مجموعة التحكم في منطقة الحمض النووي الميتوكوندري (Verogen ForenSeq mtDNA Control Region Kit) من شركة Qiagen، رقم المنتج V16000085.

يتضمن جميع الكواشف الأساسية اللازمة لإجراء 48 تفاعلًا لتحضير مكتبات منطقة التحكم الكاملة للحمض النووي للميتوكوندريا

سمات

- حساسية مثالية من الحد الأدنى من مدخلات الحمض النووي
- تحسين اكتشاف المتغيرات باستخدام أجزاء صغيرة من أحدث قواعد البيانات
- دقة ممتازة للعينات المتدهورة بشدة
- تعمل إمكانية تعدد الإرسال على تعزيز الكفاءة التشغيلية بشكل أكبر

تفاصيل المنتج

توفر مجموعة ForenSeq mtDNA Control Region Kit تحضيرًا مريحًا وفعالًا لمكتبة الحمض النووي لتحليل منطقة التحكم في جينوم الميتوكوندريا (mtGenome) بأقل كمية من الحمض النووي وأعلى حساسية. بالاستفادة من تقنية ForenSeq المُثبتة، تُنتج المجموعة بيانات مُوجزة من منطقة التحكم بأكملها لتحميلها مباشرةً إلى CODIS. كما تُعزز خاصية التعددية كفاءة التشغيل دون زيادة في التكاليف أو الوقت.

أداء

الميزة: التفاصيل
حجم الهدف: منطقة تحكم الحمض النووي للميتوكوندريا 1200 زوج قاعدي
توصية بشأن كمية الحمض النووي المدخلة: 100 بيكوغرام من الحمض النووي الجينومي والحمض النووي للميتوكوندريا لكل عينة
أنواع العينات: الحمض النووي المستخلص من مجموعة من العينات المتحللة، بما في ذلك العظام والأسنان وجذع الشعرة
سعة الإرسال المتعدد الموصى بها: 3-48 مكتبة لكل تشغيل
عدد البادئات: >120
عدد المضخمات: 18
متوسط ​​حجم الأمبليكون: 118 زوجًا قاعديًا
تداخل التضخيم: ≥ 3 أزواج قاعدية
إجمالي وقت تجهيز المكتبة: 7 ساعات و45 دقيقة
مدة التدريب العملي: ساعة ونصف

- حجم متوسط ​​قصير للمنتج المضخم لتحقيق أقصى قدر من اكتشاف المتغيرات
- مُحسَّن لتحمل المُثبِّطات
- إنتاجية مرنة وقابلة للتوسع
- سير عمل متكامل لتحقيق الكفاءة المثلى للمختبر

تجمع مجموعة ForenSeq mtDNA Control Region بين فحص قوي وتقنية تسلسل رائدة في هذا المجال، وتتكامل بسلاسة مع برامج سهلة الاستخدام لتحقيق أقصى كفاءة للمختبر. تتميز آلية عمل ForenSeq mtDNA Control Region بالمرونة وقابلية التوسع لتلبية جميع متطلبات الإنتاجية، مما يسمح للمختبرات بإنتاج نتائج كاملة لمنطقة التحكم في الحمض النووي للميتوكوندريا لما يصل إلى 48 عينة في وقت واحد في أقل من يومي عمل. بالنسبة لمتطلبات الإنتاجية المنخفضة، تحافظ تفاعلات المجموعة الـ 48 على صلاحية لمدة 12 شهرًا، أما بالنسبة للمختبرات ذات الطلب العالي، فإن إجراء تحضير مكتبة مماثل يجعل التشغيل الآلي سهلاً.

إن الكثافة العالية للطفرات المتمركزة في منطقة التحكم في الحمض النووي للميتوكوندريا، وطبيعة معظم عينات الطب الشرعي المتدهورة التي يُستخدم فيها تحليل الحمض النووي للميتوكوندريا، تجعل تصميم البادئات الأمثل أمرًا صعبًا. تم تحسين مجموعة ForenSeq mtDNA Control Region لتوفير تغطية كاملة وقابلة للتنفيذ، حتى مع كميات إدخال منخفضة جدًا (انظر الشكل "يوفر نظام ForenSeq mtDNA Control Region تغطية واسعة النطاق عبر مجموعة كبيرة من كميات إدخال الحمض النووي").

