كياجين، RP107B-500، بروتينيز K (500 مل)

درجة نقاء بيولوجيا جزيئية: سائل شفاف عديم اللون. التخزين: يُحفظ في درجة حرارة -20 درجة مئوية، أو +4 درجات مئوية، أو في درجة حرارة الغرفة. لا يُخزن في درجة حرارة أعلى من 25 درجة مئوية. تجنب التعرض المباشر للأشعة فوق البنفسجية/أشعة الشمس.

سمات

- نشاط عالٍ في درجات حرارة مرتفعة (تصل إلى 56 درجة مئوية) وفي ظل ظروف التشويه
- يتميز بثباته ضمن نطاق واسع من الرقم الهيدروجيني يتراوح بين 4.0 و12.5، مما يجعله مناسبًا للاستخدام في مجموعة متنوعة من التطبيقات.
- نقاء استثنائي مع كمية منخفضة من الحمض النووي المضيف، إنزيم معاد تركيبه، لضمان عدم حدوث تلوث بالتفاعلات المتبادلة في تقنيات التسلسل الجيني من الجيل التالي/التشخيص.

تفاصيل المنتج

إن بروتينيز K هو بروتين سيرين مرتبط بالسبتيليزين مشتق من Parengyodontium album (Tritirachium album) وهو نشط في ظل مجموعة واسعة من ظروف التفاعل، بما في ذلك درجات الحرارة المرتفعة ووجود كبريتات دوديسيل الصوديوم (SDS).

وهو إنزيم ببتيداز داخلي واسع النطاق ذو نشاط نوعي عالٍ للغاية يسمح بهضم فعال للغاية للبروتينات، بما في ذلك DNases و RNases، أثناء تحضير الأحماض النووية دون المساس بسلامة الحمض النووي DNA أو RNA المعزول.

يُستخلص الإنزيم من خميرة Pichia pastoris، ويخضع لعملية تنقية مكثفة للحصول على منتج عالي الجودة. تعمل تقنية تنقية إضافية على زيادة الذوبانية بشكل ملحوظ (بمقدار 2.5 ضعف)، ورفع النشاط النوعي، وإنتاج نقاء فائق مع محتوى DNA ≤ 0.1 بيكوغرام/مليغرام لبروتينيز K فائق النقاء.

إن بروتينيز K خالٍ من الإكسونوكليازات والإندونوكليازات والريبونوكليازات.

تم تطوير بروتينيز K فائق النقاء بتقنية تنقية إضافية مما أدى إلى زيادة كبيرة في قابلية ذوبانه (2.5 ضعف)، وزيادة النشاط النوعي، ونقاء ملحوظ مع محتوى DNA ≤0.1 بيكوغرام/مليغرام.

تقوم وحدة واحدة من بروتينيز K بتحليل الهيموجلوبين المتضرر باليوريا مما ينتج عنه لون يعادل 1 ميكرومول من التيروسين لكل دقيقة واحدة عند 37 درجة مئوية ودرجة حموضة 7.5 (طريقة فولين وسيوكالتو)، 1 وحدة = 1 ملي أنسون يو.

أداء

اختبار: مواصفات مسحوق ومحلول بروتينيز ك
محتوى البروتين: >70%
الذوبان في الماء: ≥20 ملغم/مل
النشاط: ≥30 وحدة/ملغ من المجفف بالتجميد، ≥40 وحدة/ملغ من البروتين، ≥800 وحدة/مل من السائل
محتوى الحمض النووي: ≤10 بيكوغرام/مليغرام ≤200 بيكوغرام/مليلتر
إنزيم إكسونيوكلياز أحادي السلسلة: لم يتم الكشف عنه
إنزيم إكسونيوكلياز مزدوج السلسلة: لم يتم الكشف عنه
إنزيم نوكلياز مزدوج السلسلة: لم يتم الكشف عنه

مبدأ

- لم يتم الكشف عن أي نشاط للإكسونوكلياز أو الإندونوكلياز أو الريبونوكلياز
- الذوبان في الماء ≥ 20 ملغم/مل؛ النشاط ≥ 30 وحدة/ملغ من المجفف بالتجميد؛ النشاط النوعي ≥ 40 وحدة/ملغ من البروتين؛ محتوى البروتين ≥ 70%؛ محتوى الحمض النووي ≤ 10 بيكوغرام/ملغ
- شروط الشحن: درجة حرارة الغرفة

- لم يتم الكشف عن أي نشاط للإكسونوكلياز أو الإندونوكلياز أو الريبونوكلياز
- التركيز ≥ 20 ملغم/مل؛ النشاط ≥ 800 وحدة/مل؛ محتوى الحمض النووي ≤ 200 بيكوغرام/مل؛ الحمل الميكروبي ≤ 1 وحدة تشكيل مستعمرة/مل
- شروط الشحن: درجة حرارة الغرفة
- محلول التخزين: 10 ملي مولار من Tris-HCl، درجة الحموضة 7.5؛ 1 ملي مولار من (CH3COO)2Ca؛ 50% جلسرين

- لم يتم الكشف عن أي نشاط للإكسونوكلياز أو الإندونوكلياز أو الريبونوكلياز
- الذوبان في الماء ≥ 50 ملغم/مل؛ النشاط ≥ 35 وحدة/ملغم من المجفف بالتجميد؛ النشاط النوعي ≥ 45 وحدة/ملغم من البروتين؛ محتوى البروتين ≥ 70%
- محتوى الحمض النووي ≤ 0.1 بيكوغرام/مليغرام
- شروط الشحن: درجة حرارة الغرفة

