كياجين، X8030L، لامدا إكسونوكلياز (10000 وحدة)

10000 وحدة (عبوة تقييم) لامدا إكسونوكلياز (2.0 مل عند 5000 وحدة/مل) و10X لامدا إكسو ريأكشن باور (1 × 1.5 مل).

سمات

- إكسونوكلياز عالي الكفاءة يعمل على النهايات غير المتداخلة والنهايات المتراجعة 5′

تفاصيل المنتج

إنزيم لامدا إكسونوكلياز هو إنزيم إكسونوكلياز عالي الكفاءة يعمل على تحلل أحد خيوط الحمض النووي المزدوج من الطرف 5' إلى الطرف 3'. يستطيع هذا الإنزيم بدء التفاعل على الحمض النووي ذي النهايات غير المتداخلة أو الحمض النووي الذي يحتوي على نهايات أحادية الشريط بارزة من الطرف 3'. يُظهر إنزيم لامدا إكسونوكلياز نشاطًا منخفضًا للغاية على الحمض النووي غير المفسفر، والحمض النووي أحادي الشريط، والحمض النووي ذي النهايات أحادية الشريط البارزة من الطرف 5'. لا يبدأ هذا الإنزيم التفاعل عند وجود قطع أو فجوة في الحمض النووي (1،2).

يتم توفيرها في: يتم توفير Lambda Exonuclease في 25 ملي مولار Tris·Cl، 50 ملي مولار NaCl، 1.0 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA و 50% جلسرين: درجة الحموضة 7.5 عند 25 درجة مئوية.

المرفق مع: 10X Lambda Exo Reaction Buffer (رقم المنتج B8030) يحتوي على 670 ملي مول من الجليسين و 25 ملي مول من MgCl 2، درجة الحموضة 9.4 عند 25 درجة مئوية.

أداء

الاختبار: الكمية المختبرة
النقاء: غير متوفر
النشاط المحدد: غير متوفر
إنزيم نوكلياز مزدوج السلسلة: 1500 وحدة
تلوث الحمض النووي لبكتيريا الإشريكية القولونية: 1500 وحدة

- درجة حرارة التخزين: من -25 درجة مئوية إلى -15 درجة مئوية
- الوزن الجزيئي: 25909 دالتون

مبدأ

يتم إنتاج البروتين بواسطة سلالة من بكتيريا الإشريكية القولونية التي تفرط في التعبير عن جين الإكسونوكلياز من العاثية لامدا.

تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لإنتاج 10 نانومول من ديوكسي ريبونوكليوتيد قابل للذوبان في الأحماض من الركيزة المزدوجة في 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية.

إجراء

المكونات: التركيز النهائي
ماء خالٍ من النيوكلياز: غير متوفر
محلول منظم تفاعل لامدا إكسو 10X (B8030): 1X
الحمض النووي: حتى 5 ميكروغرام
إنزيم لامدا إكسونوكلياز (X8030L): 5 وحدات
الحجم الكلي = 50 ميكرولتر

تعليمات الاستخدام: هضم السلسلة المفسفرة 5' من الحمض النووي المزدوج.

1. قم بإعداد خليط التفاعل التالي بحجم إجمالي قدره 50 ميكرولتر:

٢. حضّن المزيج عند درجة حرارة ٣٧ درجة مئوية لمدة ٣٠ دقيقة. ٣. يمكن إيقاف التفاعل بإضافة ١٠ ملي مول من الإيثيلين ديامين رباعي حمض الأسيتيك (EDTA) أو بحضانة المزيج عند درجة حرارة ٧٥ درجة مئوية لمدة ١٠ دقائق.

ضبط الجودة

يُقاس نشاط الوحدة باستخدام طريقة التخفيف التسلسلي الثنائي. تم تحضير تخفيفات الإنزيم في محلول التفاعل 1X، وأُضيفت إلى تفاعلات حجمها 50 ميكرولتر تحتوي على قطعة DNA موسومة بالتريتيوم بطول 1.1 كيلوبايت ومحلول تفاعل Lambda Exo 1X. حُضنت التفاعلات لمدة 10 دقائق عند 37 درجة مئوية، ثم وُضعت على الجليد، وحُللت باستخدام طريقة الترسيب بحمض ثلاثي كلورو الأسيتيك (TCA).

يتم تحديد تركيز البروتين (OD 280) عن طريق امتصاص OD 280.

يتم تقييم النقاء الفيزيائي باستخدام تقنية الفصل الكهربائي الهلامي SDS-PAGE لمحاليل الإنزيم المركزة والمخففة، متبوعةً بالكشف باستخدام صبغة الفضة. ويُقاس النقاء بمقارنة الكتلة الإجمالية لحزم الملوثات في العينة المركزة بكتلة الحزمة المقابلة للبروتين المطلوب في العينة المخففة.

يتم تحديد الإندونوكلياز ثنائي السلسلة في تفاعل 50 ميكرولتر يحتوي على 0.5 ميكروغرام من الحمض النووي البلازميدي و10 ميكرولتر من محلول الإنزيم ويتم تحضينه لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية.

يتم تقييم تلوث الحمض النووي الريبوزي 16S لبكتيريا الإشريكية القولونية باستخدام عينات مكررة بحجم 5 ميكرولتر من محلول الإنزيم بعد فصل سلسلتي الحمض النووي وفحصها في اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي TaqMan.

التطبيقات

- تنظيف تحضير البلازميد
- يُنتج الحمض النووي أحادي السلسلة من الحمض النووي الخطي ثنائي السلسلة
- يزيل بادئات الأوليغونوكليوتيدات بعد تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)

هذا المنتج متوفر لتطبيقات البيولوجيا الجزيئية مثل:

المراجع: 1. أوسوبيل، إف إم وآخرون (1987) البروتوكولات الحالية في البيولوجيا الجزيئية (جون وايلي وأولاده، إنك.) 2. ليتل، جيه دبليو (1981) تحليل تضخيم الجينات، 2، 135-145.