لتحسين الأداء على المواد شديدة التدهور، تستخدم مجموعة ForenSeq mtDNA Control Region أكثر من 120 بادئًا، مصممة بناءً على بيانات حديثة حول متغيرات وترددات الحمض النووي للميتوكوندريا، لتوليد 18 قطعة تضخيم أولية في منطقة التحكم بالحمض النووي للميتوكوندريا. جميع قطع التضخيم الأولية أقل من 150 زوجًا قاعديًا، والعديد منها أقل من 100 زوج قاعدي - وهو أصغر متوسط ​​لحجم قطعة التضخيم في أي نظام تجاري حالي لتحليل الحمض النووي للميتوكوندريا. تتميز جميع قطع التضخيم بتداخل لا يقل عن 3 أزواج قاعدية لتجنب الفجوات في التسلسل بعد عملية التقليم المعلوماتي الحيوي بعد التشغيل. كما يتوفر نظام عازل مُحسَّن للمثبطات، مما يوفر بيئة تضخيم قوية (انظر الشكل "نظام عازل ForenSeq المُحسَّن يُحسِّن الأداء إلى أقصى حد").

مبدأ

يستخدم هذا الفحص القائم على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) قطعًا صغيرة من الحمض النووي الميتوكوندري (mtDNA) المستخلصة من أحدث قواعد بيانات الحمض النووي الميتوكوندري (mtDNA) لتحسين الكشف عن المتغيرات. ويعتمد على تقنية التراكب لتداخل هذه القطع ومنع فجوات التسلسل التي قد تؤدي إلى فقدان البيانات، خاصةً في العينات المتدهورة. وبالإضافة إلى تصميم البادئات المتراكبة، يوفر نظام عازل مُحسَّن مقاومة استثنائية للكالسيوم وحمض الهيوميك ومثبطات تفاعل البوليميراز المتسلسل الأخرى ذات الصلة.

إجراء

يوفر هذا الحل سهل الاستخدام والمتوافق مع أنظمة التشغيل الآلي سير عمل موحدًا لمجموعة متنوعة من تصميمات الدراسات التي تغطي تطبيقات متعددة. يتضمن البروتوكول طريقتين للتطبيع لتخصيص تحضير المكتبة لمجموعة واسعة من المواد المدخلة، بدءًا من الحمض النووي الجينومي عالي الجودة (gDNA) وصولًا إلى العينات المعقدة ذات المستويات المنخفضة، بينما يتيح الحد الأدنى من متطلبات المدخلات إمكانية التعامل مع أكثر العينات صعوبة. وللاستخدام الأمثل لمجموعة الكواشف وتحديد القراءات بدقة، تسمح محولات الفهرسة المتوفرة في مجموعة تحضير المكتبة بتجميع وتسلسل ما يصل إلى 48 عينة في دورة واحدة.

التطبيقات

يُعدّ الحمض النووي للميتوكوندريا مصدرًا بديلًا قويًا للمعلومات عند تلف الحمض النووي النووي أو غيابه. وبفضل استخدامه في عينات الشعر والأسنان والعظام وغيرها من المصادر الصعبة، أصبح تحليل الحمض النووي للميتوكوندريا إجراءً روتينيًا في جهود تحديد هوية المفقودين وضحايا الكوارث. في السابق، حدّت مشاكل الجودة وقابلية التوسع المرتبطة بطرق تسلسل سانجر التقليدية من استخدام الحمض النووي للميتوكوندريا في عدد محدود من المراكز المتخصصة. توفر حلول Verogen لتحليل الحمض النووي للميتوكوندريا مزيجًا فريدًا من الأداء والكفاءة وسهولة الاستخدام، مما يُمكّن أي مختبر، مهما كان حجمه، من الانتقال بتحليل الحمض النووي للميتوكوندريا من تسلسل سانجر إلى تقنية التسلسل من الجيل التالي (NGS)، أو تحسين النتائج المُستقاة من تقنيات NGS الأخرى.