليميراز Taq DNA مُعاد التركيب، مُقاوم للحرارة، مُرتبط بجسم مضاد مُعادل غير مُستقر حراريًا. تُعزز هذه الخاصية، التي تعتمد على بدء التفاعل الساخن بوساطة الجسم المضاد سريع التنشيط، الخصوصية والحساسية والإنتاجية الإجمالية لتفاعل PCR عن طريق تقليل التضخيم غير النوعي وتكوين ثنائيات البادئات قبل بدء دورات التفاعل. بالاشتراك مع StableScript™، يُنتج Phoenix™ مزيج StableScript™ One-Step RT-qPCR، وهو مزيج RT-qPCR فائق الحساسية.
خصائص الخلطة
إجراء
المكونات: الحجم/التفاعل
محلول التفاعل StableScript™ بتركيز 4X: 5 ميكرولتر
مزيج البادئ/المسبار: X ميكرولتر
مزيج إنزيم StableScript™ بتركيز 10 أضعاف: 2 ميكرولتر
قالب الحمض النووي الريبوزي: حتى 2 ميكرولتر
ماء خالٍ من النيوكلياز: حتى حجم تفاعل نهائي قدره 20 ميكرولتر
برنامج ركوب الدراجات القياسي* الخطوات: درجة الحرارة
النسخ العكسي: 55 درجة مئوية
تنشيط Taq/التمسخ الأولي: 95 درجة مئوية
التمسخ: 95 درجة مئوية
التلدين/التمديد*: 60 درجة مئوية
يجب إذابة محلول التفاعل 4X StableScript™ تمامًا ثم رجه جيدًا لمدة 3-5 ثوانٍ لضمان مزجه تمامًا. قم بتدويره بسرعة لجمع المحتويات.
- حضّر مزيج البادئات/المجسات. يُوصى بتركيز نهائي يتراوح بين 0.4 و0.9 ميكرومولار لكل بادئ، وبين 0.1 و0.5 ميكرومولار للمجس. مع ذلك، يجب تحديد التركيز الأمثل للبادئات/المجسات تجريبيًا لكل اختبار.
- حدد عدد التفاعلات المراد تحضيرها، بما في ذلك عينات التحكم بدون قالب (NTCs). أضف 10% حجمًا إضافيًا لتعويض الفاقد أثناء النقل بالماصة.
اتبع الجدول أدناه لإعداد مزيج التفاعل. يُنصح بإعداد مزيج رئيسي لتقليل التباينات والأخطاء المحتملة. المكونات الحجم/التفاعل التركيز النهائي 4X محلول التفاعل StableScript™ 5 ميكرولتر 1X مزيج البادئ/المسبار X ميكرولتر متغير 10X مزيج الإنزيم StableScript™ 2 ميكرولتر 1X قالب الحمض النووي الريبي حتى 2 ميكرولتر 1X من 1 بيكوغرام إلى 1 ميكروغرام من الحمض النووي الريبي الكلي ماء خالٍ من النيوكلياز حتى حجم تفاعل نهائي 20 ميكرولتر -
- أغلق صفيحة تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وقم بتدويرها لفترة وجيزة لجمع المحتويات في الأسفل.
إعداد تفاعل StableScript™ One Step RT-qPCR
ينبغي اتخاذ الاحتياطات العامة اللازمة لمنع تحلل قالب الحمض النووي الريبي (RNA) عند تحضير التفاعل، بما في ذلك استخدام ماء خالٍ من النيوكلياز، ومثبط إنزيم الريبونيوكلياز (RNase)، وأنابيب تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) خالية من النيوكلياز، ورؤوس ماصة معقمة مزودة بمرشح، وإضافة إنزيم النسخ العكسي في النهاية، والتقليب اللطيف بالماصة، والخلط الجيد، والطرد المركزي السريع. يمكن استخدام الإجراء التالي كدليل إرشادي، وقد يلزم تحسين كل تفاعل على حدة.
ظروف التدوير الحراري:
يُوصى ببرمجة ظروف ركوب الدراجات كما يلي.
*يمكن تعديل معلمات الدورة (وخاصة حالة التلدين/التمديد) لتناسب فحوصات محددة.
تحليل مراقبة الجودة
يتم تقييم فعالية اختبار RT-PCR من خلال تضخيم ثلاثة نسخ mRNA في اختبار RT-qPCR أحادي الخطوة. تتم مقارنة عتبة التضخيم (Ct) للدفعة المختبرة مع دفعة مرجعية.
ملحوظات:
تم اختبار مكونات الإنزيم قبل تحضير المزيج الرئيسي، وثبت خلوها من أي ملوثات من الإنزيمات الداخلية والخارجية. بلغت نقاوة الإنزيم أكثر من 99% وفقًا لتحليل SDS-PAGE، وتم تأكيد وجود تلوث ضئيل جدًا بالحمض النووي الجينومي لبكتيريا الإشريكية القولونية بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR). تم التحقق من النشاط النوعي لكل تركيبة إنزيمية قبل تحضيرها.
التطبيقات
- تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي بخطوة واحدة.
- تحليل التعبير الجيني لأهداف الحمض النووي الريبي
- الكشف عن الحمض النووي DNA والحمض النووي الريبي RNA وتحديد كميتهما
هذا المنتج متوفر لتطبيقات البيولوجيا الجزيئية مثل:
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924