بروتينيز K هو بروتين سيرين واسع الطيف مُعاد التركيب، بوزن جزيئي 28.9 كيلو دالتون، مُستخلص من طحلب Parengyodontium album (Tritirachium album)، ويُعبَّر عنه في خميرة Komagataella phaffii (Pichia pastoris). يُستخدم هذا البروتين لهضم البروتينات وإزالة الملوثات أثناء تحضير الأحماض النووية. يقوم البروتينيز K بكسر الرابطة الببتيدية المجاورة لمجموعة الكربوكسيل في الأحماض الأمينية الأليفاتية والعطرية وغيرها من الأحماض الأمينية الكارهة للماء. نظرًا لخصوصيته الواسعة وثباته العالي في نطاق واسع من درجات الحموضة والحرارة، يُستخدم بروتينيز K بشكل روتيني في العديد من تطبيقات البيولوجيا الجزيئية، مثل عزل الحمض النووي DNA والحمض النووي RNA عالي الوزن الجزيئي، وعزل الحمض النووي الريبي RNA، وعزل الحمض النووي الريبي RNA، وعزل الحمض النووي الريبي RNA، وعزل الحمض النووي الريبي RNA، وعزل الحمض النووي الريبي RNA، وعزل الحمض النووي الريبي RNA. كما يُستخدم أيضًا للهضم الفعال للبروتينات التركيبية والكروماتين، وتعطيل النيوكليازات والحمض النووي الريبي RNA.

يُعدّ تحضير العينات بجودة عالية خطوة أساسية قبل التحليل الجزيئي الفعلي للمادة الوراثية. تشمل هذه العملية مراحل متعددة، مثل عزل العينة وتنقيها وتركيز المنتج المستهدف، حيث يلعب بروتينيز K دورًا هامًا. على الرغم من استخدام كواشف متنوعة في هذه العملية، ينبغي التركيز مبدئيًا على بروتينيز K، الذي تضمن جودته المعتمدة نقاءً عاليًا للأحماض النووية المختبرة.

مسحوق بروتينيز ك

مسحوق بروتينيز K عبارة عن مسحوق أبيض مجفف بالتجميد، يتميز بنشاطه العالي وتجانسه الاستثنائي بين الدفعات (انظر الشكل "تجانس عالي بين دفعات مسحوق بروتينيز K")، مما يضمن إمكانية تكرار النتائج في ظروف عمل مستقرة، ونتائج تجريبية موثوقة وقابلة للتكرار. يتميز مسحوق بروتينيز K بثباته العالي عند تخزينه في درجة حرارة -20 درجة مئوية (انظر الشكل "ثبات مسحوق بروتينيز K").

مواصفات مسحوق بروتينيز ك:

محلول بروتينيز ك

محلول بروتينيز K سائل شفاف عديم اللون يتميز بثباته على المدى الطويل عند تخزينه في درجة حرارة الغرفة. لا حاجة للتبريد (انظر الشكل "محلول بروتينيز K عالي الثبات"). تضمن عملية التصنيع المعتمدة اتساقًا عاليًا بين الدفعات (انظر الشكل "محلول بروتينيز K عالي الاتساق بين الدفعات").

مواصفات محلول بروتينيز ك:

بروتينيز ك فائق النقاء

بروتينيز K فائق النقاء عبارة عن مسحوق أبيض مجفف بالتجميد يتميز بنشاط وذوبان متزايدين للتطبيقات الأكثر تطلبًا ومحتوى منخفض من الحمض النووي للتطبيقات الحساسة وعدم وجود تلوث متبادل.

مواصفات بروتينيز K فائق النقاء:

إجراء

ضبط الجودة

تم تحديد تركيز البروتين عن طريق قياس الامتصاص عند 280 نانومتر.

تم تحديد وجود الإكسونوكلياز عن طريق الفصل الكهربائي الهلامي لـ 1 ميكروغرام من الحمض النووي λ المهضوم بواسطة HindIII مع 50 ميكروغرام من البروتينيز K المحضون لمدة 16 ساعة عند 37 درجة مئوية.

تم تحديد وجود الإندونوكلياز عن طريق الفصل الكهربائي الهلامي لـ 1 ميكروغرام من الحمض النووي pUC19 مع 40 ميكروغرام من البروتينيز K الذي تم تحضينه لمدة 16 ساعة عند 37 درجة مئوية.

تم تحديد وجود نشاط RNase عن طريق الفصل الكهربائي الهلامي لـ 2 ميكروغرام من rRNA من E. coli مع 20 ميكروغرام من البروتينيز K المحضون لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية.

الاستخدام

تحضير محلول بروتياز K المركز

محاليل بتركيز 20 ملغم/مل: استخدم الماء النقي للاستخدام الفوري.

المحاليل بتركيز 20-50 ملغم/مل: استخدم 50 ملي مولار من Tris-HCl، درجة الحموضة = 7.5-8.0، 1-5 ملي مولار من Ca 2+ (كلوريد الكالسيوم، أسيتات الكالسيوم) للاستخدام الفوري؛ أو 10 ملي مولار من Tris-HCl، درجة الحموضة = 7.5-8.0، 1-5 ملي مولار من Ca 2+ (كلوريد الكالسيوم، أسيتات الكالسيوم)، 50% جلسرين للتخزين طويل الأمد.

التطبيقات

- استخلاص الحمض النووي DNA والحمض النووي الريبي RNA من مواد أولية مختلفة
- التخلص من إنزيمات DNases وRNases أثناء عزل الأحماض النووية
- تنقية العينات الملوثة ببروتينات مختلفة
- أتمتة محطات العزل

هذا المنتج متوفر لتطبيقات البيولوجيا الجزيئية مثل: