Product Description
٥٠٠ ميكرولتر من بوليميراز الحمض النووي ستوفل ٢ وحدة/ميكرولتر، ٤ × ١٫٢٥ مل من محلول ستوفل ١٠x، ٤ × ١ مل من كلوريد المغنيسيوم ٥٠ ملي مولار. درجة حرارة التخزين: -٢٠ درجة مئوية
سمات
- يُظهر أقصى أداء مع تركيبة محسّنة لمحلول التفاعل
- لا يوجد نشاط إكسونوكلياز
- ثبات حراري عالٍ؛ يبلغ نصف عمر الإنزيم 20 دقيقة عند درجة حرارة 97.5 درجة مئوية
- يقوم بتضخيم أجزاء يصل حجمها إلى 5 كيلوبايت ويترك نهايات بارزة من نوع "A".
تفاصيل المنتج
إنزيم ستوفل دي إن إيه بوليميراز هو جزء مُعاد التركيب بوزن 62.7 كيلو دالتون من إنزيم تاك دي إن إيه بوليميراز المقاوم للحرارة، والذي تم عزله من بكتيريا ثيرموس أكواتيكوس. يُوصى باستخدامه في مجموعة واسعة من التطبيقات التي تتطلب تخليق الحمض النووي في درجات حرارة عالية للغاية.
يتميز إنزيم بوليميراز الحمض النووي ستوفل بثبات حراري أعلى بمرتين تقريبًا من إنزيم بوليميراز الحمض النووي تاك نوفا. ويتطلب تركيزًا أعلى من كلوريد المغنيسيوم (MgCl₂) وقوة أيونية أقل لتحقيق النشاط الإنزيمي الأمثل. يقلل التركيز الأمثل العالي للمغنيسيوم لإنزيم بوليميراز الحمض النووي ستوفل من نوفا من الحاجة إلى تجارب تحسين المغنيسيوم، مما يُسهّل تحسين تفاعل البوليميراز المتعدد (multiplex PCR)، وهو التضخيم المتزامن لأهداف متعددة في نفس التفاعل.
يؤدي حذف ستوفل (5'→3' exo-) إلى جعل الإنزيم أكثر استقرارًا حراريًا ودقةً من إنزيم Taq كامل الطول، ويُوصى به بشدة للقوالب الغنية بالـ GC والبنية الثانوية. يجب ألا تتحلل مجسات التهجين في فحوصات Light-Cycler، وبالتالي، تتحسن دقة القياسات الكمية باستخدام جزء ستوفل الذي يفتقر إلى النشاط الإندونوكليازي.
قد يؤدي الاستقرار الحراري المتزايد لـ TaqNova Stoffel إلى تضخيم فائق للقوالب الغنية جدًا بـ GC والقوالب ذات البنية الثانوية من خلال السماح بدرجات حرارة التمسخ التي تصل إلى 98 درجة مئوية.
يتم تزويده بـ 20 ملي مولار من Tris-HCl (درجة الحموضة 8.0 عند 25 درجة مئوية)، و100 ملي مولار من KCl، و0.1 ملي مولار من EDTA، و1 ملي مولار من DTT، و0.5% (حجم/حجم) من Nonidet P40، و0.5% (حجم/حجم) من Tween 20، و50% (حجم/حجم) من الجلسرين.
تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم المطلوبة لدمج 10 نانومول من dNTPs في جزء DNA غير قابل للذوبان في 30 دقيقة عند 72 درجة مئوية في تفاعل حجمه 50 ميكرولتر.
مبدأ
يُشفّر جزء ستوفل بواسطة شكل مُعدّل من جين بوليميراز الحمض النووي لبكتيريا ثيرموس أكواتيكوس، والذي تم إدخاله في بكتيريا إشريكية قولونية. يُشفّر الجين المُعدّل جزءًا مكونًا من 540 حمضًا أمينيًا يفتقر إلى الجزء الطرفي الأميني المكون من 292 حمضًا أمينيًا من بوليميراز الحمض النووي كامل الطول من نوع TaqNova.
يكون نشاط إنزيم ستوفل DNA بوليميراز في أفضل حالاته عند انخفاض القوة الأيونية، لذا يُعد محلول ستوفل بتركيز 10x هو المحلول الأمثل والموصى به لهذا الإنزيم. قد يؤدي استخدام محلول تفاعل مختلف إلى انخفاض ملحوظ في نشاط الإنزيم. يتميز إنزيم ستوفل DNA بوليميراز بنطاق تركيز مثالي واسع لكلوريد المغنيسيوم (2.5-5 ملي مولار)، ويتطلب عمومًا تركيزات أعلى من أيونات المغنيسيوم مقارنةً بإنزيم تاك نوفا DNA بوليميراز. يُقترح البدء بتركيز 3 ملي مولار من كلوريد المغنيسيوم كنقطة بداية لتحسين بروتوكول تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR).
إجراء
ضبط الجودة
يتم تقييم التلوث بـ DNase من خلال تفاعلات PCR واسعة النطاق.
التطبيقات
- تضخيم التسلسلات القصيرة والمتوسطة الحجم
- التشخيص والتفاعل البوليميري المتسلسل المتعدد
- التنميط الجيني – يُظهر أداءً رائعًا في رسم الخرائط الجينية باستخدام البادئات ذات التسلسلات العشوائية (RAPD)
- تفاعل البوليميراز المتسلسل لتضخيم الأليلات النوعية (ASA PCR) – يعتمد التضخيم على القواعد الطرفية 3' التي تُكمل البادئ
- تمديد البرايمر
- فحوصات جهاز التدوير الضوئي بسبب نقص الإكسونوكلياز 5'-3' في الإنزيم
يُستخدم هذا في تطبيقات مثل:
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924